siRNA干扰铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达的研究

目的探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA—MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响。方法设计并合成4条小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）（siRNAl、siRNA2、siRNA3和siRNA4）序列，构建干扰RNA（short hair pin RNA，shRNA）表达载体，将带有siRNA质粒电转入PAOI和临床耐药株PA03。应用E-test方法检测PA01和PA03抗生素MIC的变化。用半定量RT—PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化。结果经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功，并明显提高PAO和临床耐药株PA03对抗生素的敏感性。RT-PCR结果显示干扰后的PA01和临床耐药株PA03mexB基因表达明显下降（P〈0．05）。结论siRNA成功干扰MexA－MexB－OprM外排泉mexB基因的表达，提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性，为临床上治疗铜绿假单胞菌感染，降低其耐药性提供了新的思路。