红细胞裂解法分离及培养大鼠骨髓间充质干细胞(英文)

背景:骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量非常少,而且与其他细胞特别是易与红细胞相混杂,因此在分离过程中需去除干扰,以获得尽可能多的高纯度的骨髓间充质干细胞。目的:采用红细胞裂解法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,同时进行生物学鉴定。设计:观察对比实验。单位:中国航天员科研训练中心航天细胞分子生物学实验室。材料:选用50只生后30d的雄性SD大鼠,体质量100g,SPF级,购自北京实验动物中心(合格证:SCXK(京)2002-0003)。DAB浓缩显色液(含过氧化氢,中杉公司),兔抗大鼠多克隆抗体(武汉博士德公司),FCS(PAA,Austria),LG-DMEM培养基(Sigma,USA)。方法:实验于2004-09/2005-09在中国航天员科研训练中心航天细胞分子生物学实验室完成。将大鼠脱臼处死,暴露骨髓腔,收集细胞悬液,采用全骨髓培养法对骨髓间充质干细胞分离与原代培养。①红细胞裂解实验:取A、B、C、D4管分别加入0.5mL过滤并充分吹打均匀后的骨髓冲洗液,分别对应加入红细胞裂解液、氯化氨2mL、磷酸盐缓冲生理盐水2mL和体积分数为0.04的乙酸溶液0.5mL,分别测量各组吸光度值及血红蛋白浓度,并观察细胞生长情况。②骨髓间充质干细胞生长曲线、倍增时间及表面标志分子表达情况的观察:根据公式:群体倍增时间(TD)=t[lg2/(lgNt-lgN0)](N0和Nt分别代表接种后和培养t小时的细胞数),计算出细胞的群体倍增时间并描绘并分析骨髓间充质干细胞第2、4、6代细胞的生长曲线;采用亚甲基兰染色测定骨髓间充质干细胞增殖情况;采用免疫细胞化学染色检测骨髓间充质干细胞表面标志分子表达情况。主要观察指标:①大鼠骨髓间充质干细胞分离和培养的观察结果。②不同处理方法对红细胞的裂解效果及其对骨髓间充质干细胞生长的影响。③第2、4、6代细胞的生长曲线及细胞倍增时间。④大鼠骨髓间充质干细胞表面标志分子表达情况。结果:①大鼠骨髓间充质干细胞的分离和培养结果:原代培养48h后大部分细胞已贴壁,72h时贴壁细胞已开始分裂增殖。7￣8d后可见有明显集落形成,之后集落迅速增多,不断扩大,互相融合,14～16d时细胞克隆生长稠密。刚传代的细胞呈球形,很快沉降贴壁,少部分圆形细胞悬浮。贴壁细胞均匀分布,3～5d增殖迅速。虽然传代后细胞形态未变,但增殖速度明显增快,约6d长满培养瓶底。②不同处理方法对红细胞的裂解效果及其对骨髓间充质干细胞生长的影响:红细胞裂解液处理组,氯化氨处理组和4%乙酸处理组的血红蛋白浓度明显高于磷酸盐缓冲生理盐水处理组,差异有显著性(P<0.01)。③不同代骨髓间充质干细胞的生长曲线观察结果:第2,4,6代细胞生长曲线基本相同,经过一两天的潜伏适应期后进入对数生长期,第5天达顶点,以后进入平台期(在第5～7天)。第6代骨髓间充质干细胞的潜伏期表现不明显骨髓间充质干细胞的群体倍增时间平均约为34h。④不同代骨髓间充质干细胞的免疫表型鉴定:各代细胞CD44和CD106染色均呈阳性,表现为棕黄色颗粒沉淀,CD34染色呈阴性。结论:采用红细胞裂解液处理骨髓冲洗液后再行接种,能提高骨髓间充质干细胞的贴壁效率,同时不影响其贴壁后的生长,是一种可行的分离方法。细胞表面标记染色鉴定证明,本实验所分离细胞是骨髓间充质干细胞。

