eEF1A1低表达对肝癌细胞凋亡、增殖与迁移的影响及eEF1A1/A2与ANXA7间的相互作用

[目的]研究shRNA抑制eEF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响,并通过分别下调eEF1A1和ANXA7的表达,探讨肝癌Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。[方法]构建靶向eEF1A1基因的shRNA质粒表达载体,瞬时转染至小鼠肝癌Hca-P细胞中,设无处理组（CON）、eEF1A1-shRNA组（eEF1A1-shRNA）、转染pGPU/GFP/Neo-NC的阴性对照组（NC）三组细胞进行实验。采用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测eEF1A1的抑制效果,并分别检测各组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达。CCK-8法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。此外,复苏已稳定低表达ANXA7的Hca-P细胞,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测无处理组（CON）、ANXA7-shRNA转染组（ANXA7-shRNA）、阴性对照组（NC）三组Hca-P细胞中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达。[结果]eEF1A1靶向shRNA成功下调小鼠肝癌Hca-P细胞中eEF1A1基因的表达。流式细胞仪检测显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组细胞凋亡率分别为2.85%±0.37%、4.71%±0.21%和3.01%±0.33%,eEF1A1-shRNA组的细胞凋亡较CON组和NC组明显增加（P〈0.05）;CCK-8实验发现,eEF1A1-shRNA转染细胞后细胞增殖能力较CON组和NC组明显下降;Transwell实验显示,CON组、eEF1A1-shRNA组、NC组迁移细胞数目为123.75±9.26、66.84±17.47、115.31±12.59,eEF1A1-shRNA组细胞迁移能力较CON组和NC组显著减弱（P〈0.05）。qRT-PCR和Westernblot检测显示,eEF1A1-shRNA组eEF1A2、ANXA7在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组明显降低（P〈0.05）,相较其无处理组的蛋白表达水平,eEF1A2和ANXA7分别下降了57%和21%;ANXA7-shRNA组中eEF1A1、eEF1A2在mRNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组亦明显降低（P〈0.05）。[结论]通过靶向eEF1A1的shRNA使eEF1A1低表达,可诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力及迁移能力。eEF1A1、eEF1A2与ANXA7的表达密切相关,且eEF1A1与ANXA7存在相互作用,可能共同参与调控肿瘤的发生与发展。