5-羟色胺受体3拮抗剂通过IκBα/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应

在败血症等炎症相关疾病中,巨噬细胞过度产生的炎症因子在疾病的发病机制中发挥关键作用。5-羟色胺受体3(5-hydroxytryptamine receptor 3,5-HT_(3)R)拮抗剂,近来被发现在免疫系统中具有抑制炎症的作用,但其具体机制尚不清楚。本文使用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,引发巨噬细胞炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。结果显示,在RAW 264.7细胞中,与无处理组相比,LPS以剂量和时间依赖的方式促进炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。进一步使用5-HT_(3)R拮抗剂格拉司琼(granisetron,GA)进行预处理,检测其抗炎作用。蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附测定的结果表明,与LPS处理组相比,随着GA浓度的升高,其抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的效果越好(P<0.05)。同时,细胞活力和细胞毒性的结果也表明,所使用的GA对细胞不造成损伤。另外,通过免疫荧光实验和双荧光素酶检测表明,GA可以抑制LPS诱导的NF-κB的核移位和转录活性;进一步的蛋白质免疫印迹结果表明,GA可以通过抑制IκBα的磷酸化而抑制其降解,从而抑制NF-κB的功能。总之,本文的结果提示,GA可以通过抑制IκBα/NF-κB信号通路,抑制RAW 264.7巨噬细胞中炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。本研究结果为进一步探究5-HT_(3)R拮抗剂抗炎的分子机制,以及研发治疗败血症等炎症相关疾病的药物提供科学依据。

GABA_(A)受体激动剂通过NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放

在帕金森病(Parkinson's disease,PD)等神经退行性疾病中,小胶质细胞的过度激活引发的炎症与神经元进行性丢失密切相关。中枢神经系统中主要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA),近来被发现在免疫系统中,可发挥抑炎作用,但其具体机制尚不明确。本文利用脂多糖(LPS)刺激的BV2细胞,取其培养基培养SH-SY5Y细胞,检测炎症因子及神经细胞的损伤作用。结果显示,在BV2细胞中,与无处理组相比,LPS以剂量依赖的方式促进炎症因子的释放(P<0.01)。同时,细胞活力和细胞毒性的结果也表明,释放的炎症因子会诱导SH-SY5Y细胞活力衰退;进一步使用GABA及GABA_(A)受体激动剂蝇蕈醇(Muscimol)进行干预处理,检测其抑炎作用。酶联免疫吸附测定(ELISA)的结果表明,与LPS组相比,GABA,GABA_(A)R激动剂Muscimol预处理都以剂量依赖方式抑制LPS诱导的炎症因子释放(P<0.05)。细胞活力和细胞毒性的结果也表明,GABA,GABA_(A)R激动剂Muscimol的预处理挽救了炎症因子造成的SH-SY5Y细胞活力衰退(P<0.05)。另外,通过免疫荧光分析以及双荧光素酶的检测表明,Muscimol可以抑制NF-κB的入核和相关炎症因子的转录(P<0.0001,P<0.01)。总之,本文的结果提示,GABA可能通过抑制BV2小胶质细胞分泌的炎症因子的方式发挥神经保护作用,而GABA的这种作用主要是依赖于GABA_(A)受体-NF-κB通路。本研究结果为进一步探究GABA抗炎的分子机制,以及研发中枢系统抗炎药物提供科学依据。

双重结合肽段协助胞内蛋白酶体系统降解alpha-突触核蛋白

alpha-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)异常累积与聚集是帕金森病的重要致病因素之一。目前,已有的降低细胞内α-syn的方法多是从抑制新蛋白质合成角度进行,而无法干预已经存在并产生毒性的蛋白质。该研究旨在探索一种可以降解α-syn的新方法,从而挽救α-syn造成的细胞损伤。本研究依据Trim-Away方法设计了2种针对α-syn降解的肽段,即Pep1和Pep2,并将其过表达至HEK293T以及SH-SY5Y细胞中。Western印迹检测和免疫荧光分析以及免疫共沉淀结果表明,Pep1和Pep2可以在上述细胞系中表达,并与α-syn形成复合物,协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn(P<0.05,P<0.0001)。进一步的细胞活力以及细胞毒性结果显示,Pep1和Pep2可以挽救α-syn引起的细胞活力的下降(P<0.0001),并且可以缓解α-syn造成的细胞毒性的增加(P<0.0001)。总之,本文的结果提示,肽段可以协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn,并缓解α-syn造成的细胞损伤。本研究为短肽的研发、应用以及帕金森病的干预提供新的思路。