家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响。采用Hoechst33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响。并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响。Hoechst33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变；流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象。因此，我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子，降低线粒体膜电位，进而诱导细胞凋亡的发生。

家蝇幼虫抗菌肽对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响？

为了更全面的探究家蝇抗菌肽的抗肿瘤作用，本文从肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的角度研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用。通过针刺诱导家蝇三龄幼虫、低温离心、固相萃取后冻干获取抗菌肽粗提物，将所获抗菌肽调整至不同浓度进行CCK8细胞增殖实验。并通过细胞划痕实验和细胞侵袭实验判断家蝇抗菌肽对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响。实验结果显示家蝇抗菌肽能够明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖，且作用效果与浓度呈剂量依赖特点。低浓度的抗菌肽（60μg／mL）能有效抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。

肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM的建立以及家蝇幼虫抗菌肽对其耐药性逆转作用的研究

本研究通过建立人肝癌多药耐药细胞系,研究家蝇抗菌肽对该耐药细胞耐药性的逆转作用。采用阿霉素浓度梯度递增体外诱导法建立人肝癌耐药细胞株Bel-7402/ADM;采用MTT法检测阿霉素、顺铂、吉西他滨以及抗菌肽对细胞的毒性作用,并计算Bel-7402/ADM细胞对阿霉素、顺铂、吉西他滨耐药指数(RI);荧光显微镜观察细胞内阿霉素的荧光强度;采用流式细胞术检测细胞周期及细胞表面P-糖蛋白的含量。细胞毒性检测结果显示Bel-7402/ADM对阿霉素、顺铂和吉西他滨耐药指数分别为10.96、1.74和8.14,周期分析结果显示Bel-7402/ADM细胞的细胞周期较Bel-7402细胞发生改变:G0/G1期细胞比例明显升高,S期的细胞比例下降,荧光显微镜观察Bel-7402/ADM细胞内阿霉素量明显低于Bel-7402细胞,流式细胞术检测结果显示,Bel-7402/ADM细胞表面P-gp含量明显高于Bel-7402细胞,表明建成的Bel-7402/ADM细胞对多种药物耐药。抗菌肽对细胞的毒性作用检测显示,抗菌肽对Bel-7402/ADM细胞抑制作用呈剂量依赖性,但耐药细胞对抗菌肽并无耐药性。小剂量(100 mg/m L)的抗菌肽作用后,Bel-7402/ADM细胞的耐药指数减小至7.1,荧显微镜观察Bel-7402/ADM细胞内阿霉素荧光强度增强,流式细胞术检测Bel-7402/ADM细胞表面P-gp表达降低。结果表明,抗菌肽有可能通过降低细胞表面P-gp的表达起到逆转Bel-7402/ADM细胞耐药性的作用。

紫杉醇联合顺铂辅助治疗卵巢癌的护理

紫杉醇是从紫杉树中提取的双萜类抗肿瘤植物药，近年来广泛应用于临床，海军安庆医院2006年1月至2007年6月收治20例卵巢癌患者，均应用紫杉醇联合顺铂方案进行辅助治疗，效果较好，现将护理工作报告如下。

家蝇幼虫抗菌肽粗提物对原代FBL-3细胞增殖周期的影响

为利用家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用于原代FBL-3肿瘤细胞,探究其对原代FBL-3细胞周期的影响,本文通过构建小鼠肿瘤模型,获取原代FBL-3肿瘤细胞,之后用家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用于该肿瘤细胞,运用流式细胞术检测每个实验组的细胞增殖周期的分布情况.经家蝇幼虫抗菌肽粗提物作用后的FBL-3原代肿瘤细胞,其细胞增殖周期发生了如下改变：G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数降低,与对照组比较具有统计学意义.因此得出结论,家蝇幼虫抗菌肽粗提物可以通过阻滞原代FBL-3肿瘤细胞的增殖周期来诱导细胞凋亡.

刚地弓形虫棒状体蛋白17激活活化蛋白1信号抑制小鼠巨噬细胞凋亡

目的检测刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白17(rhoptry protein 17,ROP17)对γ干扰素(IFN-γ)诱导的小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)凋亡的调控作用。方法将重组质粒p3×Flag-CMV-14/Tg ROP17和p3×Flag-CMV-14空质粒(对照组)转染J774A.1细胞后,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,通过流式细胞术和蛋白质印迹(Western blotting)检测ROP17对细胞凋亡的调控作用,检测c-Jun磷酸化水平及活化形式的半胱天冬酶3(Caspase 3)、Bcl-2、Bcl-x L和Bcl-3等凋亡相关蛋白的表达情况。J774A.1细胞共转染p3×FlagCMV-14/Tg ROP17和c-Jun sh RNA,加入重组IFN-γ诱导细胞凋亡,Western blotting检测ROP17对凋亡的调控作用及凋亡相关蛋白Bcl-3的表达。结果流式细胞术显示,过表达ROP17组细胞凋亡率为(3.73±0.51)%,明显低于对照组的(7.78±1.10)%(P<0.05)。Western blotting结果显示,过表达ROP17组磷酸化c-Jun蛋白相对表达量为0.196±0.028,对照组为0.075±0.010(P<0.05);Bcl-3相对表达量为0.461±0.063,对照组为0.108±0.013(P<0.05)。活化形式的Caspase 3相对表达量为0.015±0.004,对照组为0.174±0.026(P<0.05)。Bcl-2在过表达ROP17组和对照组中的相对表达量分别为0.119±0.013和0.117±0.018,Bcl-x L则分别为0.124±0.015和0.121±0.023,差异均无统计学意义(P>0.05)。在c-Jun sh RNA有效抑制c-Jun及其磷酸化表达的条件下,活化形式的Caspase 3在RNA干扰组和对照组的相对表达量分别为0.147±0.024和0.087±0.010(P<0.05),Bcl-3则分别为0.085±0.010和0.162±0.011(P<0.05)。结论ROP17抑制IFN-γ诱导的J774A.1细胞凋亡依赖于c-Jun的磷酸化及Bcl-3的表达。