血清甲状腺激素水平与不同肿瘤转移的相关性分析

目的探讨不同肿瘤患者甲状腺激素水平的差异,分析甲状腺激素水平与不同肿瘤转移情况的相关性。方法收集713例实体肿瘤患者和309例健康人的病历资料,比较不同转移情况肿瘤患者和健康人的甲状腺激素水平,采用相关性分析法分析不同转移情况肿瘤患者甲状腺激素水平与脂代谢指标的相关性。结果肿瘤患者促甲状腺素(TSH)、三碘甲腺原氨酸(T_(3))、游离三碘甲腺原氨酸(FT_(3))、游离甲状腺素(FT_(4))水平均明显低于健康人,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。在713例肿瘤患者中,发生转移患者317例,转移发生率为44.46%。转移垂体瘤患者TSH、甲状腺素(T_(4))、T_(3)和FT_(3)均低于未转移患者,转移肺癌患者TSH和FT_(4)均低于未转移患者,转移食管癌患者T_(4)低于未转移患者,转移肝癌患者T_(4)和FT_(4)均低于未转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤患者总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL)水平均明显高于健康人,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。转移垂体瘤、肺癌、食管癌及肝癌患者的TC和LDL水平均明显高于未转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。垂体瘤患者的FT_(3)、肺癌患者的FT_(4)、食管癌患者的T_(4)、肝癌患者的T_(4)与TC和LDL均呈负相关。结论T_(4)、FT_(3)和FT_(4)与肺癌、食管癌、垂体瘤、肝癌转移具有相关性。T_(4)、FT_(3)和FT_(4)降低可能通过提高TC和LDL影响脂代谢平衡,促进肿瘤转移,导致肺癌、食管癌、垂体瘤、肝癌的转移风险增加。

肝细胞癌复发进程中DNA修复调节的蛋白质组学分析及验证

目的分析肝细胞癌(HCC)复发进程中DNA修复调节的作用及机制。方法串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学方法分析HCC 2年内复发和5年预后良好的肝癌组织样本,分析富集在DNA复制、错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复4条通路的蛋白表达差异,分析在HCC复发进程中起主要作用的调控通路及靶点,预测可能的调控机制。计量资料2组间比较采用成组t检验;多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果真核生物复制复合体通路MCM2(P=0.018)、MCM3(P=0.047)、MCM4(P=0.014)、MCM5(P=0.008)、MCM6(P=0.006)、MCM7(P=0.007)、PCNA(P=0.019)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、LIG1(P=0.042)蛋白表达均显著降低;核苷酸切除修复通路中PCNA(P=0.019)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、LIG1(P=0.042)共4个蛋白表达水平均显著减少;碱基切除修复通路PCNA(P=0.019)和LIG1(P=0.042)在HCC复发组中均显著降低;错配修复富集通路中MSH2(P=0.026)、MSH6(P=0.006)、RFC4(P=0.002)、RFC5(P<0.001)、PCNA(P=0.019)、LIG1(P=0.042)共6个蛋白在肝癌复发组织中均显著减少。差异蛋白涉及MCM复合体、DNA聚合酶复合体ε、连接酶LIG1、长补丁碱基剪切修复复合体(long patch BER)、DNA错配修复蛋白复合体的重要组分。对DNA修复调节的重要差异蛋白进行临床样本验证分析,结果表明复发组中除MCM6表现出下降趋势外,MCM5(P=0.008)、MCM7(P=0.007)、RCF4(P=0.002)、RCF5(P<0.001)和MSH6(P=0.006)蛋白相对表达量均显著降低。结论HCC复发过程中,DNA修复进程中多个复合体蛋白组分存在显著减少或缺失。