生长猪植酸酶的磷当量研究

本文旨在研究饲粮中添加植酸酶对植酸磷利用的影响,确定生长猪的植酸酶磷当量。本试验采用单因素试验设计,以NaH2PO4.2H2O提供外源无机磷,同时添加植酸酶,设计1个低磷基础日粮、4个加磷日粮和3个加酶日粮,分别提供0.4、0.8、1.2、1.6g/kg的有效磷或500、750、1000FTU/kg植酸酶。选择96头体重22kg左右的杜长大三元杂交猪,随机等分到8个处理中。通过回归分析,建立响应指标(猪趾骨折断强度和趾骨灰分磷含量)与外源磷添加量之间的线性关系,进而确定植酸酶的磷当量值。结果表明:(1)随外源磷和植酸酶水平的提高,试验猪生产性能明显改善(P<0.05),趾骨灰分磷含量和血磷水平都极显著地升高(P<0.01);(2)无机磷添加水平与响应指标之间存在较强线性关系:y=10.79x+27.23(x-添加磷(g/kg),y-趾骨强度(kg),R2=0.92);y=1.44x+6.86(x-添加磷(g/kg),y-灰分磷(%),R2=0.99);(3)植酸酶的磷当量值与日粮中植酸酶和无机磷水平密切相关,同时也受相应指标种类的影响。本试验条件下,500、750、1000FTU/kg植酸酶分别可替代1kg玉米-豆粕日粮中0.09g、0.44g和0.72g(折断强度)或0.23g、0.58g、1.06g(灰分磷)无机磷。

植酸酶磷当量的研究

1 植酸酶活性与磷当量之间的关系 酶活指酶催化其底物能力的大小，通常用活力单位来表示。目前国际上通用的植酸酶酶活定义为37℃及pH值5．5的条件下，1min内从5．1mmol／l的植酸钠溶液中水解1μmol无机磷所需要的酶量为一个酶活单位。所谓当量关系就是不同物质之间针对某一共同性质在数量上的一种等效关系．就植酸酶的磷当量而言．其实质就是日粮中一定量外源植酸酶所能替代的无机磷的添加量。植酸酶活性的高低可以通过它的磷当量值的大小来反映，活性越高，

肌源干细胞研究进展

近年研究发现,成体骨骼肌中不但存在单能的成肌干细胞卫星细胞,而且还含有多能的肌源干细胞。肌源干细胞起源于胚胎血管祖细胞,在适当的微环境中,可分化为血细胞、成骨细胞、神经细胞等不同胚层的组织细胞。肌源干细胞的表面标志已被初步认识,对其分化的研究,及其分离纯化的技术研究正在进一步深入。文章对肌源干细胞的起源、分离纯化、表面标志、分化潜能及存在问题与展望做一综述。

奶牛子宫内膜炎

奶牛子宫内膜炎邓近平，吴登坤（江西农业大学牧医学院）奶牛子宫内膜炎发病率很高。我国１９８３～１９８６年曾对北京、上海、南宁、兰州等１６个城市４１个大中型奶牛场进行调查，结果表明，子宫内膜炎的发病率高达２０％～３０％，并且占不孕症的６８．３４％。国外许...

种公牛精清中睾酮含量与精液品质相关性探讨

本实验采用放射免疫分析法（ＲＩＡ）检测了种公牛精清中睾酮（Ｔ）含量２９头次，并对其相对应的每份精液进行了品质评定。结果表明，精清中睾酮含量平均为１４９．４９±１４１．９６ｎｇ／ｄｌ。在每头种公牛之间存在显著的个体差异，同一头种公牛，在不同的采精日期的同一时刻采精，其Ｔ含量也有显著差异，说明种公牛Ｔ的分泌具有脉冲性的特点，种公牛精清中Ｔ的含量与精液量、精子密度、活力、活率及畸形率均未见显著的相关性。

