基于细胞色素B(Cytb)的市售海蛇药材基原物种的分子鉴定

物种基原鉴定一直是中药鉴定中的热点研究问题之一。海蛇是我国名贵的中药材之一,为了解市售海蛇药材的基原情况,该研究基于细胞色素B(Cytb)片段测序对市售的46批海蛇药材的基原物种进行分子鉴定。经比对和人工校正,序列长度为582 bp,A+T的量(58.9%)高于G+C的量(41.1%),变异位点有197个,简约信息位点有179个。经BLAST比对的结果表明样品中出现序列比对一致性为100%的有44批,一致性为96%的有2批。此外,从美国国家生物技术信息中心数据库上共下载了408条Cytb有效序列(共68种),分别基于邻接法和贝叶斯法,与该研究样品共构建了454条海蛇序列的系统发育树,结果表明2种方法构建的系统发育树结构相似,能正确鉴别出海蛇药材样品有42批,而4批海蛇药材因节点支持率比较低,无法对它们鉴别。综合它们的结果,市售海蛇药材的基原物种至少来源于2属5种,分别是埃杜西剑尾海蛇Aipysurus eydouxii、青灰海蛇Hydrophis caerulescens、印度洋平颏海蛇H.curtus、淡灰海蛇H.ornatus、螺旋海蛇H.spiralis。可见市售海蛇药材的基原物种比较复杂,可为海蛇类药材鉴别提供了参考。

中成药蛤蚧定喘丸中原料动物药材的分子鉴定

目的建立蛤蚧定喘丸中原料动物药材的分子鉴定方法。方法首先构建了蛤蚧定喘丸中原料动物药材的16S rRNA序列的数据库;然后收集3个不同厂家(每个厂家3个不同批号)和自制的蛤蚧定喘丸共计12份,使用改良CTAB法对蛤蚧定喘丸进行总DNA提取,扩增16S rRNA,对PCR产物进行克隆测序,然后对测序结果进行BlastN分析。结果共挑取131个阳性克隆进行测序,序列去除载体序列和人工校正后,12份蛤蚧定喘丸样品均能鉴定出蛤蚧和鳖甲成分,其中鉴定结果为蛤蚧的有87个样品,占总样品的66.4%;鉴定结果为中华鳖的有44个样品,占总样品的33.6%。结论本研究的分子鉴别方法可鉴定蛤蚧定喘丸中原料动物药材,为该中成药的质量控制提供参考。