MicroRNA的生物表达与结核病诊断和治疗监测的相关性及其对结核病易感基因表达调控的研究

目的探究微小核糖核酸(MicroRNA)对结核病诊断和治疗监测及易感基因表达调控的意义。方法选取136例肺结核患者作为肺结核组,另选择142例健康体检者作为对照组。以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组血清hsa-miR-20b、CUL4A mRNA、GBP5 mRNA水平;检测干扰素调节因子8基因(IRF8)、循环换血RNA-103571(hsa-circRNA-103571)、γ-干扰素(IFN-γ)水平。比较两组血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA的表达量;比较两组血清IRF8、hsa-ciceRNA-103571、IFN-γ水平;分析肺结核患者hsa-miR-20b与IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-γ的相关性;回归分析肺结核发生的影响因素;分析血清hsa-miR-20b对肺结核的诊断效能。结果肺结核组患者血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA、CUL4A mRNA的表达水平分别为(3.35±0.20)、(2.94±0.23)、(0.41±0.15),对照组分别为(1.01±0.23)、(1.02±0.13)、(1.03±0.11);与对照组相比,肺结核组患者血清hsa-miR-20b、GBP5 mRNA的表达水平均升高,CUL4A mRNA的表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺结核组患者血清IRF8(389.39±46.85)pg/ml、hsa-circRNA-103571(22.48±5.06)ng/L均高于对照组的(327.62±41.76)pg/ml、(11.36±3.17)ng/L,IFN-γ(5.58±1.36)pg/ml明显低于对照组的(12.72±4.78)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,肺结核患者血清hsa-miR-20b与IRF8、hsa-circRNA-103571水平呈正相关(r=0.585、0.539,P<0.05),与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.485,P<0.05)。以hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571、IFN-γ水平为自变量,以肺结核是否发生为因变量,行Logistic回归分析,结果显示hsa-miR-20b、IRF8、hsa-circRNA-103571是肺结核发生的危险因素(P<0.05),IFN-γ是肺结核发生的保护因素(P<0.05)。血清hsa-miR-20b水平对肺结核发生诊断的曲线下面积(AUC)为0.898,截断值为1.44,其灵敏度为83.82%,特异度为88.03%。结论肺结核患者血清hsa-miR-20b表达上调,hsa-miR-20b与炎症相关因子具有一定相关性,其可能与炎症因子共同影响肺结核疾病病变过程。

环介导核酸等温扩增技术对疑似结核病患者的筛查效果

目的评价环介导核酸等温扩增（100p-mediated isothermal amplification，LAMP）技术对疑似结核病患者的筛查效果。方法选取沈阳市第十人民医院2015年5月至2016年6月收治的疑似结核病患者604例，收集标本604份，其中痰标本503份，胸腔积液抽取液98份，支气管肺泡灌洗液3份，分别行涂片抗酸染色镜检（简称“涂片镜检”）、改良罗氏固体培养（简称“固体培养”）、MGIT960液体培养（简称“液体培养”）和LAMP检测，以临床诊断结果为标准，评价4种检测技术对结核病患者的检测效能，采用x^2检验比较结核分枝杆菌的阳性检出率，以P（0．05为差异有统计学意义。结果以临床诊断结果为参照，LAMP检测、涂片镜检、液体培养、固体培养的敏感度分别为72．78％（262／360）、51．67％（186／360）、66．67％（240／360）和59．17％（213／360）；特异度分别为88．11％（215／244）、99．59％（243／244）、99．59％（243／244）和99．59％（243／244），并且具有良好的一致性（Kappa值依次为0．58、0．46、0．61和0．54）。LAMP检测对病程〈1年患者的阳性检出率[45．76％（189／413）]明显高于涂片镜检E27．12％（112／413）1、液体培养[-37．05％（153／413）]和固体培养[-31．48％（130／413）（x^2=62．41、16．62、40．95，P值均=0．000）。当患者出现的临床症状45个时，LAMP的阳性检出率（44．37％，268／604）明显高于涂片镜检（28．15％，170／604）、液体培养法（36．75％，222／604）和固体培养法（32．12％，194／604）（x^值分别为76．22、21．59和47．21，P值均=0．000）。LAMP检测对涂片镜检阴性，液体培养及固体培养阴性标本具有较高的阳性检出率[分别为28．78％（120／417），（21．49％（78／363）和25．90％（101／390）]。结论LAMP技术检测结核分枝杆菌较涂片镜检、液体培养和固体培养检测效能高，适用于病程短、临床症状较轻（1～5个症状）、涂阴和培阴的疑似结核病患者的筛查。