应用772型分光光度计检测公牛精子密度

40年代以来,世界各国已较普遍地采用分光光度计检测精子密度。我国自70年代中期以来,开始有应用581—G 型、721—型分光光度计检测公牛精子密度的报道。本试验应用目前我国最新代产品—722型光栅分光光度计,对公牛精子密度进行检测,旨在探寻一种灵敏度更高,快速、简便的精子密度检测方法。

莲花白鹅的繁殖性能

本文指出了莲花白鹅的繁殖性能的主要特点为：繁殖具有明显的季节性，繁殖周期长，抱窝性强，产蛋率低，但种蛋的受精率与孵化率高等。

鹅鸭蛋同机电力孵化与同箱煤油灯孵化试验

本试验将鹅鸭蛋进行了同机电力孵化与同箱煤油灯孵化，结果表明，同机电孵时，鹅鸭蛋的孵化率分别为８６．６％与８３．６％，两者差异不显著（ｎ＝５００，Ｐ＞０．０５）；同箱灯孵时，其孵化率分别为９４．８％与９２．３％，两者差异不显著（ｎ＝２００．Ｐ＞０．０５），由此，可以认为，将鹅鸭蛋进行同机电孵与同箱灯孵是可行的，并提示在广大农村，采用煤油灯孵化方便且实用。

基于IPCC Tier 1层级的中国反刍家畜胃肠道甲烷排放格局变化分析

依据政府间气候变化委员会(IPCC)2006年公布的反刍家畜胃肠道CH4排放系数(奶牛61 kg CH4头-1a-1,肉役牛47 kg CH4头-1a-1,绵羊和山羊均为5 kg CH4头-1a-1)和IPCC Tier 1计算方法,结合《中国统计年鉴》和《中国畜牧业统计年鉴》,估算了中国以及各个省份1990—2010年CH4的排放总量,绘制出中国反刍家畜胃肠道CH4排放格局及历史变化图。研究结果表明:11990—2010年期间,中国反刍家畜胃肠道CH4排放量(5.90—7.65 Tg)总体呈现先上升(1995年最高)后下降的趋势,其中肉役牛(主要是黄牛和水牛)胃肠道CH4排放量(>4.33 Tg)及其所占比例(>65%)最大。奶牛胃肠道CH4排放量及其比例呈现逐年增加的趋势,2006年(0.83 Tg,12.7%)超过山羊和绵羊胃肠道CH4排放量及其比例,成为中国反刍家畜胃肠道CH4排放第二大源。但是,奶牛单位产奶量所排放的CH4量逐年降低,表明中国奶牛饲养技术与生产性能不断提高。2中国反刍家畜胃肠道CH4排放格局呈现区域集中特点,主要集中在中西部和北部的各个省份,其中四川、内蒙古、新疆、河南、西藏、山东、河北、黑龙江、云南和甘肃等10个省份的排放量占中国排放总量的50%以上。总之,1990—2010年间,中国反刍家畜胃肠道CH4排放总量为(6.77±0.46)Tg(肉役牛为主要排放源),随时间推移呈现先上升后下降的趋势;中国反刍家畜胃肠道CH4排放的格局呈区域集中分布,中西部和北部的各个省份占60%以上。

