细胞培养过程中支原体污染的防治与检测方法

目的:为高效便捷地去除细胞培养过程中支原体污染,采用多种抗生素和检测方法对污染细胞进行处理和检测.方法:分别采用Plasmocin、BM-Cyclin、MRA3种药物对污染细胞进行处理,以CLARK的一步法试剂、Biotool的快速检测试剂和自行研制的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)等3种方法进行检测.结果:一步法试剂检测显示Plasmocin处理14d后支原体消除,快速检测试剂检测显示BM-Cyclin处理21d彻底消灭支原体,而MRA经PCR检测发现彻底消除支原体需要14d;另外,3种药物交替使用清除支原体的效果更加显著.结论:通过使用3种抗生素和3种支原体检测方法,使细胞培养过程中的支原体污染得到有效控制,为更好地开展细胞研究奠定基础.

肝癌干细胞表面标志物研究进展

近年来有许多学者提出肿瘤干细胞理论,认为肿瘤是由少数肿瘤干细胞与大多数的普通肿瘤细胞组成,这让人们从新的角度去了解肝癌.肝癌干细胞(liver cancer stem cell,L C S C)的研究为肝癌的治愈提供新的希望,因而LCSC的分离鉴定显得尤为重要;因为肿瘤干细胞的分离鉴定主要依据肿瘤干细胞标志物的表达,目前多种肿瘤干细胞标志物已被科学家证实,肝癌也不例外.所以本文主要阐述总结了7种LCSC的表面标志物的特点及对其临床意义.

实时动态活细胞成像系统在单克隆筛选和克隆形成能力检测中的应用

目的利用IncuCyte ZOOM系统筛选肿瘤细胞单克隆和克隆形成能力检测.方法采用差速消化与差速贴壁分离培养原代肿瘤细胞;在有限稀释法基础上,采用IncuCyte ZOOM系统的实时动态追踪和全孔成像技术对肿瘤细胞进行单克隆筛选及克隆形成能力分析.结果从30例肿瘤组织中培养6株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-02至07),进一步从5株原代肿瘤细胞(TJ3ZX-03至07)中成功筛选出89个持续增殖的单克隆,其中67个克隆扩增培养并冻存;并且通过时序图准确有效地排除了18个不能持续增殖的单克隆和28个由2个及以上细胞组成的多克隆.2例单克隆株(TJ3ZX-06-B11,TJ3ZX-07-H11)克隆形成能力分析表明,14 d时平皿方法的克隆形成率(35.17%,13.17%)高于IncuCyte ZOOM 96孔全孔成像(23.13%,5.51%),且差异有统计学意义(P<0.05);延长至21 d时全孔成像的克隆形成率为(35.63%,13.22%),与平皿方法比较无统计学差异.结论 IncuCyte ZOOM系统能够简便、准确、省时省力地实现单克隆细胞筛选和克隆形成率检测.