山核桃实时荧光定量PCR分析中内参基因的筛选与验证

【目的】筛选出山核桃中的最佳内参基因。【方法】以山核桃的根、茎、叶、柱头、果皮、胚、不同处理下的叶片及嫁接后的砧木和接穗为试验材料,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder 4种软件对10个管家基因家族(ARF、ACT1、ACT7、MPS、UBC9、CYP、60SRP、EF-1α、GAPHD和HIS)中的19个候选内参基因表达的稳定性进行综合分析。【结果】通过比较不同组织内参基因表达的稳定性,排名前五的5个基因(ARF-1、60SRP、ACT7-1、ACT1-1和UBC9-5)被选出且ARF-1和60SRP的表达最稳定。geNorm分析显示:在盐、干旱及嫁接处理后,60SRP的表达最稳定;外源喷施不同激素到山核桃叶面后,UBC9-5的表达最为稳定;综合所有组织和处理发现UBC9-5为最稳定表达的基因。NormFinder和RefFinder综合分析的结果与geNorm分析结果基本一致,而与BestKeeper分析相差较大。【结论】在山核桃的不同组织及不同试验处理中,最适的内参基因有所不同,其也受分析方法的影响。