牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性的研究

目的:探讨牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性。方法:采用胶原酶消化人牙周膜组织,获得牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs),经体外鉴定、扩增后构建PDLSCs细胞膜片,并通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜(SEM)对PDLSCs细胞膜片形态学进行检测。此外,细胞膜片厚度及膜片中细胞密度也被检测。结果:PDLSCs成功被分离、培养、鉴定,并且PDLSCs体外培养2周后,获得白色膜状PDLSCs细胞膜片。倒置显微镜下观察显示,细胞复层生长,细胞呈典型的纺锤状。体式显微镜下观察显示,细胞与细胞之间紧密连接。组织学观察显示,细胞与细胞之间存在着大量细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)。扫描电镜下观察膜片表面显示,细胞在膜片上充分伸展,细胞之间紧密连接。PDLSCs细胞膜片厚度由起初的(48±3.2)μm到3周后的(69±3.4)μm,但在第2周细胞厚度(64±3.3)μm,变化最明显。细胞膜片中的细胞密度检测显示连续培养3周后仍然有大量具有活性的细胞存在,然而细胞密度在第2周时最大。结论:本研究证明我们已经成功探索出一套稳定、可靠的PDLSCs细胞膜片构建方法,为利用PDLSCs细胞膜片修复、再生牙周组织及牙周缺损提供了一定的技术保证。

头颈部侵袭性纤维瘤9例及文献复习

目的：探讨头颈部侵袭性纤维瘤的临床表现、病理特征、治疗方式及预后。方法：根据2005年世界卫生组织的肿瘤类指导原则，回顾性分析2008～2012年间收治9例头颈部侵袭性纤维瘤的临床资料并复习相关文献。结果：发病部位以颈部（3例）、下颌下区（2例）最为常见，其次是上颌骨、颧部、眶下区、腮腺各1例，对9例患者都实施手术切除，4例患者因肿瘤已侵犯头颈部重要结构，无法获得阴性切缘，其中1例患者发生恶变，接受放射治疗，另2例术后未接受综合治疗，术后复发，所有病例无远处转移，随访时间为6～51个月。结论：头颈部侵袭性纤维瘤诊断主要依靠术后病理，彻底手术切除是治疗并减少复发的主要手段，对于复发或难以完整切除的病例可配合放化疗，且术后长时间密切随访。

牙周膜干细胞聚合体：一种潜在骨组织再生方法

目的:探索牙周膜干细胞的成骨能力。方法:体外培养牙周膜干细胞(PDLSCs),经体外鉴定、扩增构建PDLSCs细胞膜片(CS)和细胞聚合体(CP),通过大体观察、HE和免疫组化染色、扫描电镜进行形态学检测,实时定量PCR检测CS和CP成骨相关基因的表达水平,并观察裸鼠体内成骨能力。结果:成功分离、培养并鉴定PDLSCs后,构建PDLSCs CS和CP。组织学观察发现CP内细胞外基质丰富;免疫组化染色发现这些细胞外基质中骨涎蛋白(BSP)、碱性磷酸酶(ALP)和I型胶原表达呈阳性;CP上BSP、ALP和Runx2基因表达水平明显高于CS;体内实验发现CP组大量骨样组织形成,而CS组可见纤维样骨组织形成。结论:PDLSCs细胞聚合体技术为修复牙槽骨缺损提供了一种新的方法。

颞下颌关节骨关节炎关节上下腔内改变的临床研究

目的 探讨颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)关节上、下腔软硬组织的改变。方法 选取2019年1月至2022年3月于西安交通大学口腔医院口腔颌面外科行颞下颌关节成形术治疗的TMJOA患者19例(20侧)为研究对象。先行关节上腔内窥镜检查并清理上腔部分病变,根据关节盘完整性,处理关节下腔病变;并对关节上、下腔内的改变情况进行分析和讨论。结果 20侧上腔内至少存在骨赘、松散小骨体和关节结节踝突骨质硬化3种不同程度病变;20侧髁突骨质病变均符合影像学检查,髁突和关节结节表面软骨出现退变;但影像学检查无法观察到髁突病变与关节盘粘连情况。结论 TMJOA患者关节上腔内普遍存在急、慢性滑膜炎,上腔内其他病理改变符合骨关节炎表现。TMJOA患者反复疼痛不适可能与髁突骨质病变(侵蚀破坏、骨刺、骨赘等)逐渐与关节盘粘连引起刺激相关。

