用于乙肝疫苗效力检定的NIH-q小鼠种群的建立

用7个近交系及两个NIH封闭群小鼠分别测定同一样品乙肝疫苗的免疫原性,由不同品系小鼠求出的ED_(50)值之间有显著差异,且该反应差异性与小鼠的H-2单倍型密切相关.NIH小鼠H-2基因的杂合性影响乙肝疫苗效力检定结果的准确性。通过对NIH小鼠的遗传选择,建立了H-2单倍型为q,对HBsAg免疫应答性较为一致的NIH-q种群,同时保持了原封闭群动物繁殖力强、生长速度快等优点.

检定所清洁动物楼的建立及应用

检定所清洁动物楼的建立及应用邢瑞昌，李其明，郑方治，张业彬，姜蒙男，贺争鸣，吴敬红，涂杏珍，杨瑞荣（中国药品生物制品检定所，北京）检定所清洁动物楼是一座生产清洁级和ＳＰＦ级啮齿类实验动物的设施，建筑面积２５７４平方米。１９９０年８月破土动工，１９９２...

实现实验动物升级换代，为药品生物制品检定工作服务

实现实验动物升级换代，为药品生物制品检定工作服务邢瑞昌中国药品生物制品检定所实验动物中心（北京天坛西门１０００５０）我所是一个对药品生物制品进行质量检定的国家级法定检验机构。每年用于药品检定科研的实验动物数量在十万只以上，品种有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔...

应用RAPD方法对近交系小鼠进行遗传检测的研究

目的 为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法 用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。

3R理论的形成、发展及在生命科学研究中的应用

一、3R理论的形成及发展 3R是Reduction(减少)、Replacement(替代)和Refinement(优化)的简称. Reduction是指在科学研究中,使用较少量的动物获取同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多试验数据的方法. Relacement是指使用其他方法而不用动物所进行的试验或其他研究课题,达到某一试验目的.或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法.

乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法 根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论 本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。

猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究

目的 建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法 采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果 HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论 建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。

单管双向等位基因专一性扩增方法在近交系小鼠遗传检测中的应用

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single-tube bi-directional allele specific amplification,SB-ASA)方法用于分析近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(SNP)。方法以5个近交系小鼠为研究对象,采用SB-ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过双盲实验和测序验证该方法的可靠性;且考察了该方法中PCR反应各成分及扩增条件对结果的影响。结果16个SNP位点,SB-ASA都成功地对5个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致;双盲实验结果显示通过3个SNP位点即可鉴别5个品系。结论SB-ASA方法可用于近交系小鼠SNP的遗传检测,可望作为一种新的分子生物学遗传检测方法推广应用。

雌雄金黄地鼠血液生理生化指标的比较分析

目的测定金黄地鼠的血液生理生化参考值,并对两性的参考值进行比较。方法将88只4周龄金黄地鼠,80只8周龄金黄地鼠,采血后,用日本光电MEK-7222K血球分析仪测定血液生理指标,用Olympus AU400全自动生化分析仪测定血清生化指标。结果4周龄金黄地鼠血液生理指标中RBC、HGB、HCT、MCV和RDW性别差异有显著性(P<0.05),而WBC、MCH、MCHC、PLT、PCT、MPV和PDW等性别差异无显著性(P>0.05);4周龄金黄地鼠血清生化指标中ALB、ALP、GLU、CA、P、CHO和TG性别差异有显著性(P<0.05),而ALT、AST、TP、BUN和CREA等性别差异无显著性(P>0.05)。8周龄金黄地鼠血液生理指标中WBC、LYM、MON、BAS、LYM%、NEUT%、MCH、RBC、HGB、HCT、MCV、PDW和RDW性别差异有显著性(P<0.05),而MCHC、PLT、MPV、PCT、NEUT、EOS、BAS、MON%和EOS%等性别差异无显著性(P>0.05);8周金黄地鼠血清生化指标中ALT、ALB、BUN、GLU、CREA、P、CHO和TG性别差异有显著性(P<0.05),而AST、TP、ALP和CA等性别差异无显著性(P>0.05)。结论金黄地鼠血液的生理生化值受多种因素影响,部分指标两性间测定值有差异,但多数指标差异不显著。

5Mrad ^（60）Co照射灭菌饲料饲养无菌动物的试验

本文报告用６０Ｃｏ照射灭菌饲料饲养无菌动物的试验结果，解决因高压灭菌饲料造成的营养素大量破坏，适口性差，降低了饲养难度，便于无菌动物的推广应用。

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增。根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小。结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致。结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义。