硝酸钠和2-溴乙烷磺酸钠对山羊体外瘤胃发酵甲烷、氢气和挥发性脂肪酸生成的影响

本试验从瘤胃氢代谢生物化学过程的角度出发,研究硝酸钠和2-溴乙烷磺酸钠(BES)对瘤胃甲烷生成的抑制机制。选用2只装有永久性瘤胃瘘管的成年湘东黑山羊作为瘤胃液供体,设对照组、硝酸钠组(添加剂量分别为0.10、0.20和0.40 mg/m L)和BES组(添加剂量分别为0.63、1.26和2.52 mg/L),采用全自动体外模拟瘤胃发酵设备,进行24 h体外瘤胃发酵试验,测定产气量、氢气和甲烷的产量和含量、挥发性脂肪酸产量及组成。结果表明:与对照组相比,添加硝酸钠和BES后,甲烷产量显著降低(P<0.05),并且随添加剂量增加,呈现线性下降的变化趋势(P<0.05)。低剂量硝酸钠(≤0.20 mg/m L)对产气量、起始底物降解速率、乙酸、丙酸产量和乙丙比无显著影响(P>0.05);高剂量硝酸钠(0.40 mg/m L)显著提高了氢气产量及含量,显著降低了产气量、甲烷产量及含量、起始底物降解速率和总挥发性脂肪酸产量(P<0.05);添加BES对产气量、起始底物降解速率和总挥发性脂肪酸产量没有显著影响(P>0.05),但显著增加了氢气产量及含量(P<0.05),显著降低了乙丙比(P<0.05),发酵类型向丙酸型转变。由此可见,硝酸钠减少甲烷生成依靠其氢池和瘤胃微生物毒性作用,而BES减少甲烷生成依靠抑制甲烷产生,对气体生成和饲料的降解影响很小。

体外法研究延胡索酸对瘤胃甲烷、氢气产量和挥发性脂肪酸组成的影响

本试验旨在研究不同添加水平的延胡索酸对体外发酵甲烷、氢气产量、挥发性脂肪酸组成以及微生物数量的影响。选用3只装有永久性瘤胃瘘管的成年湘东黑山羊作为瘤胃液供体。试验采用2×4双因子试验设计,以发酵底物和延胡索酸作为影响因素,其中发酵底物分别是菊苣和玉米粉,延胡索酸设定0、3、6和12 mmol/L 4个添加水平,另外设空白组,即发酵瓶中不添加发酵底物,仅添加0、3、6和12 mmol/L延胡索酸用来矫正数据,每组2个平行,重复测定3次。采用全自动体外模拟瘤胃发酵设备,进行72 h体外模拟瘤胃发酵试验。结果表明:1)玉米粉的72 h产气量、干物质消失率均显著高于菊苣(P<0.05)。延胡索酸显著增加了72 h产气量(P<0.05),但对72 h矫正产气量(去除各个添加水平延胡索酸自身的产气量)、干物质消失率无显著影响(P>0.05)。发酵底物和延胡索酸对72 h产气量和干物质消化率不存在显著交互作用(P>0.05)。2)玉米粉的氢气产量和矫正氢气产量只有在12 h显著高于菊苣(P<0.05),而2种底物在其他时间点的氢气产量和矫正氢气产量无显著差异(P>0.05);玉米粉不同时间点甲烷产量和矫正甲烷产量均显著高于菊苣(P<0.05)。延胡索酸对不同时间点甲烷产量、矫正甲烷产量和氢气产量、氢气矫正产量均无显著影响(P>0.05)。延胡索酸和底物对不同时间点的氢气和甲烷产量不存在显著交互作用(P>0.05)。3)延胡索酸显著增加了乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸浓度(P<0.05),显著降低了乙丙比和pH(P<0.05)。但是,延胡索酸对矫正总挥发性脂肪酸浓度没有显著影响(P>0.05)。4)延胡索酸对微生物数量均没有显著影响(P>0.05)。结果提示,和菊苣相比,玉米粉富含更多易发酵碳水化合物,这有助于产生更多的气体和挥发性脂肪酸。延胡索酸可以增加体外产气量和挥发性脂肪酸浓度主要因为延胡索酸在发酵过程中自身可以代谢产生额外的气体和挥发性脂肪酸,这会使产气量和挥发性脂肪酸浓度增加,而对于发酵底物自身的降解和微生物数量没有显著影响。