3D打印辅助自体牙移植修复牙齿缺失的临床疗效评价

目的探讨3D打印辅助自体牙移植修复牙齿缺失的临床疗效评价。方法选取自2017年9月-2021年8月在西安交通大学附属口腔医院口腔外科门诊行自体牙移植手术病例169例,移植牙176颗,分别从年龄、性别和受牙牙位、受牙患病或缺失情况、供体牙牙位及手术时长、随访情况等方面进行分析。结果共完成牙移植手术169例,移植牙176颗,其中传统牙移植133例,3D打印辅助自体牙移植43例。3D打印辅助牙移植手术的供体牙离体时间比传统牙移植显著缩短(P<0.0001)。术后3个月因牙齿松动无法保留而拔除者(认定为移植失败)共9颗,其中传统牙移植失败7例,3D打印辅助自体牙移植失败2例。传统牙移植手术成功率为77%,存留率为94.7%;3D打印辅助牙移植手术成功率为88%,存留率为95.3%。结论应用3D打印供牙模型完成自体牙移植手术显著缩短供体牙离体时间,减轻对移植牙牙周膜细胞的损伤,可提高牙移植成功率,值得推广。

骨髓间充质干细胞向牙髓组织迁移体内模型的构建

目的:构建一种骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)向牙髓等口腔组织迁移分化的体内模型,为进一步研究BMMSCs迁移、归巢机制从而诱导其修复、再生口腔组织奠定基础。方法:将第1代绿色荧光蛋白(Green flurensence protein,GFP)转基因小鼠的BMMSCs与野生型C57BL6小鼠的全骨髓细胞按一定比例混合后,尾静脉注射入亚致死量照射24h后的16只同品系小鼠体内(GFP-BMMSCs:2×105/只;BMCs:2×106/只),28d后随机选取6只嵌合小鼠,检测其股骨BMMSCs中GFP+BMMSCs细胞的比例。对同一处理组剩余小鼠右下颌磨牙牙髓施加刺激,7d后行多聚甲醛心脏灌注,并采集标本,常规脱钙处理后以自体左侧磨牙作为对照,组织学观察比较牙髓中荧光细胞数量改变。结果:嵌合模型股骨BMMSCs中GFP+的比例为(76.32±3.46)%,口腔刺激侧牙髓中荧光细胞数量明显多于同一个体对照侧(P<0.05)。结论:以荧光细胞作为示踪标记的骨髓移植动物可作为有效的研究模型探索骨髓间充质干细胞在体向牙髓等口腔组织迁移分化机制。

白花丹素对舌鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移的作用及机制研究

目的:探讨葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter isoform 1,GLUT1)与舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)转移的关系,以及白花丹素(plumbagin,PLB)对TSCC细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:免疫组化分析GLUT1和基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein 2,MMP2)与TSCC转移的关系。MTT检测PLB对TSCC细胞的增殖抑制作用,并计算24h的IC50值。Transwell、划痕实验和Westernblot分别检测肿瘤细胞的侵袭和迁移能力以及相关蛋白的表达改变。结果:免疫组化显示GLUT1和MMP2的高表达与TSCC的转移密切相关(P<0.05)。MTT显示PLB作用24h的IC50值为6.87μmol/L;Transwell以及划痕实验分别显示,PLB及NSC207895、WZB117处理组的细胞穿膜数及迁移率明显减少(P<0.05);Westernblot显示,PLB处理后p53表达升高(P<0.05)、GLUT1以及MMP2表达下降(P<0.05);NSC207895处理后GLUT1及MMP2表达下降(P<0.05);WZB117处理后p53无明显改变(P>0.05)、MMP2表达下降(P<0.05)。结论:GLUT1高表达与TSCC转移密切相关,PLB可通过调控p53/GLUT1/MMP2通路抑制TSCC细胞的侵袭和迁移。