miR-152-3p靶蛋白差异表达及调控机制在肝癌复发中的作用

目的比较肝癌复发与预后良好患者癌组织的蛋白表达,分析miR-152-3p相关的靶蛋白差异及调控机制,探讨miR-152-3p在肝癌复发中的作用。方法应用TMT标记全蛋白质组学测序方法和RT-PCR分别检测肝癌切除术后2年复发(n=6)与5年预后良好(n=6)患者肝癌组织的蛋白质表达和miR-152-3p的表达水平;联合六大数据库检索分析miR-152-3p靶基因,并运用Gene Ontology、DAVID和REACTOME数据库进行靶基因筛选、富集注释和信号转导通路富集分析;将筛选的miR-152-3p靶基因进行基因突变频率和生存曲线分析,验证miR-152-3p靶基因在肝癌复发中的作用。计量资料2组间比较采用独立样本t检验。肝脏组织有关基因生存率分析采用Kaplan-Meier分析。结果肝癌切除术后预后良好患者癌组织的miR-152-3p转录表达水平显著高于复发患者癌组织的水平(P<0.05)。蛋白测序结果显示,预后良好患者与复发患者的癌组织存在365个差异表达蛋白,联合肝癌复发数据库分析显示,其中有17个蛋白受miR-152-3p调控。进一步的信号通路分析发现,17个受miR-152-3p调控的靶基因其功能集中于线粒体核糖体翻译调控;多重富集发现靶基因与线粒体呼吸链复合体密切关系的蛋白6个,分别为AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1。基因突变频率及生存曲线分析发现,线粒体呼吸链相关靶蛋白的功能缺失或减弱会严重影响患者的生存率。结论miR-152-3p在HCC切除术后预后良好和复发患者的癌组织表达差异显著,miR-152-3p在肝癌复发中作用机制可能是通过调控靶基因AKAP1、FOXRED1、MRPL28、MRPL50、SHC1、STAU1作用于线粒体呼吸链,影响细胞氧化呼吸功能导致肝癌复发。

黄芪甲苷通过调控宿主核糖体翻译开关抑制HBV复制的机制

目的分析黄芪甲苷抑制HBV复制的宿主调控机制。方法使用不同浓度的黄芪甲苷处理人正常肝细胞(L-02),根据黄芪甲苷浓度的不同,分为0、5、10和20μg/mL 4组。应用CCK-8检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡,化学发光和生化方法检测AFP、ALT、AST和ALP外泌水平,评估黄芪甲苷对正常细胞的影响。用黄芪甲苷处理携带HBV的肝癌细胞Hep3B,应用qPCR方法检测HBV DNA、pgRNA、MTIF2、RPL10基因表达量,ELISA测法检测HBsAg和HBeAg,评估对HBV复制的影响。应用TCGA和GEO数据库结合R语言资料包对RPL10和MTIF2在临床样本中的预后影响进行分析验证。绘制Kaplan-Meier生存曲线,log-rank检验用于分析比较两组或多组之间的生存差异,进行了time ROC分析以比较RPL10和MTIF2基因的预测准确性和风险评分。计量资料多组间比较和同一组内不同时间段比较均采用单因素方差分析,进一步分析两两组间比较采用Bonferroni方法。结果20μg/mL组处理24 h和48 h相较未处理组细胞生长活性均显著提高(P值均<0.05),20μg/mL组处理72 h相较10μg/mL组生长活性提高(P<0.05),5μg/mL组处理72 h相较未处理组生长活性提高(P<0.05)。5、10和20μg/mL 3个处理组AFP水平均较未处理组显著增高(P值均<0.05),10和20μg/mL 2个处理组ALT水平分别均较未处理和5μg/mL 2组显著降低(P值均<0.05),20μg/mL组ALT水平较10μg/mL组显著降低(P<0.05)。5、10和20μg/mL 3个处理组AST水平较未处理组均显著增高(P值均<0.05)。5、10和20μg/mL 3个处理组HBV DNA、pgRNA、HBsAg、HBeAg、RPL10和MTIF2水平与未处理组比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。生物信息学分析结果显示,HBV感染的肝癌患者中RPL10和MTIF2基因较高水平表达的患者预后较差,而在无HBV感染的肝癌患者中不存在此现象。结论黄芪甲苷能够抑制翻译起始蛋白MTIF2和核糖体大亚基成分RPL10,通过调控宿主核糖体翻译开关降低HBV复制。

氯马斯汀对急性辐射损伤后OPCs细胞分化和髓鞘形成的影响

构建大鼠辐射损伤模型,蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)表达,从SD大鼠中分离原代少突胶质前体细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)和神经元细胞,并通过免疫荧光检神经丝蛋白(Neurofilament protein,NF)和OPCs标志蛋白硫酸软骨素蛋白多糖(Chondroitinsulphate peoteoglycan,CSPGs/NG 2)的表达以鉴定分离的原代细胞。CCK 8(Cell counting kit-8)实验用于检测不同浓度的氯马斯汀对OPCs细胞增殖的影响。通过慢病毒构建5组毒蕈碱型受体(Muscarinic cholinergic receptor,CHMR)干扰表达载体,并通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和WB检测转染效率。此外,为探究氯马斯汀对OPCs细胞分化和髓鞘形成的影响,通过WB和免疫荧光检测MBP和OLs表达少突胶质细胞系转录因子2(Oligodendrocyte lineage transcription factor 2,Olig 2)的表达。结果表明,氯马斯汀能够促进大鼠MBP形成,抑制OPCs细胞增殖,且具有浓度效率。与对照组相比,CHRM 1-CHRM 5干扰均显著降低了mRNA和蛋白的表达水平,其中CHRM 2干扰效率最佳。与对照组相比,CHRM 2干扰显著促进了MBP的表达,而氯马斯汀处理后进一步促进了MBP的表达;此外,免疫双荧光结果与上述推论一致,CHRM 2干扰显著促进了MBP和OLIG 2的表达,而氯马斯汀处理进一步的促进了MBP和OLIG 2的表达。氯马斯汀促进OPCs细胞分化和髓鞘形成。

