HLA-DPB1等位基因与四川汉族人哮喘的相关性研究

目的:探讨HLA-DPB1等位基因与哮喘之间是否存在相关性,从基因水平探讨支气管哮喘的发病机制。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析法,检测四川汉族人HLA-DPB1基因多态性。用PCR技术对HLA-DPB1基因第2外显子(exon 2)进行体外扩增;然后用Ban II、Fok I、Dde I、Rsa I、EcoN I、BstU I 6种限制性内切酶对扩增产物进行酶切,电泳分离酶切片段,根据片段格局确定相应基因型别。结果:PCR扩增在327 bp有HLA-DPB1 exon 2目的基因产生。限制性内切酶酶切HLA-DPB1后,共检测到12种等位基因。HLA-DPB1*0201在哮喘患者组的出现频率显著低于对照组(P<0．05,RR=0．115<1)。结论:HLA-DPB1* 0201可能为支气管哮喘的抗性基因。

MTT比色分析法的方法学探讨

本文以检测K562细胞增殖活性为例，对MTT法的实验条件进行了探讨，结果表明：20％SDS～50％DMF作甲溶解缓冲液效果最佳，其溶解的甲产物吸收峰为570nm波长。测定细胞范围800～400000／孔，能广泛地应用于多种细胞存活和增殖的测定。

应用Percoll分离纯化NK细胞

目的 :从人外周血中分离纯化高浓度、高纯度及活性良好的静息状态NK细胞 ,为进一步研究其特性打下基础。方法 :应用Percoll非连续密度梯度离心法结合panning负分离法获得所需NK细胞 ,并用免疫组化Envision二步法、MTT还原法分别对NK细胞的纯度、酶活性及细胞毒活性进行全面鉴定。结果 :NK细胞纯度为 6 0～ 80 % ,浓度最低可达 10 6/ml,细胞酶活性良好 ,细胞毒活性平均达 5 0 %。结论 :此分离法所获NK细胞数量及纯度较高 ,不影响细胞的酶活性 ,也不会激活NK细胞 ,是一种良好的静息状态NK细胞的分离方法。

NK细胞胞浆内游离Ca^(2+)浓度和分布的测定

目的 :确定NK细胞胞浆内Ca2 +的浓度及分布的检测方法。方法 :应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2 +的分布 ,并用Fluo- 3/AM和PluronicF - 12 7对胞浆内游离Ca2 +的浓度进行测定。结果 :最佳负载条件是用 2 μmol/ml的Fluo - 3/AM在 37℃恒温下孵育 6 0分钟 ,同时加入 1μl/ml 2 5 %的PluronicF - 12 7以阻断Ca2 +荧光示踪剂Fluo - 3/AM的外排和房室化。静息状态下NK细胞胞浆内Ca2 +分布不均衡 ,Ca2 +浓度为 91 3± 4 8nM( x±s)。结论 :应用Fluo - 3/AM和PluronicF - 12 7结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2 +的准确 ,简单 ,灵敏的方法之一。

扩大招生后医学微生物学实验课教学改革的思考

微生物学实验是一门实践性和应用性很强的课程,随着学校招生规模扩大,微生物学实验课的传统教学模式暴露出更多的问题.就目前存在的主要问题和对策进行了讨论,认为可通过调整实验教学内容,调动学生的主动性,应用现代化教育技术,优化考核制度等措施提高实验课教学水平和效果.

兔肾缺血再灌注损伤时TNF-α、IL-6和bFGF的变化及当归的影响

目的 :探讨当归对兔肾缺血再灌注损伤的防治作用及其机制。方法 :健康成年日本大耳白兔 2 5只 ,随机均分为假手术对照 (control)组、单纯缺血再灌注 (IR)组和缺血再灌注 +当归 (RAS +IR)组。在肾缺血 1h再灌注4 8h后取肾组织作电镜检查 ,并测血清肌酐 (Cr)、肾组织肿瘤坏死因子 (TNF -α)、白细胞介素 - 6 (IL - 6 )和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)含量。结果 :IR组肾组织变性改变显著 ,RAS +IR组病变轻微 ;IR组Cr、TNF -α和IL - 6含量显著高于control组 (P <0 .0 5 ,P <0 0 5和P <0 0 1) ;RAS +IR组上述指标显著低于IR组。IR组bFGF含量显著低于control组 (P <0 0 1) ,RAS +IR组bFGF含量显著高于IR组 (P <0 0 1)和control组 (P <0 0 5 )。结论 :当归具有防治肾IR损伤的作用 ,其机制可能与其对TNF -α、IL - 6和bFGF等细胞因子的调控有关。

