鹅催乳素受体基因克隆与表达

应用RACE-PCR技术,克隆了全长3159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA。序列分析表明,cDNA含443 bp5-′UTR、2496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3-′UTR。比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子。推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸。gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富。

鹅催乳素受体多克隆抗体制备及组织表达分析

为深入研究鹅催乳素受体(PRLR)的功能,构建了含鹅PRLR胞外域编码序列exPRLR的原核表达质粒exPRLR-pET-28a(+),通过转化E.coli Roster建立了稳定的原核表达系统,在IPTG诱导下获得了PRLR胞外域的重组exPRLR。以重组exPRLR为抗原免疫家兔,获得了兔抗鹅exPRLR的抗血清。Western blot分析证明该抗血清可特异识别由原核生物表达的重组exPRLR。进一步分析成年母鹅的组织蛋白,发现成年鹅中可能至少存在3种相对分子质量不同的PRLR蛋白异形体。

苏钟猪的选种选配

苏钟猪的选育过程在遵循常规群体继代方法的同时,也根据一些具体情况及育种需要,制定了选种、选配方法。其选择指数公式的确立主要依据日增重,背膘厚这两个主选性状,选配计划的制订主要根据后代近交系数。该文依据苏钟猪的有关资料,探讨了苏钟猪的选种选配方案。

猪原始祖先对后代群体的遗传贡献

以已继代选育 10个世代的“苏钟 系”猪为研究对象 ,根据有关资料分类、统计其原始祖先到达后代群体的所有通径线数 ,探讨猪原始祖先对后代群体的遗传贡献。

鹅催乳素受体基因cDNA2种新5＇-UTR特征分析

应用5＇-RACE技术，在成年雄鹅睾丸中克隆到长度分别为361bp、499bp和594bp3种催乳素受体基因（gPRLR）cDNA5’-端片段，表明雄鹅睾丸至少表达3种gPRLR mRNA。3种5’-端序列含有长度分别为210bp、348bp及443bp的不同5’UTR。3种5’-端序列后195个核苷酸一致，与鸡催乳素受体基因（cPRLR）cDNA第3和第4a外显子高度同源。3种5’-端序列起始密码子ATG均位于第3外显子45—47bp处，与cPRLR cDNA起始密码子同一位置。348bp与443 bp 5＇-UTR结构相似。348 bp 5＇-UTR中，第3外显子上游依次是235bp和69bp，其中69bp与cPRLReDNA第2外显子高度同源。443bp 5’-UTR比348 bp 5’-UTR多插在235bp和69bp之间的95bp。这些结果表明，含348bp和443bp 5’-UTR的mRNA来源于同一初级转录本转录后的选择性剪接。与348bp和443bp 5’-UTR不同的是210bp 5’-UTR在第3外显子的上游含有一个不同的166bp序列。这表明含210bp 5’-UTR的mRNA来源于另一初级转录本348bp 5’-UTR或443bp 5’-UTRmRNA。

基于母体血浆胎盘源及胚胎源核酸分子的早期妊娠诊断及早期胎儿性别鉴定技术

动物早期妊娠诊断及早期胎儿性别鉴定是繁殖技术中的关键技术。奶牛早期妊娠诊断可及时消除配种后假孕、妊娠后假发情等不利因素,胎儿性别早期鉴定可提高母牛犊的出生比例。近年来,随着孕妇血浆/血清中的胎儿源性游离DNA及胎盘源性游离RNA的发现,使人的早期性别鉴定技术及产前早期诊断技术的研究取得突破性进展;同时也使胎盘特异性表达基因的无创伤性研究成为可能。这些均为单胎动物,特别是奶牛的早期妊娠诊断及早期性别鉴定技术提供了理论依据及技术支持。