1873例结核感染T细胞斑点试验检测阳性患者的临床分析

目的探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT．TB）检测结果与结核病患者临床表现的相关性。方法选取临床确诊结核病且T-SPOT．TB检测阳性患者1873例，并从患者的基本情况、细菌学、影像学及常规检查等4个方面对T-SPOT．TB检测结果[SFCs（个）／10^6 PBMCs]与结核病患者临床表现的相关性进行比较分析。结果初治患者外周血单核细胞（PBMCs）中斑点形成细胞（SFCs）数[A孔中位数17个，B孔中位数13个]明显高于复治患者[-A孔中位数9个，B孔中位数9个]（A孔U--364391．5，P％0．01；B孔u=364259．0，P〈0．01）；中青年患者SFCs数EA孔中位数17个，B孔中位数12个]明显高于老年患者[A孔中位数9个，B孔中位数9个]（A孔U=304368．5，P％0．01；B孔U=302802．0，P〈0．01）；菌阳患者的SFCs数[A孔中位数27个，B孔中位数20个]明显高于菌阴患者[A孔中位数10个，B孔中位数10个]（A孔u=298504．0，P％0．01；B孔u=279815．5，P〈0．01）；肺部有空洞的患者SFCs数[A孔中位数32个，B孔中位数25个]明显高于肺部无空洞的患者[A孔中位数10个，B孔中位数9个]（A孔u=208015．5，P〈0.01；B孔u=216424．5，P〈0．01）；外周血单核细胞升高的患者SFCs数[A孔中位数21个，B孔中位数20个]明显高于外周血单核细胞正常的患者EA孔中位数10个，B孔中位数9个]（A孔U=308522．0，P〈0．01；B孔U=307748．0，P〈0．01）。结论T-SPOT．TB的SFCs计数虽然并不能完全与结核病活动程度呈正相关，但仍然存在着结核病活动程度越高SFCs数越多的趋势。

TLR9和VDR基因多态性与结核病易感性的相关性分析

目的探讨TLR9（rs352139）和VDR基因（rs731236和rs2228570）单核苷酸多态性（SNP）与结核病易感性之间的相关性。方法选取2013年1月-2015年6月期间我院确诊为初治活动性肺结核患者300例（结核组）和300例健康体检者（健康对照组）,采用聚合酶链反应结合高分辨率熔解曲线对rs352139、rs731236和rs2228570位点的SNP进行检测。结果 TLR9（rs352139）的AA和GG基因型比AG基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.061（0.76-1.49）和1.472（0.95-2.27）;Taq（rs731236）的TT和CC基因型对比TC基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.049（0.68-1.61）和1.204（0.36-3.99）;Fok（rs2228570）的CC和TT基因型对比TC基因型人群患结核病的风险增加,OR值分别为1.164（0.83-1.64）和1.048（0.69-1.61）,但两组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论在中国沈阳地区,TLR9（rs352139）和VDR基因（rs731236和rs2228570）SNP可能与结核病易感性关联不大。

103例未成年结核病患者T-SPOT结果分析

目的：探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT）检测孔斑点数与未成年结核患者临床表现之间存在的联系。方法选取2012年1月~2015年2月我院临床确诊为结核病且T-SPOT检测阳性的未成年患者病例，并对T-SPOT结果与结核患者临床表现进行比较分析。结果肺部有空洞病变的患者A和B孔斑点数均明显高于肺部无空洞的患者，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 T-SPOT检测孔斑点数量可能与肺部空洞病变有关，肺部空洞病变越严重，斑点数越多。

512例老年结核病患者T-SPOT.TB结果回顾性分析

目的探讨酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）检测结果与老年结核患者临床表现的相关性。方法选取本院2012年1月~2015年2月临床确诊结核病且T-SPOT.TB检测阳性老年患者病例,分析T-SPOT.TB结果与结核患者临床表现的相关性。结果菌阳患者的斑点数明显高于菌阴患者的斑点数（P〈0.01）,肺部有空洞的患者斑点数明显高于肺部无空洞的患者（P〈0.01）。结论 T-SPOT.TB的斑点数虽并不精确地与结核活动程度成正相关,但仍然存在结核活动程度越高,斑点数越多的趋势。

结核患者血清miR-590-3p水平的变化分析

目的检测结核患者血清miR-590-3p表达水平,并分析不同病理特征下患者血清miR-590-3p水平的变化。方法以医院2016年9月-2017年2月收治的结核感染特异性T淋巴细胞检测(T-SPOT. TB)阳性且ESAT-6和CFP10斑点数均20的就诊结核疑似患者78例为观察组,以同期于本院就诊及检查体检的T-SPOT. TB阴性且ESAT-6和CFP10斑点数均3的人群93例为对照组,采用qRT-PCR检测法检测2组对象血清miR-590-3p表达水平,并对比分析;同时,根据观察组患者临床病理特征的分组,分析不同病理特征下患者血清miR-590-3p水平的变化。结果观察组平均血清miR-590-3p表达水平为(6. 75±5. 34),低于对照组的(14. 69±13. 33,P <0. 05);菌阳结核病例低于菌阴结核病例(P <0. 05);临床分期、空洞形成、病变范围的不同对外周血清miR-590-3p表达无显著影响(P>0. 05)。结论血清miR-590-3p可作为人群结核感染性评估的潜在生物学标志物。将附加修饰序列的miRNA导入体内,通过其控制结核基因表达而控制结核发病会成为可能。