多浪羊PROKR 2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR 2基因表达量无显著变化(P>0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

脑出血合并慢性肾脏病患者尼卡地平泵入引发急性蜂窝组织炎1例的护理

总结1例脑出血合并慢性肾脏病患者因尼卡地平泵入导致静脉炎引发蜂窝组织炎,同时并发败血症的护理体会。护理难点:血管通路的选择和血压监测方式的选择。护理体会:多学科团队合作,综合评估给药途径、血压测量方式、合理选择血管通路,加强医护患沟通,共同保障患者安全。

多浪羊NPTX 1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究

【目的】试验旨在克隆多浪羊神经元正五聚体蛋白1(neuronal pentraxin 1,NPTX1)基因CDS序列,利用生物信息学分析NPTX1蛋白的结构和功能,并研究其在多浪羊初情期启动过程中性腺轴不同组织中的表达规律。【方法】采集初情期前、初情期、初情期后健康雌性多浪羊的下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫组织,提取总RNA并反转录成cDNA,以初情期前下丘脑cDNA为模板,PCR扩增多浪羊NPTX 1基因并克隆测序,对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR分析NPTX 1基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、子宫、输卵管5个组织中的表达水平。【结果】克隆得到NPTX 1基因长1576 bp,其中CDS区序列为1299 bp,与GenBank上预测的绵羊mRNA序列(登录号:XM_005683183.3)相似性达99.85%。系统进化树分析得出,多浪羊NPTX 1基因与绵羊的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。生物信息学分析发现,NPTX1蛋白为不稳定的亲水性酸性蛋白,具有1个信号肽,属于分泌蛋白;二级结构中α-螺旋和无规则卷曲占比分别为41.90%和40.73%,与三级结构预测结果一致。实时荧光定量PCR结果显示,NPTX 1基因在多浪羊3个时期5个不同性腺组织中均有表达,在初情期下丘脑中表达量最高,显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊NPTX 1基因CDS全长序列,并揭示了NPTX 1基因在多浪羊初情期不同阶段性腺轴组织中的表达差异性,为进一步探究NPTX 1基因在多浪羊初情期启动过程中的调控机制提供依据。

多浪羊PRLR基因克隆测序及不同组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊催乳素受体基因(PRLR)CDS区序列,并检测不同组织中PRLR基因在初情期前后表达差异,为PRLR基因在初情期启动过程中发挥的主要作用提供参考依据。【方法】利用RT-PCR技术和使用相关的生物学信息软件预测其编码蛋白的结构和功能,通过qPCR检测多浪羊初情期前后各组织中的PRLR基因的表达水平。【结果】获得了多浪羊PRLR基因的CDs区序列长1 746 bp。多浪羊的3个时期5个组织中均有PRLR基因的表达。PRLR基因在初情期前多浪羊垂体组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05);初情期垂体组织中PRLR基因的表达量仍显著高于其他4个组织(P<0.05),初情期后下丘脑和垂体组织中PRLR基因的表达量显著高于其他3个组织(P<0.05);初情期垂体和输卵管组织中PRLR基因的表达量升高,初情期后显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】揭示了PRLR基因可能在多浪羊初情期启动的过程中参与了调控。