黄芪注射液对兔缺血-再灌注肾损伤时IL-6和bFGF的影响

目的 :研究黄芪注射液对缺血再灌注 (IR)性肾损伤肾组织中白介素 6 (IL 6 )和碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)的影响 ,探讨黄芪注射液减轻 IR肾损伤的机制。方法 :成年日本大耳白兔 2 4只 ,随机均分为手术对照组、单纯缺血再灌注组 (IR组 )和黄芪注射液处理组 (黄芪 +IR组 )。用右肾动脉夹闭法制备肾 IR损伤模型。观察肾组织超微结构的改变 ,检测血清肌酐 (SCr)含量和肾组织中 IL 6、b FGF含量。结果 :肾缺血 1小时再灌注 48小时 ,电镜下观察 IR组肾组织变性改变显著 ,黄芪 +IR组病变明显减轻 ;SCr含量和肾组织中IL 6含量 IR组高于手术对照组 ,黄芪 +IR组低于 IR组 ,差异均有显著性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;肾组织中b FGF含量 IR组低于手术对照组 ,黄芪 +IR组高于 IR组 ,差异均有显著性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1)。结论 :IR肾损伤时肾组织中 IL 6含量升高、b FGF含量降低 ;黄芪可能通过调控 IL 6和 b FGF的产生或破坏而减轻 IR肾损伤。

苏木醇提取物对自身免疫性重症肌无力小鼠淋巴细胞功能影响的实验研究

目的采用中药苏木醇提取物治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)小鼠,观察其T淋巴细胞和B淋巴细胞功能的变化情况,探讨苏木治疗重症肌无力的作用机制。方法80只昆明小鼠被随机分为EAMG治疗组(20只)、EAMG对照组(20只)、佐剂对照组(20只)和正常对照组(20只)。采用乙酰胆碱受体(AChR)加完全福氏佐剂(CFA)的方法多次免疫小鼠,复制实验性自身免疫性重症肌无力小鼠模型;佐剂对照组模型制备成功后仅予完全福氏佐剂。所有小鼠均于末次免疫后7～14d行游泳试验和肌电图检查,进行模型鉴定。EAMG治疗组小鼠于末次免疫后第15天起,每天胃内灌注苏木醇提取物0.2ml/只,EAMG对照组、佐剂对照组及正常对照组胃内灌注等量生理盐水,连续给予4周后处死小鼠,应用MTT比色法检测T淋巴细胞和B淋巴细胞转化功能。结果(1)EAMG对照组小鼠的T淋巴细胞吸光度差值为(0.257±0.025),较佐剂对照组(0.147±0.022)及正常对照组(0.154±0.017)明显增高(P<0.01);EAMG治疗组小鼠的吸光度差值为(0.174±0.040),较EAMG对照组明显降低(P<0.01),但仍高于佐剂对照组和正常对照组(P<0.05);佐剂对照组与正常对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05)。(2)EAMG对照组小鼠的B淋巴细胞吸光度差值(0.789±0.101)较佐剂对照组(0.502±0.125)及正常对照组(0.493±0.09)明显增高(P<0.01);EAMG治疗组小鼠的吸光度差值为(0.590±0.120),较EAMG对照组明显降低(P<0.01),但仍高于佐剂对照组及正常对照组(P<0.05);佐剂对照组与正常对照组间相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论苏木具有下调实验性自身免疫性重症肌无力小鼠淋巴细胞功能,抑制N2乙酰胆碱受体抗原诱导特异性免疫反应。

黄芪和当归注射液对兔肾缺血再灌注损伤时腺苷三磷酸酶的影响(英文)

