半滑舌鳎白化现象的初步研究

通过建立半滑舌鳎家系对其白化现象进行了初步研究。实验共建立半滑舌鳎家系17个，首先对这17个家系白化率进行了抽样统计和方差分析，并对部分家系的白化个体的眼睛异常率进行了统计；其次，选取其中白化率较高的4个家系，对白化个体和正常个体的生长情况进行了对比；最后，对白化率较高的4个家系白化个体和正常个体的抗鳗弧菌病能力进行了比较。结果发现，不同家系个体白化率有较大的差别，3号家系白化率最高，高达94．50％，15号、33号和37号家系白化率为0．00％；父本为养殖群体的家系的平均白化率最高，为19．68％，父本为野生群体的家系的平均白化率最低，为3．21％，父本为选育群体的平均白化率为7．50％，但3者之间差异不显著（P〉0．05）；3个家系的白化个体眼睛异常率较高，5号家系为48．48％、10号家系为45．83％和12号家系为88．89％。选取4个家系对其白化个体和正常个体的生长情况进行比较发现，同一家系中3～4月龄白化个体在全长、体宽和体质量方面均显著或极显著小于正常个体，但生长至12～13月龄时，这种差异基本不显著，1号和17号家系白化个体的全长、体宽和体质量甚至超过了同家系的正常个体；1号和17号家系白化个体的日增重分别超过了同家系的正常个体。对选取的4个家系的白化个体和正常个体进行鳗弧菌感染实验发现，白化个体的死亡率均低于同家系正常个体，l号和17号家系的白化个体的抗病性相对同家系正常个体较突出，死亡率分别比正常个体低24．92％和20．25％。研究表明，半滑舌鳎野生群体的后代白化率较低，白化现象会伴随一定比例的眼睛异常，白化个体初期生长较慢，后期生长加快，甚至会超过正常个体，并且同一家系中白化个体的抗病性要优于正常个体。

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因克隆与表达分析及SNP筛选

天然抗性相关巨噬细胞蛋白(Natural resistance-associated macrophage protein,Nramp)属于膜整合转运蛋白,具有抑制胞内寄生菌侵染、调节巨噬细胞的抗菌活性等作用。本研究对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)Nramp基因进行了克隆和表达分析,并对其与抗鳗弧菌感染相关的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点进行了筛选。该基因c DNA序列全长3717 bp,其中开放阅读框(Open reading frame,ORF)1677 bp,所编码蛋白含有558个氨基酸,该蛋白具有Nramp家族的典型特征,包括10个跨膜区(Transmembrane,TM)、1个由20个氨基酸残基组成的胞质内转运蛋白特征结构域(Consensus Transport Motif,CTM)。半滑舌鳎Nramp的ORF末端有1个类似于脊椎动物Nramp2中的铁反应控制蛋白结合位点(Iron-responsive regulatory protein-binding site,IRE)。半滑舌鳎Nramp与其他14个物种的Nramp氨基酸序列同源性在63%-91%之间,系统进化分析表明,半滑舌鳎Nramp和所有鱼类Nramp聚集为一簇,与其他物种Nramp2的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析显示,Nramp基因在半滑舌鳎脾脏和肾脏中的表达量最高,而在肌肉和性腺中的表达量最低;在哈维氏弧菌感染的半滑舌鳎肾脏、脾脏和肝脏中表达量呈升高趋势,而在鳃中则表现为下调趋势。利用直接测序法检测感染鳗弧菌后同一家系的233个个体(抗病个体165个,感病个体68个),共检测到15个SNP位点,对其中3个SNP位点即SNP-g.3113(T→C)、SNP-g.3125(A→G)和SNP-g.3164(A→T)进行测序分型后发现,SNPg.3125(A→G)的等位基因(G)频率和基因型(GG)频率与半滑舌鳎抗鳗弧菌疾病呈极显著相关(P<0.01)。研究结果表明,Nramp基因不同基因型对半滑舌鳎的抗病能力有着极其重要的影响,SNP-g.3125(A→G)可作为潜在的抗性遗传标记位点。本研究将为半滑舌鳎抗性品系培育提供技术支持。