多浪羊BMP7基因克隆、生物信息学分析及其在不同初情期阶段组织表达分析

【目的】对多浪羊骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP7)基因序列进行克隆和生物信息学分析,并检测多浪羊在初情期3个阶段5个组织中的表达规律,为探究BMP 7基因在多浪羊初情期中的生物学功能提供参考。【方法】采用PCR扩增多浪羊BMP 7基因序列并克隆测序,利用Mega 7.0软件构建系统发育树,利用生物信息学软件分析BMP7蛋白的理化性质和结构功能;采用实时荧光定量PCR检测BMP 7基因在初情期前、初情期、初情期后多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫5个组织中的表达量。【结果】试验成功获得多浪羊BMP 7基因序列长1334 bp,其中编码区长1296 bp,编码431个氨基酸,与绵羊和牛的亲缘关系最近,其次是人、猴、马,与小鼠和犬的亲缘关系最远。生物信息学分析显示,BMP7蛋白分子式为C_(2200)H_(3374)N_(632)O_(628)S_(17),理论等电点(pI)为8.17,原子总数为6851个,不稳定指数为53.18,脂溶性系数76.96,总平均亲水性为―0.419,为不稳定亲水碱性蛋白;二级结构主要以α-螺旋及无规则卷曲为主,三级结构预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR检测显示,BMP 7基因在多浪羊初情期前、初情期、初情期后均有表达,其中在下丘脑中表达量显著高于其他组织(P<0.05);在初情期前到初情期的下丘脑和子宫中BMP 7基因表达量显著上升(P<0.05),初情期到初情期后BMP 7基因表达量显著下降(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊BMP 7基因序列,该基因在多浪羊初情期前后3个不同阶段的5个组织中均有表达,结果为探究BMP 7基因在多浪羊初情期中的作用提供了参考。

山羊GOLA-DQA2基因多态性与血液免疫性状的相关分析

文章采用PCR-RFLP技术对莱芜黑山羊、波尔山羊、鲁波山羊3个山羊种群的GOLA-DQA2基因外显子2进行遗传多态性研究,并对其血液免疫指标的效应进行分析。结果表明,3个山羊种群共检测到4种基因型,由3个等位基因控制;GOLA-DQA2基因外显子2的第77、79、80和169位的碱基表现出多态性;多数血液免疫指标品种效应是主要效应;鲁波山羊中,AB基因型的红细胞计数、白细胞计数分别显著高于BB基因型、BC基因型(P<0.05);AB基因型的红细胞压积显著高于BB、BC基因型(P<0.05);BC基因型的噬中性粒细胞比率显著高于BB基因型(P<0.05);波尔山羊和莱芜黑山羊中,基因型与血液免疫指标之间也有一定的相关性,但没有达到显著水平。由上述结果初步推测,在鲁波山羊中,AB、BC基因型是影响红细胞计数、白细胞总数、噬中性粒细胞比率等血液免疫指标的重要因素。研究结果揭示GOLA-DQA2基因与血液免疫指标之间有一定的相关性,可为山羊的抗病育种提供一定的参考。

山羊GOLA-DQB1基因外显子2多态性与免疫性状的相关分析

利用PCR-RFLP技术,对莱芜黑山羊、鲁波山羊和波尔山羊3个山羊种群共175只个体的GOLA-DQB1基因外显子2进行遗传多态性研究,并对山羊种群的血液免疫指标的效应进行了分析。结果表明:3个山羊种群共检测到(AA、BB、CC、AB、AC、BC、DD)7种基因型,GOLA-DQB1基因外显子2的第24、151位的碱基表现出多态性。多数指标品种效应是主要效应。莱芜黑山羊中,BC基因型的淋巴细胞百分比(W-SCR)显著高于AC、CC基因型(P<0.05),中性球比例(W-LCR)显著低于CC基因型(P<0.05),大型白细胞数(W-LCC)低于AC、CC基因型,但差异不显著(P>0.05)。波尔山羊中,BC基因型的W-LCC低于AA、AB、BB基因型,但差异不显著(P>0.05)。鲁波山羊中,BC、AC基因型的W-LCC显著低于AA基因型(P<0.05)。揭示GOLA-DQB1基因与血液免疫性状有一定的相关性。