阿维霉素干预MTIF2调控核糖体翻译进程抑制乙型肝炎病毒复制的机制研究

目的探讨核糖体翻译因子抑制剂阿维霉素对乙型肝炎病毒复制的抑制作用及分子机制。方法使用不同浓度的阿维霉素处理肝癌细胞Hep3B,应用CCK-8检测细胞活性,流式细胞法检测细胞凋亡,qPCR方法检测病毒HBV-DNA、pgRNA、宿主MTIF2和RPL10基因表达量,ELISA免疫测法检测HBsAg和HBeAg,化学发光检测法对AFP进行定量检测,生物化学方法检测细胞外泌谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)蛋白。结果阿维霉素对Hep3B细胞增殖没有抑制作用,对细胞的凋亡也没有影响。但能促进细胞AST分泌,降低AFP外泌水平,对ALP分泌影响较小。在Hep3B细胞中,阿维霉素能通过干预MTIF2促使pgRNA表达量积累,反馈上调宿主RPL10和MTIF2基因mRNA表达。并能有效降低HBsAg、HBeAg和HBV-DNA水平。结论阿维霉素能够抑制MTIF2翻译起始,通过影响翻译起始调控病毒组装蛋白的翻译进程,进而抑制乙肝病毒复制。

槐耳颗粒联合GP方案治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及对Th1/Th2免疫平衡和血清肿瘤标志物的影响

目的:观察晚期非小细胞肺癌(NSCLC)采用吉西他滨+顺铂(GP方案)联合槐耳颗粒治疗的疗效及对Th1/Th2免疫平衡和血清肿瘤标志物的影响。方法:选取2020年01月~2022年02月期间来成都市第六人民医院接受治疗的晚期NSCLC患者80例。采用双色球法将患者分为对照组(40例,GP方案治疗)和研究组(40例,槐耳颗粒联合GP方案治疗)。对比两组临床疗效、血清肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)]、Th1/Th2免疫平衡和不良反应。结果:研究组客观缓解率、疾病控制率高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率组间对比无差异(P>0.05)。研究组治疗后卡式评分(KPS)、Th1、Th1/Th2高于对照组(P<0.05),Th2低于对照组(P<0.05)。治疗后研究组血清CA125、CYFRA21-1、CEA水平较对照组低(P<0.05)。结论:槐耳颗粒联合GP方案治疗晚期NSCLC,可有效降低血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平,改善Th1/Th2免疫平衡,安全可靠。

hsa-miR-5688在肝细胞癌中靶途径预测体系的构建与验证

目的构建并预测在原发性肝细胞癌(肝癌)中hsa-miR-5688的靶途径及调控机制,并通过TCAG数据库和串联质量标签(TMT)标记LC-MS/MS蛋白质测序方法验证其结果,以期构建准确高效的微小RNA(miRNA,miR)靶途径预测方案。方法通过五大线上数据库筛选hsa-miR-5688靶基因,对细胞定位、分子功能、信号通路、疾病、组织表达和基因互作进行富集分析,构建分析策略,预测其靶途径及调控机制。利用TCAG数据库分析调控途径中靶基因的mRNA表达量、突变频率和生存曲线;基于肝癌复发和预后良好的肝癌组织标本,应用TMT标记蛋白质结合LC-MS/MS方法对靶途径中的互作蛋白进行定量检测,以验证预测体系的正确性。结果预测获得hsa-miR-5688调控的靶基因,包括信使RNA(mRNA)3031个,环状RNA(circRNA)1511个;代谢通路、细胞定位、分子功能、疾病、组织表达等富集结果经多重分析发现,靶基因RHOBTB1和UBE2W共同参与的泛素化蛋白降解途径是其调控肝癌进程的最关键信号通路。TCAG临床数据分析表明,泛素化途径的靶基因mRNA表达量在肝癌组织中明显高于正常肝组织,且基因突变会明显降低患者生存率。TMT标记蛋白质结合LC-MS/MS分析表明,与RHOBTB1和UBE2W互作的蛋白质泛素化降解相关基因UBA5、NEDD4L、UBE3C和USP14直接参与肝癌复发调控。结论hsamiR-5688可通过泛素化蛋白降解途径参与肝癌发生和复发进程,证明通过优化生物信息学构建快速预测miRNA靶途径的体系具有一定的高效性和准确性。