鹅催乳素受体基因3′-末端序列克隆

通过比对鸡、火鸡、鸽、猪、大鼠5种动物及人催乳素受体(PRLR),并根据它们的基因cDNA保守区设计兼并引物,先扩增了鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA一段606 bp保守区序列,再以此设计基因特异性引物,利用3′-RACE技术克隆了gPRLRcDNA3′-末端序列。序列分析表明,获得的gPRLRcDNA 3′-末端长1 876 bp,含编码区后1 656 bp的编码核苷酸、终止密码子TAA和220 bp的3′-UTR。参照鸡催乳素受体基因(cPRLR),此gPRLRcDNA3′-末端序列可分成6个外显子,其长度分别为148 bp、170 bp、145 bp、100 bp、70 bp和1 243 bp,与cPRLRcDNA最后6个外显子高度同源,终止密码子位于最后1个外显子的1 021 bp处。编码区后1 653 bp编码的551个氨基酸gPRLR C-末端与鸡PRLR同源部分的同源性达到87.7%。

苏钟猪遗传同质性分析

苏钟猪是经 10多个世代闭锁群体继代选育而成的猪新品系。通过已选育 10个世代的苏钟Ⅰ系有关资料 ,探讨了各原始祖先血缘在后代个体中所占比例 (即后代个体的遗传同质性分析 ) ,证明在闭锁的群体继代选育中 ,各原始祖先在后代个体中都占有一定比例的血缘份额 ,只是最初几个世代中在各个体中所占的血缘份额差异、变异都很大 ,但随着群体继代选育的代数增多 ,这些差异趋于稳定。因此 ,对群体以某一始祖或祖先来划分血缘只能在少数几代以内 ,群体继代选育多代以后 。

近交对苏钟Ⅰ系、Ⅱ系繁殖性能的影响

本文估计了苏钟Ⅰ系、Ⅱ系近交母猪的产仔性能及近交（近交母猪与与配公猪之间存在一定亲缘关系及不存在亲缘关系）对产仔性能的影响。苏钟Ⅰ系、Ⅱ系分别为长白二花脸、长白梅山一代杂交，然后横交，采用群体继代法分别选育6、8个世代而成，近两世代每世代的近交系数分别控制在10％－12％、6％－8％左右，近交母猪没有出现繁殖力严重下降等近交衰退现象。结果表明，在杂交培育新品系方面，控制近交在一定水平，是可以的。同时还说明，苏钟Ⅰ系、Ⅱ在杂交时繁殖性能优于自繁。

苏钟猪和太湖猪的线粒体D环部分序列比较分析

测定了以太湖猪为母本的杂交一代苏钟猪21个个体线粒体D环序列442 bp,结合已报道的中国太湖猪两个类群(梅山猪和二花脸)的线粒体DNA控制区(D-loop)序列进行分析,结果表明:苏钟猪和太湖猪的聚类主要有两类,部分苏钟猪和大多数梅山猪分布在类群Ⅰ;少数梅山猪、苏钟猪和二花脸聚为类群Ⅱ。梅山猪在几支上都有分布,可能与梅山猪有大中小类型之分有关。这一结果与根据形态差异把太湖猪分成不同的类群相一致。

瘦肉型猪苏钟Ⅰ系生理生化指标的测定

测定了苏钟Ⅰ系生理生化指标，结果：后备公猪９０～１００日龄、母猪９０～１５０日龄体温有上升趋势，以后逐渐下降，２１０日龄降至最低；呼吸、脉搏频率与环境的温湿度指标有一定的相关性，尤其呼吸频率与温湿度指标呈极显著正相关（相关系数为０．９９３３）；血沉０５ｈ为１８．９１ｍｍ、１ｈ为３７．６４ｍｍ、红细胞数５．６７×１０１２／Ｌ、白细胞数１３．９７×１０９／Ｌ、血小板数３０４．８６×１０９／Ｌ，均未超出正常变动范围，但个体差异很大；３５日龄和９０日龄α－谷酰转肽酶、谷丙酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶四种酶含量，除了α－谷酰转肽酶，另外三种酶３５日龄含量均大于９０日龄，且后两种酶含量差异极显著（Ｐ＜０．０１）。所有指标与我国地方猪种比较表明：苏钟Ⅰ系继承了母本适应性强的特点，选育工作已初见成效。