神经内科ICU呼吸机相关性肺炎监控及干预措施

目的:探讨神经内科ICU患者发生呼吸机相关性肺炎(ventilator associated pneumonia,VAP)的影响因素及干预措施。方法:对我院2013年1月至2013年12月住院的882例神经内科ICU患者进行调查研究,分析患者VAP的发生率、呼吸机连接方式、病原菌特征、高危影响因素。结果:使用呼吸机176人(有创168人,无创8人),共发生感染42例(有创41例,无创1例),其中有创97.62%,无创2.38%,VAP感染率为23.86%,有创VAP感染率为24.4%,无创VAP感染率为12.5%;感染以革兰阴性菌为主,占85.71%,代表菌属为鲍曼不动杆菌、克雷伯菌、铜绿假单胞菌,其次为革兰阳性菌(9.53%),代表菌属为金黄色葡萄球菌,真菌(4.76%);VAP的高危因素主要有基础性疾病、高龄、住院时间过长、侵袭性操作、滥用抗生素。结论:神经内科ICU是VAP的高发科室,主要以有创呼吸机为主,VAP病原菌以革兰氏阴性菌为主,应积极治疗基础性疾病,严格无菌观念,减少侵袭性操作,合理使用抗菌药,缩短住院时间,预防和控制VAP的发生和发展。

实验感染肝片吸虫和田羊和中国美利奴羊绵羊免疫反应

以和田羊和中国美利奴羊为研究对象,随机分为感染组(n=5)和对照组(n=3),感染组每只羊经口感染250个囊蚴,在感染后的0、3、6、10周测定血液中生化指标、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-10、TNF-α)及免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)含量。感染6周后,和田羊和中国美利奴羊感染组血清谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TB)及碱性磷酸酶(ALP)含量均显著上升,显著高于对照组(P<0.05)。在感染6、10周后,中国美利奴羊感染组血清球蛋白(GLB)含量显著高于对照组(P<0.05)。和田羊血清IgM含量在感染6周后感染组显著高于对照组(P<0.05);在感染6、10周后,这两个品种的绵羊感染组血清IgG、IL-2、IFN-γ的含量均显著上升,显著高于对照组(P<0.05)。在感染的过程中,中国美利奴羊血清谷草转氨酶(AST)、血清碱性磷酸酶(ALP)含量比和田羊上升幅度大,而和田羊血清IgM、IgG、TNF-α及IFN-γ含量比中国美利奴羊上升幅度大。结果提示,和田羊和中国美利奴羊对肝片吸虫的免疫反应存在一定的差异,本研究为绵羊抗肝片吸虫病的研究提供了理论资料。

和田羊与中国美利奴羊对肝片吸虫病抵抗力的调查

为了解和田羊和中国美利奴羊肝片吸虫病感染情况及其对肝片吸虫病的抵抗力，以控制该病的流行，利用斯陶尔氏法对和田羊和中国美利奴羊粪便中肝片吸虫虫卵感染情况进行检测，对症状严重的绵羊进行剖检，记录肝脏中肝片吸虫数量。结果显示，和田羊肝片吸虫虫卵的感染率为43％，最大EPG值为160，平均EPG值为72．56，肝片吸虫虫体数量在0～10之间，中国美利奴羊肝片吸虫虫卵的感染率为71％，最大EPG值为280，平均EPG值为122．94，肝片吸虫虫体数量在0～60之间，和田羊平均EPG值显著低于中国美利奴羊（P〈0．05）。结果表明，在相同的饲养环境条件下，和田羊对肝片吸虫病的抵抗力高于中国美利奴羊。

家畜繁殖学重点课程的建设与改革

结合家畜繁殖学课程结构和现在大学生的自身特点,通过加强教学队伍建设,合理优化教学内容、改善教学方法和考核方式等环节,对塔里木大学家畜繁殖学重点课程进行了理论、实验教学建设和改革,旨在提高课堂教学效率,激发学生的学习兴趣,增强学生适应市场需要的能力,进而提高其就业竞争力。

