脓毒症肝损伤与自噬

肝脏作为维持人体生命活动的重要器官之一,参与生物合成、新陈代谢、生物转化和免疫防御等过程,易受感染、创伤和休克等因素的侵害,是脓毒症早期易受损害的器官之一。自噬是真核生物内普遍存在的生命现象,在生理状态下自噬保护细胞免受外来刺激。在脓毒症所致的多器官损伤过程中,自噬有一定的保护作用。本文就自噬与脓毒症肝损伤的最新研究进展进行综述。

Rho激酶抑制剂对脓毒症肝损伤的影响

目的:探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对脓毒症急性肝损伤的作用。方法:健康成年雄性SD大鼠32只,随机分为假手术组(Sham组)、假手术+Y-27632组(Sham+Y组),盲肠结扎穿孔组(CLP组)和CLP+Y-27632组(CLP+Y组),每组8只。采用CLP方法制备大鼠脓毒症模型,造模24 h心脏采血后安乐死大鼠,收集血清及肝脏组织。苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝组织病理学变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠肝组织ROCK1和下游NF-κB蛋白的表达情况;免疫组织化学法(ICH)检测大鼠肝脏组织ROCK1蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清肝功能指标ALT、AST水平及肝组织匀浆IL-18、IL-10和谷胱甘肽(GSH)含量变化。结果:与Sham组相比,Sham+Y组肝脏组织病理学无明显变化,CLP组肝细胞排列紊乱,有大量炎症细胞浸润,CLP+Y组炎症细胞浸润较少,肝细胞条索逐渐恢复。与Sham组相比,CLP和CLP+Y组ROCK1蛋白表达增加(P<0.05);与CLP组相比,CLP+Y组ROCK1蛋白表达减少(P<0.05)。与Sham组相比,CLP和CLP+Y组NF-κB蛋白表达增加(P<0.05);与CLP组相比,CLP+Y组NF-κB蛋白表达减少(P<0.05);ICH检测到Sham组肝脏ROCK1少量表达,CLP组和CLP+Y组大量表达;与Sham组相比,CLP和CLP+Y组血清ALT、AST水平升高(P<0.05),与CLP组相比,CLP+Y组ALT、AST水平降低(P<0.05)。与Sham组相比,CLP和CLP+Y组肝组织匀浆IL-18含量升高(P<0.05),CLP组肝组织匀浆IL-10和GSH含量降低(P<0.05),CLP+Y组IL-10和GSH的变化相近(P>0.05);与CLP组相比,CLP+Y组IL-18含量降低(P<0.05),IL-10和GSH含量升高(P<0.05)。结论:Rho激酶抑制剂可以减轻脓毒症大鼠急性肝损伤,可能与抑制Rho/ROCK/NF-κB信号通路及其下游的炎症因子,减轻肝脏炎症反应,同时降低肝脏氧化应激水平有关。

Nrf2及其信号通路在脓毒症相关脏器损伤中的研究进展

脓毒症(sepsis)是重症监护病房(ICU)患者死亡的常见病因,治疗难度大,且预后较差,给全球医疗卫生系统造成巨大经济负担。然而针对脓毒症的治疗仍缺乏有效的防治手段。核转录因子-E2相关因子2(Nrf2)是抗氧化应激体系中的关键转录因子,它通过调节抗氧化反应原(ARE)介导的抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶等的表达,在脓毒症治疗中发挥关键作用。本文总结了Nrf2相关信号通路及其在脓毒症器官损伤中的最新研究进展,以期为临床治疗脓毒症提供新的治疗策略。