背景:近年研究表明,黄芪和当归具有抗自由基的作用,对肾缺血再灌注损伤具有保护作用。目的:观察黄芪、当归注射液在肾缺血再灌注损伤中对腺苷三磷酸酶(ATP酶)的保护作用及机制。设计:以实验动物为研究对象的观察对比实验。单位:一所医学院的生理教研室及肾功能保护研究室。材料:本实验于2001-01/2001-03在泸州医学院生理实验室完成。选择健康成年日本大耳白兔33只,由泸州医学院实验动物中心提供,雌雄不拘,体质量(1.63±0.22)kg。按随机数字表法分为假手术对照组8只、单纯缺血再灌注组8只、黄芪注射液+缺血再灌注组(黄芪组)8只、当归注射液+缺血再灌注组(当归组)9只。方法:术前1d、手术当天、术后1d,黄芪组、当归组每天分别静脉注射药物(黄芪1.25g/kg、当归12.5g/kg),对照组和单纯缺血再灌注组每天注射生理盐水5mL/kg。肾缺血1h再灌注48h后,下腔静脉采血,取右肾上极组织置入30mL/L戊二醛固定,下极组织制成组织匀浆。电镜检查肾组织超微结构,测血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。主要观察指标:肾组织超微结构、血清肌酐含量及肾组织中ATP酶活性。结果:单纯缺血再灌注组肾组织变性显著,黄芪组、当归组病变较单纯缺血再灌注组明显减轻。单纯缺血再灌注组血清肌酐含量明显高于假手术对照组(P<0.05);黄芪组、?

NK细胞膜受体与膜分子在Ca^(2+)信号传导中的作用

自然杀伤细胞是抗肿瘤和抗病毒感染细胞 ,其介导的自然细胞毒效应主要依赖于表面众多的膜受体和膜分子接受刺激 ,通过Ca2 +的信号传导作用而产生。这些膜受体和膜分子作用强度不一 ,缺乏典型的传导细胞毒信号的膜受体 ,但它们功能多样 ,作用协调 ,有效地调控了NK细胞功能的发挥。

人源性天然噬菌体展示文库的构建及鉴定

目的:构建人源性天然噬菌体展示文库并对文库进行鉴定。方法:从未经主动免疫健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA,用直接PCR及半巢式PCR扩增人抗体重链(VH)及轻链(Vκ和Vλ)可变区基因。采用改进的重叠延伸PCR法将VH基因和VL(Vκ和Vλ)基因连接成人单链抗体(scFv)基因,并将scFv文库基因克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E中,电转化E.coliTG1,构建单链抗体文库。结果:采用直接PCR和半巢式PCR扩增得到42条VH基因片段,16条Vκ基因片段,18条Vλ基因片段。混合的VH和VL等摩尔比连接后,产生的单链抗体文库基因大小为750bp左右;转化后构建了文库容量为1.35×108的单链抗体文库。BstNⅠ酶切分析文库中的单链抗体基因结果显示,酶切得到的scFv指纹图谱均不相同。结论:构建的抗体文库多样性好,可用于多种人源性单链抗体的筛选。

大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α的表达

目的探讨酒精致大鼠脑损伤合并内毒素血症过程中,脑组织TNF-α的水平变化及相互关系。方法采用SD大鼠进行酒精灌胃,建立酒精性脑损害的动物模型,用光镜观察各组大鼠脑组织的病理改变,采用偶氮显色法定量检测模型组与对照组血浆中内毒素(ET)的水平;用ELISA法检测各组脑组织匀浆中的TNF-α的水平。结果脑组织病理切片显示,模型组脑组织有严重损伤;模型组血浆中的ET以及脑组织匀浆中的TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05)。结论TNF-α在脑组织中的含量增高可能与酒精所致的大鼠脑组织损伤有密切联系。

肝毒清颗粒对急性肝损伤大鼠内毒素血症的防护作用

目的探讨中药肝毒消颗粒对急性肝损伤大鼠内毒素血症的防护作用。方法用硫代乙酰胺腹腔注射建立暴发性肝衰竭大鼠模型,以乙肝宁冲剂作为阳性对照,对比观察肝毒清颗粒大、中、小剂量对实验性急性肝损伤大鼠肝功能、血浆内毒素、细胞因子及肝组织病理学指标的影响。结果肝毒清颗粒大、中、小剂量组及乙肝宁阳性组在保护肝功能、降低血浆内毒素水平和血清TNF-α、IL-6水平以及改善肝脏病理损伤程度方面与模型组比较差异均有显著性;其中在降低ALT、AST及血浆内毒素水平方面以肝毒清颗粒大剂量组为优,在降低血清TNF-α、IL-6方面肝毒清颗粒大剂量组与乙肝宁冲剂效果相当。结论肝毒清颗粒有较好的改善肝功能,防治内毒素血症的功效;降低血浆内毒素和血清TNF-α、IL-6水平是其主要机制之一。