大黄和大黄素对体外瘤胃发酵甲烷、氢气和挥发性脂肪酸生成的影响

本试验研究不同添加量的大黄和大黄素对体外瘤胃发酵甲烷、氢气和挥发性脂肪酸生成的影响。选用3只装有永久性瘤胃瘘管的成年浏阳黑山羊作为瘤胃液供体,设对照组(A,没有任何处理)、大黄组(B1、B2、B3和B4组,添加量分别为0.5、1.0、2.0和2.5 mg/mL)和大黄素组(C1、C2和C3组,添加量分别为0.06、0.12和0.24 mg/mL),进行24 h体外模拟瘤胃发酵试验。结果表明:1)随着添加量的增加,大黄组产气量、起始底物降解速率均呈先升高后降低的二次曲线变化趋势(P<0.05),大黄素组均呈线性下降的变化趋势(P<0.05);2)与对照组相比,添加大黄(≥1.0 mg/mL)和大黄素显著降低了甲烷产量,并随其添加量的增加呈线性下降的变化趋势(P<0.05);3)与对照组相比,添加大黄(≥2.0 mg/mL)和大黄素(≥0.24 mg/mL)后,氢气含量(发酵瓶顶部空间)及产量显著增加(P<0.05),并随其添加量的增加呈线性上升的变化趋势(P<0.05);4)与对照组相比,添加大黄(≥1.0 mg/mL)和大黄素显著降低了乙丙比,并随其添加量的增加呈线性下降的变化趋势(P<0.05)。结果提示,适当添加大黄(≤1.0 mg/mL)没有改变起始底物降解速率,可能不会影响反刍家畜对饲料的降解、消化和利用;而大黄素会显著降低起始底物降解速率,影响反刍家畜对饲料饲草的降解、消化和利用。添加大黄(≥1.0 mg/mL)和大黄素,可以降低甲烷的生成,增加氢气产量,并且改变瘤胃的发酵模式,使其向丙酸发酵型转变。

延胡索酸对妊娠后期山羊营养物质表观消化率、瘤胃挥发性脂肪酸含量、血清生化指标和繁殖性能的影响

本试验旨在研究延胡索酸对妊娠后期山羊营养物质表观消化率、瘤胃挥发性脂肪酸含量、血清生化指标和繁殖性能的影响。选用20只体重(36.5±2.5) kg、2～3岁、处于妊娠期90 d的湘东黑山羊,随机分成2组,每组10只。2组分别饲喂基础饲粮(对照组)和基础饲粮+2%的延胡索酸(延胡索酸组)。预试期为妊娠期90～94 d,正试期为妊娠期95 d至产羔。结果表明:与对照组相比,延胡索酸组妊娠后期山羊营养物质采食和表观消化率无显著变化(P>0.05);采食后2.5 h瘤胃中乙酸、丙酸、总挥发性脂肪酸含量和丙酸比例显著升高(P<0.05),乙丙比显著下降(P<0.05);血清丙二醛、雌二醇和雌三醇含量显著降低(P<0.05),血清催乳素、孕酮含量和过氧化氢酶活性显著升高(P<0.05);母羊妊娠后期增重有升高趋势(0.05≤P<0.10),羔羊初生总重显著增加(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加2%的延胡索酸,可以提高妊娠后期山羊瘤胃中总挥发性脂肪酸含量,发酵模式向丙酸型转变,并有助于提高机体抗氧化能力、母羊妊娠后期增重和羔羊初生总重。

莲花白鹅排卵周期血浆中LH、17β－E_2和P含量的变化

采用放射免疫分析法测莲花县白鹅排卵周期外周血浆中ＬＨ、１７β－Ｅ２和Ｐ的动态变化，结果表明，正常产蛋母鹅在排卵周期中均出现三个峰值，ＬＨ峰值出现在排卵前１０ｈ左右，比１７β－Ｅ２和Ｐ峰值提前１６ｈ左右，而其它两次峰三者同步，血浆各激素的平均值分别是２．９２４±０．２３２ｎｇ／ｍｌ，２７．３３７±２４．３１８ｐｇ／ｍｌ和１６４．７４８±２３．９８１Ｐｇ／ｍｌ。但生软壳蛋母鹅在排卵前４ｈ左右见有一峰院，并以ＬＨ和１７β－Ｅ２明显，其血浆中三种激素的平均含量分别为３．２１５±０．６５７ｎｇ／ｍｌ，２７．３１２±２１．８５９ｐｇ／ｍｌ和２１１．６５７±１０４．３７５ｐｇ／ｍｌ，除１７β—Ｅ２外，均高于正常产蛋母鹅的水平，但差异并不明显。

