水解物对CHO细胞培养工艺的影响

目的对比3种水解物对CHO悬浮培养细胞生长的影响,以及对细胞分泌表达的抗体质量的影响。方法应用3种不同来源的水解物,采用摇瓶培养CHO细胞,观察培养过程中细胞密度、活性和代谢产物的变化,以及抗体质量的影响。结果水解物对CHO生长无显著促进作用、但可大幅度提高抗体产量;对抗体糖型无显著影响,可显著影响抗体电荷分布。结论3种水解物中,Preteose peptone和Phytone peptone对CHO有很好的促进作用。但Preteose peptone含有动物然产分,随着各国药监对动物来源成分监管制度的严格,将进一步限制Preteose peptone的应用,因此Phytone peptone具有优势。

重组融合蛋白产品电荷异质性分析方法研究

建立重组融合蛋白产品的电荷异质性分析方法。方法 通过优化条件,建立了重组融合蛋白产品电荷异质性的分析方法,即样品经过高浓度尿素处理,再加入两性电解质、1%甲基纤维素、高和低pI标志物,用成像毛细管等电聚焦电泳仪分析;并从方法的精密度、准确性、范围和线性、溶液稳定性考察了方法的可行性和耐用性。结果 方法重现性、准确度、线性范围和溶液稳定性好,能很好的分辨融合蛋白产品的各电荷异质性组分。结论 建立的方法可用于重组融合蛋白产品电荷异质性的分析,为保障重组融合蛋白类产品生产工艺的稳定性及质量控制提供了可靠的分析方法。

毛细管电泳用于测定人绒促性素的解离亚基及其质量控制

人绒促性素(hCG)是用于治疗不孕症等的常用药物。其由α亚基和β亚基组成,研究发现hCG在生产及储存过程中均可能产生亚基的解离,从而影响其活性。本文旨在建立hCG解离亚基的测定方法,通过考察样品制备缓冲体系、样品制备温度、分离电压、毛细管温度等,建立了毛细管电泳(CE-SDS)定量测定hCG解离亚基的方法。方法验证结果表明,α亚基和β亚基含量具有良好的灵敏度、线性、准确度和精密度,优于传统的凝胶电泳SDS-PAGE。本文所开发的方法适用于不同来源的hCG,并可应用于指导工艺开发及稳定性研究。因此,该方法应作为hCG生物制品的重要质控方法。