IL-33蛋白及抗IL-33全人源单链抗体的表达、纯化及鉴定

目的表达IL-33蛋白及抗IL-33全人源天然单链抗体并进行纯化及鉴定。方法前期采用噬菌体展示技术从文库容量为108的全人源天然抗体文库筛选了抗IL-33全人源单链抗体,并将筛选的抗IL-33基因转入表达载体p LY16中。在前期工作的基础上,进行了以下研究:表达并纯化人IL-33蛋白,将构建的IL-33/PET102/D-TOPO质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达后用Ni-NTA树脂纯化、浓缩再进行SDS-PGE电泳和Western blot验证。将抗IL-33 sc Fv/p LY16重组质粒转化入大肠杆菌DH5αF’中,应用PCR技术挑选阳性克隆并进行验证,IPTG诱导可溶性表达,Ni-NTA树脂纯化,SDS-PGE电泳和Western blot验证。结果 IL-33/PET102/D-TOPO质粒测序结果显示,插入的外源基因为人全长IL-33 c DNA。表达的IL-33融合蛋白相对分子质量为45 000左右。Western blot结果显示表达的蛋白为人IL-33蛋白。对从天然抗体文库中筛选的抗IL-33单链抗体进行测序,结果显示序列大小为750 bp左右,为开放阅读框,各序列之间有个别氨基酸的差异,说明为不同的单链抗体。ELISA结果显示抗IL-33单链抗体与IL-33有一定的结合能力。Western blot结果证实,表达的抗体为抗IL-33抗体。结论成功表达并纯化了IL-33抗原、抗IL-33全人源天然单链抗体。

MTT法进行活菌计数的方法学探讨

目的 :建立一种快速、稳定、灵敏并可反映细菌活性的细菌计数方法。方法 :以大肠杆菌为研究对象 ,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及反应时间、测量细菌数量的范围、MTT的用量、是否加入溶解剂等实验条件。结果 :细菌数在 3.8× 10 7～ 1.2× 10 9 ml范围内测出的OD值与细菌浓度呈良好的正相关 ,反应时间为 2 0分钟 ,MTT10 μl、2 0 μl均可 ,2 0 μl效果更佳。可不用溶解剂。 结论

人源性治疗性抗体的应用与制备进展

治疗性抗体在疾病的诊断和治疗方面具有重要意义。鼠源性单克隆抗体的临床应用受限于诱导产生人抗鼠抗体、亲和力低和半衰期短等,随着转基因小鼠和噬菌体展示技术的成熟,人源性治疗性抗体飞速发展,在肿瘤治疗、自身免疫性疾病的治疗、感染性疾病的治疗及减轻移植排斥反应、体内定位诊断、免疫调节等方面发挥重要作用。本文综述了治疗性抗体在肿瘤及免疫、移植等疾病中的治疗应用及人源性治疗性抗体的制备。

血痕HBsAg的检测在个人识别中的应用探讨

用乙肝表面抗原酶联免疫诊断盒检测ＨＢｓＡｇ携带者的血痕中ＨＢＳＡｇ，并采用盲法试验与血清检材进行比较．结果表明，本法检测血痕检材中ＨＢｓＡｇ与血清检材的结果一致，能准确检测出保存一个月的血痕中之ＨＢｓＡｇ．ＨＢｓＡｇ较相对稳定地存在于乙型肝炎患者和ＨＢｓＡｇ携带者血液中，通过检测其血痕中的ＨＢｓＡｇ能识别这种个体．在个人识别中具有重要意义．本方法操作简便，经济，省时，适合基层应用．

当归对兔肾缺血再灌注损伤的影响

目的 :研究当归对兔肾缺血再灌注损伤的防治作用及其机制。方法 :将 2 5只健康成年日本大耳白兔 ,随机分为手术对照组、单纯肾缺血再灌注 (IR)组和当归注射液 (RAS)处理IR(RAS +IR)组。肾缺血 1h再灌注48h时 ,取肾作电镜检查 ;测血清肌酐 (Cr)、肾组织中ATP酶活性和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的含量。结果 :IR组肾组织变性改变显著 ,RAS +IR组病变轻微。同对照组相比 ,IR组血清Cr含量升高 (P <0 .0 5 ) ,肾中ATP酶活性和bFGF含量降低 (P <0 .0 5和P <0 .0 1) ;RAS +IR组较IR组血清Cr含量降低 (P <0 .0 5 ) ,肾中ATP酶活性升高(P <0 .0 5 ) ,与对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;RAS +IR组肾中bFGF含量较IR组和对照组均升高 (P <0 .0 1和P<0 .0 5 )。结论 :当归可能通过保护ATP酶、诱bFGF产生而减轻IR肾损伤。