多浪羊与和田羊初情期启动过程中生殖激素的变化规律

【目的】检测多浪羊与和田羊初情期启动过程中血清4种生殖激素(E2,FSH、LH、P4)的变化规律,为研究绵羊的初情期启动机制提供理论依据。【方法】利用公羊试情等方法对40只多浪羊与40只和田羊初情期年龄进行了鉴定;利用放射免疫分析技术对这2种绵羊2月龄、3月龄、初情期前、初情期(早期、中期、后期)、初情期后血清4种生殖激素的变化规律进行测定。【结果】多浪羊达到初情期的年龄约在4月龄,和田羊达到初情期的年龄约在8月龄。在幼年期至初情期的发育过程中,2种绵羊4种生殖激素变化趋势相似。多浪羊2月龄、3月龄血清E2浓度均显著高于和田羊(P<0.05);多浪羊3月龄(初情期前)、初情期早期、中期血清FSH浓度均显著高于和田羊(P<0.05),初情期后期血清P4浓度显著高于和田羊(P<0.05)。多浪羊初情期后血清FSH、LH、P4浓度均显著高于和田羊(P<0.05)。【结论】多浪羊初情期前高水平的E2、FSH可能与其初情期启动早相关,初情期后高水平的FSH浓度可能与其排卵数多、多胎性相关。

哺乳动物初情期启动相关基因研究进展

初情期是动物开始获得繁殖能力的关键阶段,中枢来源的正常初情期和异常初情期启动都由遗传因素决定,是一个由多基因决定的复杂性状。论文主要介绍了初情期启动的机理、初情期启动相关基因Lin28、KISS-1/GPR54、Leptin、NKB基因以及初情期启动相关基因筛选等方面研究进展,旨在为哺乳动物初情期启动主效基因的研究提供有益的参考。

多浪羊Lin28A基因克隆及其在初情期启动过程中的表达研究

旨在克隆绵羊Lin28A基因cDNA序列,探讨其在初情期启动过程中的表达规律和调控特性。本研究分别在初情期前(第1次发情前1周)、初情期、初情期后(第1次发情后1周)屠宰多浪羊各5只。采集下丘脑、垂体、卵巢组织,对其Lin28A基因cDNA进行克隆,利用DNAman 6.0软件对多浪羊Lin28A氨基酸与其他物种的Lin28A氨基酸序列进行同源性比较。采用Real-time PCR技术分析下丘脑、垂体、卵巢中Lin28A基因、let-7a、let-7b在初情期启动过程中表达的变化规律。结果表明,多浪羊Lin28AcDNA序列为3 581bp,包括2 963bp的3′UTR和618bp CDS;多浪羊Lin28A氨基酸与人、家鼠、牛和绵羊的同源性分别是87.56%、88.52%、92.68%和89.95%,与鸡、斑马鱼的同源性分别是76.10%、61.84%。在初情期前至初情期的过程中,下丘脑、卵巢中Lin28A表达显著降低(P<0.05),let-7a、let-7b的表达没有显著变化(P>0.05)。本研究结果对于揭示Lin28A基因在绵羊初情期启动中的作用及机制提供了科学依据。

第二课堂活动在家畜育种学教学中的应用研究

第二课堂活动是第一课堂的有力补充。为了激发动物科学专业学生学习家畜育种学的兴趣,提高教学质量,利用课余时间以趣味知识竞赛、撰写综述的形式,开展了家畜育种学第二课堂教学,以加深学生对家畜育种学基础知识的理解,从而达到既定的课程培养目标,提高学生学习积极性。

2种不同教学方法在家畜育种学教学中的应用研究

为适应新时代对家畜育种学人才的培养需要,塔里木大学动物科学专业的教师对家畜育种学进行了教学改革实践。采用传统教学结合讨论课、多媒体专题汇报授课形式结合的引导式教学模式,以加深学生对家畜育种学基础知识的理解,激发学生学习家畜育种学的兴趣,提高学生文献阅读能力、语言表达能力、创新能力和团结协作能力,为农业本科院校动科专业课程建设和人才培养提供一定的参考。