2003-2007年我国实验小鼠病毒抗体检测结果与分析

目的了解国内近5年来小鼠病毒感染情况,为我国实验小鼠质量控制及标准化工作提供依据。方法依据国家标准对2003-2007年我国21个省/市、47个单位送检39个品系小鼠及小鼠血清进行病毒抗体检测,并对检测结果进行比较分析。结果不同等级3659只(份)小鼠及血清中,除汉坦病毒外,其他10种病毒均有不同程度感染,抗体阳性率在0.24%～5.66%。结论我国实验小鼠病毒监测工作及质量控制仍需加强。

4个近交系小鼠SNP位点的测定

目的将新近建立的单管双向等位基因专一性扩增(single_tube bi_directional allele specific amplification,SB_ASA)方法用于分析国内近交系小鼠基因组中的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。方法以国内4个近交系小鼠为研究对象,采用SB_ASA方法对其16个SNP位点进行检测,并通过测序进行验证。结果16个SNP位点,SB_ASA都成功地对4个品系小鼠进行了分型,与测序结果完全一致。结论SB_ASA方法可以准确地检测国内近交系小鼠SNP位点等位基因型。

Tw近交系小鼠的遗传鉴定和罕见基因分析

目的通过等位基因酶的生化多态性可以发现小鼠DNA的序列多态性,为人类疾病基因鉴定和动物实验的研究提供丰富的动物基因库,为科研工作提供宝贵资源。方法应用国产生化标记检测试剂盒,采用遗传生化检测方法,对天津市卫生防病中心自主培育的近交系小鼠进行Akp-1(碱性磷酸酶-1)等二十五个生化位点标记基因检测。结果经检测发现TW(Tianjin wild)小鼠在Amy1(淀粉酶-1),Es2(酯酶-2),Es3(酯酶-3),Es10(酯酶-10),Gpd1(葡萄糖磷酸脱氢酶-1),Hbb(血红蛋白β链),Np1(核苷酸磷酸化酶-1),Pgm2(磷酸葡萄糖变位酶-2)共八个生化位点发现罕见基因。结论检测国内新品系的遗传生化基因位点,发现罕见基因型。

实验大鼠泰泽菌检测方法的比较研究

目的 比较实验大鼠泰泽菌检测方法─nested PCR、IFA、免疫抑制诱发试验 触片染色镜检和组织病理学诊断。方法 根据泰泽菌 16SrDNA合成引物 ,对 16个菌株作nested PCR扩增并进行特异性、敏感性试验、验证。将此PCR应用于 2 0只免疫抑制Wistar大鼠和 5只非免疫抑制SD大鼠泰泽菌检测 ,并作IFA、常规细菌学检测和组织病理学诊断。结果 nested PCR中仅有泰泽菌出现 196bp特异性扩增条带 ;而 15株非泰泽菌均未出现此扩增条带。该PCR能检出 10pg泰泽菌DNA。将此PCR应用于大鼠泰泽菌检测 ,结果未检出阳性样品。nested PCR与常规细菌学检测、组织病理学诊断结果相一致。采用IFA方法 ,以购得的大鼠泰泽菌抗原片对上述 2 5份大鼠血清进行检测 ,结果有 6份血清产生非特异性反应。结论 采用IFA对动物群进行筛查出现阳性结果 ,须采用免疫抑制诱发试验、PCR和组织病理学诊断技术组合进一步验证。本研究建立的nested PCR方法 ,特异、敏感、快速 ,结合组织病理学诊断技术对实验动物泰泽菌感染可做出精确诊断。

不同周龄大耳白兔血液生理生化指标的测定

为了明确大耳白兔中国兽药监察所封闭群的生物学特性 ,对其血液生理生化指标进行了测定。选 5、1 0及 1 3周龄的雄兔和雌兔 ,空腹采血测定红细胞、白细胞等 1 6项血液生理指标和血糖、总蛋白等 1 6项生化指标。 1 0周龄的红细胞数、白细胞数、红细胞压积和平均红细胞血红蛋白含量高于 5周龄和 1 3周龄 ,雌雄间血液生理指标无明显差异 ;血清丙氨酸转氨酶含量随着周龄的增加而升高 ,碱性磷酸酶则随着周龄的增加而下降。与日本大耳白兔相比 ,主要血液生理指标比较接近 ,丙氨酸转氨酶、白蛋白、尿素氮、直接胆红素等血液生化指标相近 ,其他指标有所不同。测定结果表明 ,该封闭群具有不同于日本大耳白兔 (Slc:JW/ CSK)