大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建及其特性

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞膜片的构建和基本生物学特性。方法:从GFP-SD荧光大鼠体内提取原代骨髓并培养骨髓间充质干细胞(BMMSCs),鉴定后用于体外构建BMMSCs细胞膜片,用荧光显微镜、倒置显微镜和HE染色对膜片进行形态学检测,并提取膜片RNA用于RT-PCR实验,检测相关促愈合因子的表达情况。结果:BMMSCs成功分离、培养和鉴定。体外诱导培养2周后获得白色膜状细胞膜片,并可用机械力刮下。显微观察显示细胞呈长梭形重叠生长,染色显示细胞间紧密连接并分泌大量细胞外基质(ECM)。RT-PCR结果显示,膜片细胞与正常培养的BMMSCs相比,高表达TGF-β、FGF、VEGF和ColⅠ等细胞因子和蛋白,但在诱导1周和2周时的表达量无显著差异。结论:本方法能够较为稳定的在体外构建BMMSCs膜片,该膜片显著高表达TGF-β等促愈合因子。

一种通量模板的简易组织芯片制作方法

目的:介绍一种通量模板的简易组织芯片制作方法。方法:用一次性注射器针头制作组织芯片穿刺针及打孔针,配合设计制作通量模板,制作组织芯片蜡块及组织芯片,并进行HE及免疫组化染色。结果:依照上述方法制作口腔鳞状细胞癌组织芯片蜡块完整无开裂,蜡块内无气泡,无变形,组织芯柱与周围石蜡融为一体结合紧密,矩阵排列整齐,无移动、错位或漂浮。肉眼大体观察组织芯片切片,微阵列排列整齐,切片完整,无刀痕、裂隙、皱褶现象。HE结果显示,组织形态结构完整,诊断结果与大体标本诊断一致。免疫组化结果与原免疫组化结果一致。结论:通量模板制作的组织芯片经济实用。

一种快速获得纯度较高的内皮祖细胞的方法

目的:探讨利用密度梯度离心法+差速贴壁法联合特殊培养基诱导法来分离、扩大培养内皮祖细胞(EPCs)。方法:从兔的髂骨处抽取骨髓,利用Percoll淋巴细胞分离液进行高速梯度离心,先利用α-MEM培养液培养单核淋巴细胞层48 h,然后取其上清离心后用EGM-2 Bulletkit培养液进行培养诱导并进行扩增传代。从形态学、特异性荧光染色、细胞表面特异性标志物、体外成管腔以及体内成血管等方面来鉴定细胞以及活性。结果:获得的细胞培养1周即出现典型的铺路石样,细胞表面高度表达造血来源的CD133和VEGFR2标志物。具有同时摄取Dil-ac-LDL及结合FITC-UEA-I的能力。在体外6 h就可形成管腔样并随着时间延长相互连接成脉管样且维持时间长达2周之久;在裸鼠皮下可以形成明显的血管网络结构,且可以迁移至周边组织。结论:建立一种新的可快速获得纯度较高的骨髓来源的内皮祖细胞方法。

显微外科在口腔医学教育中教学设计与培训时机的探讨

目的通过比较口腔医学本科实习生和口腔颌面外科青年住院医师显微外科培训效果,探讨显微外科教学的设计和培训的最佳时机。方法70名实习生和30名住院医师参加7天的显微外科培训,3名导师独自对参培学员进行评分取均值。结果住院医生缺席率高(P<0.01);理论部分,实习生为15.06分,住院医师为12.73分(P<0.01);实践部分,实习生为11.69分,住院医师则为9.87分,并且实习生在处理组织方面得分高于住院医师(P<0.01)。结论实习生和住院医师均掌握了显微外科技术,但实习生培训效果优于住院医师。这提示应在口腔医学本科实践教学中设立显微外科培训课程。

聚乙酸-聚乙醇酸共聚物复合同种异体细胞修复软骨缺损

背景:以自体骨髓间充质干细胞和软骨细胞作为种子细胞修复软骨缺损可达到理想效果,但存在细胞数量不足及二次创伤等问题。目的:观察同种异体骨髓间充质干细胞和软骨细胞与聚乙酸-聚乙醇酸共聚物复合修复关节软骨的可行性。方法:将15只新西兰大白兔随机分为实验组、对照组、空白组,制作关节软骨缺损模型,分别于骨缺损处植入同种异体骨髓间充质干细胞和同种异体软骨细胞与聚乙酸-聚乙醇酸共聚物复合体、自体骨髓间充质干细胞和自体软骨细胞与聚乙酸-聚乙醇酸共聚物复合体、聚乙酸-聚乙醇酸共聚物材料。结果与结论:术后12周苏木精-伊红及Masson三色染色显示,实验组软骨缺损处可见软骨细胞,呈圆形或多角形,柱状排列,软骨陷窝形成明显,可见大量细胞外基质沉积,修复组织显示出透明软骨样,与周围软骨结合好,与底层骨结合紧密;对照组与实验组无明显差别;空白组软骨缺损处可见纤维样细胞。说明同种异体骨髓间充质干细胞和软骨细胞与聚乙酸-聚乙醇酸共聚物复合可修复关节软骨缺损。