中草药添加剂对生长猪的抗病促生长效果

选择胎次、日龄和体重基本相近的杜长大三元杂交仔猪48头,平均体重约20 kg,按体重和性别分为4组,分别为自制中药1、2、3组和抗生素组,进行饲养对比试验,猪重约60 kg时结束。结果表明,中药1、2、3组的猪日增重分别较抗生素组高8.53%、13.91%、8.16%,饲料消耗分别较抗生素组降低了4.0%、7.1%、4.3%;中药1、2、3组和抗生素组的IgA、IgG、IgM、C3和C4均较试验前有不同程度提高,其中以中药2组提高幅度较大。综合比较增重、饲料消耗、免疫球蛋白和补体含量等各项指标,均以中药2组的配方效果最佳。

催乳素调控禽类繁殖活动的研究现状与展望

本文回顾了近二十年来催乳素在调控家禽繁殖活动方面的研究进展,这些进展包括催乳素分泌的神经内分泌调控机制,催乳素促进就巢发生和抑制产蛋的下丘脑和垂体的中枢内分泌调控机制,以及促进家禽繁殖产蛋的卵泡局部调控机制。催乳素对禽(鸟)类季节性繁殖的调控也分为两种,一种是在依赖年度光照变化调控季节性繁殖的家禽,其年度季节性繁殖周期的形成也是由催乳素和促性腺激素LH分泌的交替消长调控,而对于某些依赖温度而非光照调控的鸟类,催乳素而非LH是启动和终止繁殖季节的主要因素。从催乳素具有抑制和促进禽(鸟)类繁殖产蛋性能的双重调控作用来看,对催乳素作为研究对象而开展的家禽产蛋性能的遗传基础和基因聚合选育研究,还需要继续在理论和实践方面进一步完善。

性别基因调控与性别控制研究进展

该文阐述了性别基因调控原理以及采用流式细胞仪、免疫技术、控制输精时间等方法控制性别的最新研究进展。

山猪3个候选基因的多态性与繁殖性状关联分析

为了探讨ESR、PRLR和FSHβ基因在山猪群体内的分布及其对繁殖性状的影响,采用PCR-RFLP技术进行基因的多态性检测。结果表明:山猪ESR基因和PRLR基因的优势基因分别是B和A等位基因,山猪FSHβ基因只发现AA型和AB型2种基因型。ESR基因BB型头胎和二胎总产仔数(TNB)和产活仔数(NBA)均显著高于AA型(P<0.01);PRLR基因AA型和AB型头胎和二胎TNB和NBA均显著高于BB型(P<0.01);FSHβ基因AA型头胎TNB和NBA均高于AB型。ESR基因AA型头胎、二胎仔猪初生质量(BW)均高于AB型和BB型(P<0.05),AA型头胎、二胎仔猪断奶质量(WW)均显著高于BB型(P<0.05);PRLR基因BB型头胎和二胎WW均高于AB型和AA型(P<0.05);FSHβ基因AB型是初生质量和断奶质量优势基因型。表明FSHβ、PRLR和ESR基因对山猪繁殖性状有一定影响。

肉鸽圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型混合感染的多重PCR检测

运用多重PCR同时检测肉鸽病原(圆环病毒、腺病毒及疱疹病毒Ⅰ型)的方法,分别设计与合成3种病毒基因扩增引物,并提取疑似病鸽的肝脏样品DNA、进行单一PCR扩增及基因序列测定,结果分别获得了大小为239、418、618 bp的DNA产物。通过摸索多重PCR反应条件,应用多重PCR同时检测3种病毒基因片段,同时获得了鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的基因片段。再对疑似混合感染这3种病毒的肝脏样品进行检测,发现50%(6/12)样品存在3种病毒的混合感染、25%(3/12)样品存在鸽圆环病毒和鸽源腺病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽源腺病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品存在鸽圆环病毒和Ⅰ型鸽疱疹病毒的混合感染、8.3%(1/12)样品未发生任何感染。结果表明,多重PCR可快速检测鸽疱疹病毒Ⅰ型、鸽圆环病毒及鸽源腺病毒的混合感染,表明运用三重PCR检测3种病毒混合感染有很好的应用价值。

鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆

为寻找鹅就巢性相关基因,从洪泽湖性成熟公鹅睾丸组织分离并合成鹅cDNA第一链;利用RACE克隆了鹅催乳素受体基因(gPRLR)5′端序列。所克隆的499 bp 5′端序列可划分为348 bp的5′-UTR、151 bp的以ATG作为起始密码子的阅读开放框。与鸡催乳素受体基因(cPRLR)cDNA序列作比对,此499 bp序列可划分为238 bp的第1外显子、69 bp的第2外显子、114 bp的第3外显子及81 bp的部分第4外显子,起始密码子位于第3外显子45 bp处。阅读开放框核苷酸序列与cPRLR cDNA同源部位的阅读开放框同源性达到88%,推导的氨基酸序列同源性达到84%。

复合营养舔砖对稻草纤维类物质牛瘤胃降解率的影响

选用 4头装有瘤胃瘘管的杂种公牛,利用尼龙袋法研究复合营养舔砖的不同饲喂量对稻草纤维类物质瘤胃降解率的影响。试验采用 4×4拉丁方设计,每头牛每天添加复合营养舔砖 450g(Ⅰ组 )、300g(Ⅱ组 )、150g(Ⅲ组)及0g(对照组)。结果表明:稻草干物质瘤胃降解率Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组比对照组分别提高 34 66% (P<0 01)、20 59% (P<0 05)、16 97% (P<0 05);中性洗涤纤维瘤胃降解率Ⅰ组、Ⅱ组比对照组分别提高 10 84%(P<0 05)、18 31% (P<0 05),Ⅲ组比对照组下降 7 38% (P>0 05);酸性洗涤纤维瘤胃降解率Ⅰ组、Ⅱ组比对照组分别提高 29 76% (P<0 05)、26 77% (P<0 05),Ⅲ组比对照组下降 7 63% (P>0 05 );纤维素动态降解率各试验组与对照组之间的差异不显著(P>0 05)。

太湖猪在杂交利用时的繁殖性能表现

太湖猪在杂交利用时的繁殖性能表现徐晓波葛云山邢光东（江苏省农科院牧医所南京２１００１４）本文对国内多年来太湖猪的两大主要类群（二花脸猪和梅山猪）的种质特性及杂交利用的研究结果进行分析，以探讨在引入外种猪杂交改良太湖猪的肥育性能和瘦肉率的过程中，能否保...

苏钟猪个体身份SNP识别的数字条形码编制

苏钟猪是江苏省农业科学院利用太湖猪为母本,长白猪为父本育成的品种。为苏钟猪个体身份识别及猪肉产品溯源之需,对苏钟猪个体身份SNP识别进行研究。本研究共设计29对引物,并从中筛选7对引物用于苏钟猪的个体身份识别。7对引物扩增产物能直接测序且测序图谱背景干净,序列阅读无歧义。7对引物共扩增52个SNP位点,经关联性分析及杂合度过滤(H≥0.1)后,选留41个SNP位点用于苏钟猪个体身份识别的数字条形码编制;同时,编制了7头公猪和12头母猪所生的96头苏钟猪个体身份SNP识别的数字条形码,数字条形码很好地区分了96头苏钟猪的个体身份。根据96头苏钟猪条形码编制时分离到的各引物对扩增片段的基因型数,7对引物扩增的41个SNP位点,理论上可用于近5.00×106头猪的个体身份识别。因此,本研究建立的苏钟猪个体身份SNP识别的数字条形码编制方法,可用于规模猪场苏钟猪的个体身份识别及肉产品溯源。