大麻素2型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响

目的探讨大麻素2型受体激动剂对脓毒症大鼠急性肾损伤的影响。方法选取健康成年雄性SD大鼠24只,按照随机数字表法将大鼠分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(Sep组)、脓毒症+CB2R激动剂JWH133组(Sep+JWH133组),每组8只。采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症大鼠模型,Sep+JWH133组于术后1 h腹腔注射JWH1331.5 mg/kg,Sham组和Sep组分别于上述时间点腹腔注射等量生理盐水,模型复制24 h后,心脏采血。采用ELISA法检测血清肌酐(Scr)水平;HE染色法观察小肠组织及肾脏组织病理改变;免疫组织化学法测定肾脏自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5的表达水平。结果光镜下Sham组为正常小肠和肾脏组织,无出血及炎症浸润,小肠组织损伤程度为0级。Sep组小肠绒毛上皮组织缺失或连续性中断,黏膜血管出血,炎症细胞大量浸润,组织损伤程度≥3级;肾脏近端小管上皮细胞排列紊乱,肾小球体积明显增大,系膜细胞肿胀,间质有明显出血及大量炎症细胞浸润。Sep+JWH133组病理改变明显减轻,小肠绒毛上皮组织较完整,仅有少许血管出血,少量炎症细胞浸润,组织损伤程度≤2级;肾脏结构较完整,间质仅有少量出血及炎症细胞浸润。Sep组和Sep+JWH133组Scr、肾小管Paller评分较Sham组升高(P<0.05),Sep+JWH133组SCr、肾小管Paller评分较Sep组降低(P<0.05)。Sep组和Sep+JWH133组自噬相关蛋白Beclin-1和Atg5的表达较Sham组上调(P<0.05),Sep+JWH133组Beclin-1和Atg5的表达较Sep组上调(P<0.05)。结论大麻素2型受体激动剂可以减轻脓毒症大鼠急性肾损伤,其作用机制可能与诱导肾脏自噬表达上调有关。

炎症相关信号通路在脓毒症中的研究现状

脓毒症是重症监护病房(ICU)患者常见的死亡原因,是宿主对感染的反应失调引起的危及生命的器官功能障碍。炎症反应是脓毒症的核心环节,胞(核)外感染信号通过信号转导通路传递至胞(核)内,诱导促炎因子的合成和释放,形成瀑布式级联反应,进而促进脓毒症的发生发展。本文重点阐述Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白88、TLR4/β干扰素TIR结构域衔接蛋白、TLR4/NOD样受体蛋白3、Janus蛋白酪氨酸激酶/信号转导及转录激活蛋白、RAS同源基因家族成员(Rho)/RhoA相关卷曲螺旋激酶及AMP活化蛋白激酶等炎症相关信号通路在脓毒症中的研究状况,以期从中找到有效的治疗靶点。

Rho激酶抑制剂Y27632对脓毒症大鼠肠屏障功能障碍的影响

目的研究Rho激酶抑制剂Y27632对脓毒症大鼠肠屏障功能障碍的影响及机制。方法SD大鼠分为4组:假手术组、Y27632对照组、模型组、实验组,每组8只。以盲肠结扎穿孔法建立脓毒症大鼠模型,假手术组和Y27632对照组只进行开腹手术而不进行盲肠结扎和穿孔;Y27632对照组和实验组造模前15 min腹腔注射Y27632(5 mg·kg^(-1))干预,假手术组和模型组给予等量的磷酸盐缓冲溶液。造模24 h时,以苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠小肠病理学变化,并进行小肠黏膜Chiu评分;以酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清D-乳酸水平;以免疫组化法测定小肠组织Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和Occludin蛋白表达。结果假手术组、Y27632对照组、模型组和实验组Chiu评分分别为(0.38±0.28),(0.46±0.35),(4.04±0.28)和(3.08±0.24)分;血清D-乳酸含量分别为(530.19±58.09),(533.91±61.65),(832.47±39.37)和(708.13±52.55)ng·mL^(-1);小肠组织ROCK1的表达量分别为0.22±0.02,0.24±0.02,0.35±0.01和0.27±0.02;p-MLC的表达量分别为0.25±0.01,0.25±0.01,0.36±0.01和0.31±0.01;ZO-1的表达量分别为0.38±0.03,0.38±0.02,0.24±0.01和0.32±0.03;Occludin的表达量分别为0.35±0.01,0.35±0.02,0.23±0.01和0.27±0.01。上述指标:模型组与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论Rho激酶抑制剂Y27632可通过抑制ROCK1/MLC信号通路,增加紧密连接蛋白的表达,降低肠道通透性,改善脓毒症大鼠肠屏障功能障碍。