人骨髓间充质干细胞/细胞外基质复合体用于骨缺损再生修复的研究

目的:评估人骨髓间充质干细胞/细胞外基质复合体(C-BMSC)的骨缺损再生修复能力。方法:体外构建C-BMSC,通过大体观察、HE染色、扫描电镜进行组织形态学检测;TUNEL染色法检测细胞凋亡水平;免疫荧光染色和PCR法检测成骨相关因子的表达水平;大鼠颅骨缺损模型评估C-BMSC体内骨缺损再生修复能力。结果:组织形态学显示5 d组C-BMSC的细胞外基质(ECM)最丰富,ECM将细胞完全包裹,ECM纤维粗壮,小分子物质附着;TUNEL染色结果提示3 d与5 d组细胞凋亡数量接近,而7 d时细胞凋亡显著增加(P<0.001);PCR结果表明C-BMSC对ALP、COL-1、Runx2和OCN表达均高于细胞膜片(P<0.05);免疫荧光结果显示C-BMSC中ECM对ALP、COL-1、BSP表达均呈阳性;大鼠颅骨移植实验结果表明C-BMSC组骨体积与软组织体积比显著高于空白组。结论:本研究证明C-BMSC具有良好的成骨分化能力,这为骨缺损再生修复提供了一种新的策略。

腔镜辅助下经口内入路颌下腺切除术临床效果研究

目的:探讨腔镜辅助下经口内入路颌下腺切除术的近期临床效果。方法:将20例颌下腺良性病损患者随机分为口内入路组(IOA组)和口外入路组(TCA组),均进行颌下腺良性病变切除。IOA组10例,在腔镜辅助下采用超声刀对颌下腺良性病变进行切除。TCA组10例,采用常规术式切除。比较两组在近期疗效、手术时间、住院时间、术后并发症及美容效果,以及疼痛、口底肿胀和进食视觉模拟量表(VAS)评分等方面的差异。结果:两组近期疗效比较无统计学差异(P>0.05)。IOA组手术时间长于TCA组(P<0.05),但两组住院时间比较无统计学差异(P>0.05)。术后2 d,IOA组疼痛、口底肿胀和进食VAS评分高于TCA组;术后第3天,口底肿胀和进食VAS评分高于TCA组;术后1周,口底肿胀VAS评分仍高于TCA组(均P<0.05)。两组术后并发症发生情况比较无统计学差异(P>0.05)。IOA组术后美容效果优于TCA组。结论:腔镜辅助下经口内入路切除颌下腺是一种安全、可靠和成本效益较高的手术方式。对于特定患者,它是替代口外入路的有效术式。

吸烟饮酒对不同年龄OSCC患者预后的影响

目的通过分析口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者的临床资料,讨论吸烟饮酒对不同年龄OSCC患者预后的影响。方法收集2010年6月—2021年6月西安交通大学口腔医院颌面肿瘤外科收治的215例OSCC患者病例资料进行回顾性分析,将年龄≤45岁的患者定义为青年组患者,将年龄>45岁的患者定义为中老年组,根据是否有吸烟饮酒史进一步分组,通过分析无瘤生存率、无远处转移生存率和总生存率对患者预后进行评估。结果OSCC所有纳入病例中,青年组舌或其他位置恶性肿瘤发病率显著高于中老年组患者(P<0.05),且OSCC临床分期和分化程度与预后指标均显著相关(P<0.05);预后分析发现青年组患者吸烟饮酒史和临床分期与预后显著相关(P<0.05),中老年组患者单因素分析发现OSCC临床分期(P<0.05)与预后相关而多因素分析无相关性(P>0.05);生存分析发现青年组患者中吸烟饮酒是造成不良预后的危险因素,中老年组中无相关性。结论吸烟饮酒史对青年患者预后有较大影响,临床上应对具有吸烟饮酒史的青年OSCC患者高度关注。