大豆异黄酮对雌性动物生殖系统的影响

大豆是人类膳食和畜禽饲粮中的主要蛋白质来源之一,其中富含大豆异黄酮等生物活性物质。近年来的研究表明,大豆异黄酮具有与哺乳动物内源性雌激素相似的化学结构,能与机体内的雌激素受体结合,发挥类雌激素作用和抗雌激素样作用。大豆异黄酮是否对雌性动物生殖系统产生促进作用,目前仍存在争议。本文从雌性动物生殖器官形态结构、发情周期和卵巢发育、生殖激素和繁殖性能等方面,系统综述和全面分析大豆异黄酮对雌性动物生殖系统的影响,为畜牧业中科学合理利用大豆异黄酮来提高畜禽的生殖性状提供科学依据。

功能性脂肪酸对母猪繁殖性能的影响及其应用前景

脂肪酸是由碳、氢、氧三种元素组成的一类化合物,根据它们的碳链长度、碳氢键饱和度、空间结构或功能特性等方面,能够将脂肪酸粗略地分为短链、中链、长链脂肪酸。其中,对动物生理具有特殊的调节作用、参与并调控关键的代谢途径或分子信号的脂肪酸是一类特殊的功能性脂肪酸。它们具有抗氧化、抗炎、抗菌及促生长发育等重要的生理功能,这些脂肪酸对于母猪繁殖性能和仔猪生长性能具有潜在的促进作用。文章基于母猪繁殖性能和仔猪生长性能,从功能性脂肪酸的种类、作用效果、应用现状及应用前景等方面进行了综述,以期为脂肪酸的日粮平衡在实际生猪养殖生产中的运用提供理论参考。

莲花白鹅赖抱与药物醒抱过程血浆性激素含量变化

检测莲花白鹅赖抱与药物醒抱过程，血浆中的ＬＨ、１７β—Ｅ２和Ｐ的变化。结果表明：１、赖抱期血浆中ＬＨ平均含量极显著高于产蛋期（Ｐ＜０．０１），Ｐ却显著降低（Ｐ＜０．０５）。２、两种药物醒抱剂（溴隐停和丙酸睾丸素）都使抱鹅在肌注后５４ｈ内醒抱，相应地肌注后ＬＨ、１７β—Ｅ２和Ｐ都有不同程度的提高。

γ-氨基丁酸对猪生产性能及激素水平影响(英文)

为探讨日粮中添加γ-氨基丁酸对猪的促生长效果及其与生长、摄食及代谢相关激素之间的联系。试验选用（34.07±0.01）kg的杜长大三元杂交猪60头，随机分到3个处理中，每个处理4个重复，每个重复5头猪。试验采用单因子设计，按日粮添加水平设基础日粮组（0 mg/kgγ-氨基丁酸）、基础日粮＋50 mg/kgγ-氨基丁酸和基础日粮＋100 mg/kgγ-氨基丁酸3个处理，试验期28 d。结果表明，γ-氨基丁酸对猪的促生长作用明显，但随生长阶段和作用剂量不同存在一定差异，主要体现在试验3-4周，以100 mg/kg的效果较为突出。100 mg/kg组试验猪第3周（P〈0.1）、第4周（P〈0.05）及0-4周（P〈0.1）的ADG和第4周（P〈0.01）、3-4周（P〈0.1）的ADFI以及0-4周（P〈0.05）的F/G都明显超过对照组。日粮中添加γ-氨基丁酸显著促进了试验猪体内生长激素（P〈0.05）和褪黑素（P〈0.05）的分泌，明显提高了小猪体内促甲状腺激素水平（P〈0.1），这也与良好的生产性能吻合，但作用程度随试验阶段和激素种类不同而存在一定差别。总的看来，日粮中添加γ-氨基丁酸能够有效改善小猪生产性能，促进生长，但为获得理想结果必须考虑添加剂量与使用时间。