mgrB和mcr-1在耐多黏菌素猪大肠杆菌中的作用

大肠杆菌mgrB变异和携带mcr基因是其对多黏菌素耐药的重要机制,威胁着多黏菌素的临床应用。为了比较mgrB和mcr在猪源大肠杆菌中对多黏菌素耐药的影响,本试验收集165株猪源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定菌株对多黏菌素敏感性,并对耐药菌的mcr-1~mcr-5以及mgrB进行检测及测序比对分析。结果显示,165株猪大肠杆菌中有147株对多黏菌素耐药(MIC≥4 mg/L),耐药率为89.1%(147/165),147株耐药菌中均未检出mcr-2~mcr-5基因,且仅有1株(EPF25)不含mcr基因。mgrB基因经PCR检测并测序比对后发现mgrB启动子区变异的有104株菌,mgrB编码区氨基酸变异的有11株,在147株耐药菌中占78.2%(115/147)。结果表明比较多黏菌素对受试菌的MIC值及耐药菌mcr-1、mgrB基因变异之间的关系发现相关性不明显,猪大肠杆菌对多黏菌素耐药是mcr基因和mgrB变异共同作用的结果。

大肠杆菌cpxR和hns双基因缺失株的构建

为构建调节蛋白H-NS及双组分信号转导系统CpxAR的单、双基因缺失株,本研究以大肠杆菌ATCC25922为研究对象,以pKD4质粒为模板,分别扩增出含kan^r基因的线性打靶片段,在pKD46质粒的辅助及L-阿拉伯糖的诱导下进行Red同源重组,使线性打靶片段替换大肠杆菌ATCC25922中的cpxR、hns基因,再用pCP20质粒消除FRT位点间的kan^r基因,构建单基因缺失株△cpxR和△hns。接着以△cpxR为研究对象,用同样方法敲除hns基因,构建双基因缺失株△cpxR△hns。最后将重组表达质粒cpxR-pBAD/HisA、hns-pBAD/HisA电转入上述3种缺失株中,制备回补菌株△cpxR/pcpxR、△hns/phns、△cpxR△hns/pcpxR和△cpxR△hns/phns。结果表明,利用该重组系统成功敲除了大肠杆菌ATCC25922中cpxR、hns基因,构建了单、双基因缺失株△cpxR、△hns和△cpxR△hns以及它们的回补菌株,为研究H-NS及CpxAR互作调控IncFⅡ质粒接合作用的分子机制提供了有力的工具。