高糖环境下大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4 mRNA的表达

目的观察高糖环境对大鼠背根神经节(DRG)细胞瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)﹑蛋白激酶Cε(PKCε)mRNA表达的影响,明确高糖环境对以上2种受体的调控作用。方法急性分离新生大鼠DRG细胞,培养48 h后更换培养液并分组。按照培养基含糖量不同分为:对照组(5.5 mmol/L,C组)、高糖1组(17.5 mmol/L,H1组)、高糖2组(35.0 mmol/L,H2组)。换液后48 h提取细胞总RNA并进行逆转录。用RT-PCR及实时定量PCR检测TRPV4和PKCεmRNA表达的变化。结果与对照组比较,PKCεmRNA在H1组表达没有明显变化(P>0.05),而在H2组表达显著上调(P<0.05)。与对照组比较,TRPV4 mRNA在H1组表达显著上调(P<0.05),而在H2组表达没有明显变化(P>0.05)。结论高糖环境可以上调TRPV4/PKCε基因的表达,但是2种基因明显上调时糖浓度不一致,说明TRPV4的激活除了PKCε的调控外还受其它因素调节。

TRPV4和PKCε在糖尿病大鼠背根神经节神经元中的表达

目的探讨糖尿病不同时期蛋白激酶Cε(PKCε)和瞬时性受体电位通道4(TRPV4)在大鼠DRG神经元中的表达及意义。方法采用经典糖尿病模型,检测不同病程糖尿病大鼠DRG神经元中PKCε和TRPV4的表达。用免疫荧光方法,观察背根神经节(DRG)在痛性糖尿病神经病变(PDN)过程中PKCε和TRPV4阳性细胞的变化。结果 PKCε和TRPV4在正常大鼠的背根神经节中均有表达。在糖尿病大鼠中,PKCε和TRPV4的表达水平都出现先升高后降低的现象。其中,PKCε在糖尿病第4周的表达水平最高,TRPV4在糖尿病第1周的表达水平最高。结论高糖慢性刺激可导致DRG神经元PKCε和TRPV4的表达改变,在短期内有明显的增加,但2者高峰出现的时间不同。TRPV4的增加依赖于PKCε,而后者错后的高峰说明其参与更多的细胞内机制。

不同糖浓度中大鼠DRG神经元相关蛋白表达及Ca2＋浓度的测定

目的观察高糖对背根神经节(DRG)中瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)和蛋白激酶Cε(PKCε)的表达以及细胞内Ca2+浓度的影响,探讨其在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用机制。方法培养的新生大鼠DRG神经元分成正常对照组(C组)、中糖组(M组)和高糖组(H组)。48 h后通过蛋白质免疫印迹法测定DRG神经元TRPV4和PKCε的表达水平,并通过共聚焦显微镜测定DRG神经元[Ca2+]i的水平。结果 TRPV4、PKCε蛋白的表达上调且呈浓度依赖性。C组、M组、H组TRPV4蛋白分别为0.33±0.05、3.20±0.40和7.69±0.60;PKCε蛋白分别为0.88±0.04、1.08±0.08和1.97±0.35。在TRPV4激动剂4α-PDD的作用下,与C组比较,H组[Ca2+]i显著升高(P<0.05),且呈浓度依赖。结论高糖可以上调DRG神经元中TRPV4、PKCε蛋白的表达,增加神经元内Ca2+浓度。TRPV4、PKCε对DRG神经元内Ca2+起到了协同调控的作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸肝细胞毒性相关作用机制研究

目的研究丙戊酸肝细胞毒性相关机制。方法使用人肝癌细胞系HepG2,VPA、TSA处理,检测细胞活性、凋亡情况、线粒体膜电位、PI3K/AKT/mTOR通路活性、Bcl-2、Bax凋亡通路和自噬激活情况。结果5 mmol/L、10 mmol/L VPA处理24 h,细胞活性明显降低;5μmol/L TSA处理24 h,细胞活性明显降低。因此选用10 mmol/L VPA、5μmol/L TSA。10 mmol/L VPA处理24 h或5μmol/L TSA处理24 h,细胞凋亡率显著升高,细胞线粒体膜电位降低,细胞PI3K/AKT/mTOR通路活性降低,细胞Bcl-2活性降低,Bax活性升高,cleaved-caspase-3比例升高,细胞LC3Ⅱ表达增加,p62表达降低,VPA的作用强于TSA。结论 PI3K/Akt/mTOR通路抑制以及线粒体异常引起的凋亡在VPA相关肝毒性中发挥重要作用,而且VPA的肝毒性也与其HDAC抑制剂活性具有一定关联。