肝片吸虫感染对绵羊细胞因子质量浓度及表达的影响

为揭示肝片吸虫感染对和田羊与中国美利奴羊细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)质量浓度及其mRNA表达的影响。以和田羊和中国美利奴羊为研究对象,随机分为感染组(N=5)和对照组(N=3),感染组每组经口感染250个肝片吸虫囊蚴。在感染后第0、4、7、16周测定血清细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)的质量浓度,并检测感染16周后肝脏细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)mRNA的表达量。结果表明,感染肝片吸虫7周后,和田羊和中国美利奴羊感染组血清IL-2、IFN-γ质量浓度均显著高于对照组(P<0.05);和田羊感染组血清TNF-α质量浓度显著高于对照组(P<0.05),而中国美利奴羊感染组与对照组差异不显著(P>0.05)。感染16周后,和田羊感染组血清TNF-α、IFN-γ质量浓度及其肝脏mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05);中国美利奴羊感染组血清TNF-α质量浓度及其肝脏mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05)。揭示和田羊与中国美利奴羊对肝片吸虫的细胞免疫反应存在一定差异。

神经内科医护人员对护士专科培训需求的调查研究

目的了解和比较神经内科医护人员对护士专科培训的需求,为制定神经内科专科护士规范化培训课程提供依据。方法采用问卷调查法,调查重庆地区21所医院从事神经内科工作的178名护士和138名医生对现行神经内科护士专科培训的需求。结果21%的医生和42.7%的护士对现有神经内科护理质量不满意;99.28%的医生和94.4%的护士希望神经内科护士参加专科护理规范化培训。神经内科医护人员对护士在专业综合能力、专科技能培训需求方面比较差异无显著意义,最希望培训的前三位能力是:专科疾病护理评估能力、重症监护能力、风险识别能力。结论神经内科医护人员对现有神经内科护理质量均不满意,护理的专科培训需求高,应尽快建立神经内科专科护士规范化培训体系,提高专科护理水平。

黄河下游同域山羊种群mtDNA D-环多态性及系统发育

对黄河下游7个山羊种群共59个个体的mtDNAD-N533bp序列进行分析，发现59个多态位点，其中单一多态位点21个，简约信息位点38个，分别占全序列的11．7％、3．94％和7．13％。确定了37种单倍型，崂山奶山羊1个个体还发现了1处5碱基的缺失。各群体单倍型多样度为0．7857～0．9697，核苷酸多样度为1．27％～1．73％，遗传多样性较丰富。构建系统发育树将37种单倍型分为2个分支，由此推断黄河下游山羊资源至少具有2个母系起源，角猾羊与A类型聚为1支，7个群体具有角猾羊起源，未发现捻角山羊对7个群体有贡献的证据。错配分析表明，A类型经历过群体扩张，B类型未经历过群体扩张。并通过遗传距离分析了各群体的遗传分化。

3个绵羊种群MHC微卫星标记的遗传多样性

利用微卫星技术对小尾寒羊、道赛特羊、特克赛尔羊3个绵羊种群共218只绵羊的主要组织相容性复合体(MHC)ClassⅡ区DRB1、DRB2、DYMS、MB026基因座的微卫星多态性进行了研究。统计了3个种群的等位基因组成,并计算了微卫星基因座的等位基因频率、杂合度和多态信息含量。结果显示,4个基因座在3个种群中的平均等位基因数分别为14、10.33、12.67、5.33个;平均多态信息含量分别为0.8315、0.8037、0.7946、0.3992;平均杂合度分别为0.8473、0.8229、0.8165、0.4202。研究结果说明,DRB1、DRB2、DYMS基因座为高度多态基因座,MB026基因座为中度多态基因座,在这4个微卫星基因座上,小尾寒羊、道赛特羊及特克赛尔羊均具有丰富的遗传多态性,可作为有效的遗传标记用于各绵羊品种的遗传多样性和系统发生关系分析。