绿色荧光蛋白兔多克隆抗体的制备

目的制备绿色荧光蛋白(GFP)兔多克隆抗体。方法选取GFP免疫原性较强、保守性低的98～117位氨基酸序列,利用F-moc法固相合成该段序列,经高效液相色谱纯化,MALDI-TOF-MS鉴定合成多肽的分子量后,与匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰雄兔,制备抗血清,并进行Western blot鉴定。结果合成的GFP多肽经MALDI-TOF-MS分析,分子量为2497.9,与理论值相符。1∶200稀释的抗血清与转染pEGFP-N1质粒的HeLa细胞表达的增强型GFP在相对分子质量27000处有清晰的杂交信号出现。结论已成功制备了特异性较好的GFP兔多克隆抗体。

应用遗传连锁分析法对伴传导功能障碍的扩张型心肌病家系致病基因的定位

目的:对一个常染色体显性遗传扩张型心肌病(familial dilated cardiomyopathy,FDCM)家系进行基因定位.方法: 收集FDCM 家系, 对该家系成员进行详细心血管内科检查确诊为扩张型心肌病,且伴发有传导功能障碍;采集外周血3～5 mL,并抽提基因组DNA;选取与该表型相关的已定位区间CMD1A(1q21.2-q21.3),CMD1H(2q14-q22), CMD1E(3p22-p25)和CMD1F(6q22-23)内的共计18个微卫星DNA标记,在该家系中进行排除性定位分析;最后,进行全基因组扫描及连锁分析.结果:①已定位区间的18个微卫星DNA标记位点的LOD值均<-2,证实该家系与已知DCM位点不连锁;②全基因组扫描及两点连锁分析结果显示,该家系致病基因位点与遗传标记D3S1614(3q26)连锁, 在θ= 0时得到最大LOD值2.68.结论: 该家系与已知的4个DCM位点均不连锁,其致病基因位于D3S1614(3q26)附近的一个新位点.

改良超长降调节方案对卵巢子宫内膜异位囊肿手术后体外受精-胚胎移植结果的影响

目的:了解改良超长降调节方案对卵巢子宫内膜异位囊肿术后体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结果的影响。方法:回顾分析16例卵巢子宫内膜异位囊肿患者腹腔镜下剥除囊肿或经阴道B超下囊肿穿刺术后每月肌内注射曲普瑞林3.75 mg,共3次,于末次注射后14天左右开始使用促性腺激素(Gn)超排卵行IVF-ET妊娠情况;并以同期12例异位囊肿术后采用短方案行IVF-ET为对照组。结果:研究组Gn用量、用药时间、注射HCG日E2水平、获卵数、受精数、卵裂数与对照组比较差异无显著性(P>0.05);而研究组种植率、临床妊娠率明显高于对照组,差异有显著性或非常显著性(P<0.05,P<0.01)。结论:子宫内膜异位囊肿腹腔镜或穿刺术后采用改良超长降调节方案行IVF-ET,为患者节约了再次降调节的费用,且IVF-ET成功率得到极大的提高,是子宫内膜异位症患者行IVF-ET值得推荐的超排卵方案。

生长激素辅助促排卵对卵巢低反应患者体外受精-胚胎移植结果的影响

【目的】探讨生长激素(GH)辅助促排卵治疗对预测卵巢低反应患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结果的影响。【方法】选择2004年1月至2005年12月在本院生殖中心接受体外受精-胚胎移植88例卵巢低反应型患者,56例使用改良的短方案促排卵为对照组,32例使用改良的短方案同时加用生长激素辅助促排卵为研究组,分析其GH用量、获卵数、受精率、卵裂率、种植率、临床妊娠率。【结果】本中心行体外受精-胚胎移植治疗周期卵巢低反应型占8.51%,研究组Gn用量、用药时间略低于对照组,注射HCG当日E2水平、获卵数、受精率、卵裂率、种植率略高于对照组,但两组比较均差异无显著性(P>0.05);而研究组临床妊娠率明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。【结论】GH辅助促排卵治疗卵巢低反应患者可减少无可移植的胚胎周期,临床妊娠率有显著提高。

精子体外处理方法与技巧

目的:探讨精液体外处理方法及技巧。方法:2010年取卵周期数为1402例实施部分上游法及部分密度梯度离心法;2011年取卵周期数为1667例实施大部分梯度密度离心法+上游法及少部分上游法;2012年取卵周期数为1321例实施全部梯度密度离心+上游法。观察并记录各年份患者受精情况,进行统计学分析,得出结论。结果:本院自2010年-2012年,临床妊娠成功率呈现出逐年上升趋势,结果比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:应用密度梯度离心+上游序贯法可使精子的运动参数及形态学均得到明显改善,增加患者妊娠率及保障精子核DNA链完整性,是较好的体外处理精液方法,值得临床推广应用。