检测可溶性B7-H4 ELISA夹心法的建立

目的:建立定量检测可溶性B7-H4的ELISA夹心法。方法:采用抗人B7-H4单克隆抗体(mAb)包被酶标板,以兔抗鼠B7-H4多克隆抗体为夹心抗体、HRP标记羊抗兔IgG为检测抗体、重组小鼠可溶性B7-H4为标准品,建立检测可溶性B7-H4的间接ELISA法,并对50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清样本进行了检测。结果:建立的夹心ELISA法检测B7-H4的线性范围为3.13μg/L^200μg/L,批内、批间变异系数分别为7.92%和11.1%。50例正常人和37例术后乳腺癌患者血清B7-H4的含量分别为(31.62±9.85)μg/L和(42.52±16.63)μg/L,两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论:成功建立了一种灵敏度高、稳定性好的检测可溶性B7-H4的夹心ELISA法。

脓毒症多器官损害与髓样细胞触发受体-1基因表达的关系

目的探讨髓样细胞触发受体-1(TREM-1)基因表达与脓毒症所致多器官损害的关系。方法采用小鼠盲肠结扎穿孔(CLP)造脓毒症模型。将60只雄性小鼠随机分为正常对照组(n=10)、假手术组(n=10)和脓毒症组(n=40),并按不同的时间点留取肝、肺、肾、小肠组织及血液样本,分别用于检测TREM-1mRNA,TNF-αmRNA表达及测定丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)、肺组织髓过氧化物酶(MPO)、小肠组织二胺氧化酶(DAO)的活性。结果与对照组及假手术组相比,CLP后6h肝、肺、肾组织TREM-1 mRNA表达开始增多,肝组织24 h表达均达峰值(P<0.01),肺、肾组织12 h表达达峰值(P<0.01),小肠组织的TREM-1表达表现出了一定的升高趋势,但差异无显著性(P>0.05)。TNF-αmRNA在各组织的表达在CLP后6h开始升高(P<0.05或P<0.01),12h降低,48h再次升高(P<0.05)。相关分析结果显示,肝、肺、肾、小肠组织中TREM-1基因表达分别与TNF-αmRNA表达、ALT,Cr,MPO及DAO水平显著相关。结论脓毒症可导致多种组织TREM-1 mRNA表达增加,其改变与多器官损害密切相关。

小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备

目的探讨小鼠B7-H4原核表达载体的构建、表达及多克隆抗体的制备。方法采用特异性引物扩增小鼠B7-H4(mB7-H4)胞外功能区DNA,经酶切、拼接构建原核表达载体pET28a-mB7-H4。将构建的重组表达质粒转化入E.coliBL21(DE3)菌株,采用IPTG诱导表达、Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白、SDS-PAGE分析蛋白纯度。将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果序列测定证实了构建的pET28a-mB7-H4重组表达载体含有mB7-H4编码序列,其序列分析与GenBank中公布序列对比一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为26.5 KD的目的蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化后的目的蛋白达到电泳纯。双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶12 800,Western blot分析显示抗体能特异性结合mB7-H4。结论成功制备了高表达重组mB7-H4蛋白的原核表达载体及高效价抗mB7-H4多克隆抗体,为进一步研究B7-H4的功能奠定了基础。

丙泊酚对胆道感染患者髓样细胞触发受体-1表达的影响

目的探讨丙泊酚对胆道感染患者外周血髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的影响。方法 48例严重胆道感染患者,随机分为两组:丙泊酚处理组(P 组,n=28),术中用丙泊酚6 mg·kg^(-1)·h^(-1)及异氟醚(呼气末异氟醚浓度维持在1%)维持麻醉;对照组(N 组,n=20),术中用异氟醚维持麻醉(呼气末异氟醚浓度维持在2.5%)。上述两组术中均间断静脉注射阿曲库铵、芬太尼维持麻醉.且用量无差异。两组分别在手术前及手术后12、24、48、72 h 留取血液标本,用流式细胞术检测外周血 TREM-1蛋白的表达;用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测血肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。结果术前两组患者的 TREM-1及 TNF-α含量差异无统计学意义;P 组患者术后12、24、48、72 h 的 TREM-1及 TNF-α水平均明显低于 N 组(P<0.05)。结论严重胆道感染患者可致外周血TREM-1蛋白高水平表达。丙泊酚可降低 TREM-1蛋白表达水平.减轻炎症反应。

右美托咪定联合帕瑞昔布钠对七氟醚全身麻醉患者苏醒时间躁动发生程度及不良反应的临床影响

在麻醉中,全身麻醉恢复过程是关键环节,极易引发严重并发症。目前,麻醉医学的一个研究热点为如何平稳拔管,对患者稳定的血流动力学进行维护,使患者安全舒适的苏醒[1]。七氟醚全身麻醉在临床较为常用,但是大部分患者在麻醉诱导期间会有兴奋出现,躁动是其主要临床表现,对麻醉诱导质量造成不良影响[2]。右美托咪定属于一种α2受体激动药,具有选择性、较高的特异性、能够发挥抗交感、镇痛、镇静作用,较易唤醒患者,因此近年来在临床得到了广泛的应用[3]。相关医学研究表明[4],右美托咪定能够减少小儿七氟醚麻醉气管拔管期间躁动。但是,仍然需要进一步深入研究右美托咪定是否能够促进七氟醚吸入麻醉诱导质量的提升。本研究分析了2019年1月至2020年1月本院七氟醚全身麻醉患者100例的临床资料,探讨了七氟醚全身麻醉中右美托咪定联合帕瑞昔布钠对患者苏醒时间、躁动发生程度及不良反应的影响。