初步探索miR-27b-3p在普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤过程中的作用

目的研究miR-27b-3p在普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma,IH)的作用机制。方法用0、15、30、45、60、90μM普萘洛尔处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),检测最佳浓度。采用实时PCR检测miR-27b-3p及凋亡因子mRNA表达,通过Western blot法检测凋亡相关蛋白表达,利用双荧光素酶报告检测miR-27b-3p与Apaf-1的靶向关系。结果30μM普萘洛尔的最佳浓度作用后,miR-27b-3p表达下调,而Apaf-1、PARP、Caspase-9和Caspase-3表达上调,与敲除miR-27b-3p后结果相一致。上调miR-27b-3p后,细胞凋亡水平和凋亡因子表达被抑制。targetscan.org基因数据库分析发现miR-27b-3p与Apaf-1mRNA的3’UTR匹配,荧光素酶实验结果显示miR-27b-3p与Apaf-1具有靶向关系。结论miR-27b-3p靶向抑制Apaf-1降低细胞凋亡水平,干扰普萘洛尔疗效。

LncRNA GAS5通过miR-182-5p/FOXF2轴对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)调节微小RNA-182-5p(miR-182-5p)/叉头盒蛋白F2(FOXF2)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法收集45例确诊为OSCC的癌组织以及癌旁组织,体外培养人口腔上皮细胞系HOEC及人OSCC细胞系CAL-27、HSC-3、SCC-25,qRT-PCR检测组织、细胞中LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2的表达;择细胞株CAL-27分为ctrl组、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、pcDNA-GAS5+miR-NC组及pcDNA-GAS5+miR-182-5p mimics组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western Blot检测癌细胞中FOXF2、bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及E-cadherin蛋白表达,双萤光素酶报告实验验证miR-182-5p与LncRNA GAS5、FOXF2的关系。结果与癌旁组织相比,OSCC组织中LncRNA GAS5、FOXF2 mRNA表达降低,miR-182-5p表达升高(P<0.05);CAL-27、HSC-3、SCC-25细胞与HOEC相比,LncRNA GAS5、miR-182-5p、FOXF2表达趋势与OSCC组织内一致,且在CAL-27表达最明显,选择其作为后续实验的细胞株;与ctrl组、pcDNA组比较,pcDNA-GAS5组CAL-27细胞中GAS5、FOXF2 mRNA、细胞凋亡率及BAX、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),miR-182-5p表达、细胞增殖、迁移和侵袭数及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);上调miR-182-5p可减弱过表达LncRNA GAS5对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,也可抑制癌细胞凋亡;LncRNA GAS5靶向负调控miR-182-5p表达,miR-182-5p靶向负调控FOXF2表达。结论上调GAS5可能通过抑制miR-182-5p来增加FOXF2表达,进而抑制CAL-27细胞增殖、迁移及侵袭,促进CAL-27细胞的凋亡。

口腔颌面部恶性肿瘤术后感染相关因素分析

目的:分析口腔颌面部恶性肿瘤患者术后颌面部感染病原菌分布及特点。方法:回顾性分析2007年1月~2018年1月新疆医科大学第一附属医院颌面外科收治312例口腔颌面部恶性肿瘤患者病例资料,分析术后感染风险以及病原菌分布。运用Logistic回归分析恶性肿瘤术后感染的相关危险因素。结果:312例恶性肿瘤患者,术后发生感染39例(12.50%)。39例患者细菌培养其中铜绿假单胞菌10例(25.6%),咽链球菌和鲍曼链球菌5例(12.8%),绿脓链球菌3例(7.7%),溶血性链球菌8例(20.5%),金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌13例(33.4%)。单因素分析:年龄分布、肿瘤大小和位置、BMI指数糖尿病、手术时间、手术方式、ASA评分、CCI指数、是否输血、术前放疗与口腔颌面部恶性肿瘤术后感染相关。多因素分析:BMI指数、糖尿病、手术时间、ASA指数和手术方式是口腔颌面部恶性肿瘤术后感染的独立危险因素。结论:BMI指数、糖尿病、手术时间、ASA指数、和手术方式是口腔颌面部恶性肿瘤术后感染患者的独立危险因素,故术前需全面评估术后感染风险并给予相关处理。