Rho激酶抑制剂对脓毒症大鼠肠损伤的作用及机制研究

目的探讨Rho激酶抑制剂对脓毒症大鼠肠损伤的影响及其可能机制。方法将32只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、Rho激酶抑制剂Y-27632对照组(Y+Sham组)、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术(CLP)组〕及Y-27632预处理组(Y+CLP组), 每组8只。采用CLP法制备大鼠脓毒症模型;Sham组和Y+Sham组只游离拨动盲肠、不进行结扎穿孔。Y+Sham组和Y+CLP组大鼠于术前15 min腹腔注射Y-27632溶液5 mg/kg进行预处理;Sham组及CLP组大鼠则腹腔注射等量磷酸盐缓冲液(PBS)。于术后24 h取大鼠心脏血, 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清二胺氧化酶(DAO)含量。收集小肠组织, 苏木素-伊红(HE)染色后, 光镜下观察肠组织病理学变化, 并进行肠黏膜损伤评分(Chiu’’s评分);采用免疫组化法检测肠组织Rho相关卷曲螺旋激酶1(ROCK1)和核转录因子-κB(NF-κB)阳性表达;采用ELISA法检测肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的含量。结果 Sham组和Y+Sham组肠组织结构完整, 黏膜纤毛排列整齐;与Sham组相比, CLP组肠道黏膜纤毛排列紊乱, 大量炎症细胞浸润, Chiu’’s评分显著升高(分:3.83±0.27比0.12±0.11, P<0.05), 说明大鼠发生了脓毒症肠损伤;与CLP组相比, Y+CLP组大鼠肠上皮细胞坏死程度减轻, 可见少量炎症细胞浸润, Chiu’’s评分显著降低(分:2.85±0.21比3.83±0.27, P<0.05), 说明Y-27632预处理可以减轻脓毒症大鼠肠损伤。与Sham组相比, CLP组肠组织ROCK1和NF-κB阳性表达、血清DAO及肠组织TNF-α含量显著增加〔ROCK1表达(A值):0.19(0.18, 0.22)比0.10(0.09, 0.11), NF-κB表达(A值):0.40±0.02比0.15±0.01, DAO(ng/L):287.81±23.31比144.92±17.72, TNF-α(ng/L):101.08±5.62比74.81±5.56, 均P<0.05〕, 而肠组织IL-10含量显著降低(μg/L:55.16±5.20比95.95±7.53, P<0.05);与CLP组相比, Y+CLP组肠组织ROCK1和NF-κB的阳性表达、血清DAO及肠组织TNF-α的含量均显著降低〔ROCK1表达(A值):0.15(0.13, 0.18)比0.19(0.18, 0.22), NF-κB表达(A值):0.28±0.01比0.40±0.02, DAO(ng/L):243.34±19.76比287.81±23.31, TNF-α(ng/L):90.41±8.79比101.08±5.62, 均P<0.05〕, 而肠组织IL-10的含量则显著增加(μg/L:66.15±5.74比55.16±5.20, P<0.05), 说明Y-27632预处理对脓毒症肠损伤大鼠的保护作用可能与调节RhoA/ROCK1/NF-κB信号通路有关。结论 Rho激酶抑制剂可以减轻脓毒症大鼠肠损伤, 其机制可能与抑制肠道RhoA/ROCK1/NF-κB信号通路, 减轻肠道炎症反应有关。

Rho/ROCK信号通路在脓毒症相关脏器损伤中的作用及机制研究进展

脓毒症(sepsis)被定义为宿主对感染反应失调导致的器官功能障碍,具有高发病率、高死亡率的特点,给全球医疗卫生体系带来巨大的经济负担[1]。迄今为止,脓毒症的发病机制仍未完全阐明,临床上关于其治疗也缺乏有效的干预措施,因此亟需寻找新的有针对性的治疗策略。Rho是Ras基因同源家族蛋白,充当细胞内信号传导的分子开关,可激活其下游蛋白Rho激酶(Rho associated coiled-coil kinase,ROCK),在炎症反应、细胞凋亡、免疫调节、凝血和内皮细胞功能障碍等过程中发挥重要作用[2]。