利用CRISPR/Cas9系统敲除ITGB6基因对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响

目的 探讨整合素β6(ITGB6)基因敲除后对人结肠癌HT-29细胞生物学行为的影响。方法 通过CRISPR/Cas9技术构建ITGB6敲除的HT-29细胞(ITGB6-KO)作为敲除组,选择空白转染细胞作为对照组。通过Western blot法检测ITGB6表达,通过MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测敲除ITGB6基因对HT-29细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果 Western blot和DNA测序结果显示CRISPR/Cas9技术有效敲除ITGB6基因。MTT实验、平板克隆形成实验和Transwell侵袭实验显示敲除ITGB6基因能够抑制HT-29细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力(P <0.01)。结论 CRISPR/Cas9技术能够有效建立敲除ITGB6基因的结肠癌HT-29细胞系,ITGB6敲除后HT-29细胞恶性生物学行为受到抑制,ITGB6基因有望成为结肠癌治疗的潜在靶点。

KIF14在肝内胆管癌中的表达及对胆管癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨KIF14在ICC中的表达情况及对胆管癌细胞生物学行为的影响。方法:通过qRT-PCR法检测ICC组织和癌旁组织中KIF14的mRNA表达水平;通过免疫组织化学染色方法检测ICC组织和癌旁组织中的KIF14的蛋白表达情况,并分析KIF14的表达与临床病理特征之间的关系;利用siRNA技术抑制QBC939细胞中KIF14的表达,并检测抑制效果;利用Western blotting实验检测抑制QBC939细胞内KIF14的表达对AKT信号通路的影响;分别利用MTT实验、Transwell实验检测抑制KIF14表达对胆管癌QBC939细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果:qRT-PCR结果提示ICC组织中KIF14的mRNA表达水平明显高于癌旁组织;免疫组织化学染色结果提示ICC组织中KIF14表达水平高于癌旁组织,KIF14的表达与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关;siRNA技术能有效抑制QBC939细胞中KIF14的mRNA表达和AKT磷酸化水平,MTT实验和Transwell实验表明抑制KIF14的表达可抑制QBC939细胞的增殖能力和侵袭能力。结论:KIF14在ICC组织中高表达,其高表达与不良临床病理特征相关;KIF14可通过AKT信号通路促进胆管癌细胞的增殖和侵袭。

局部进展期中低位直肠癌新辅助治疗对淋巴结检出数目的影响及预后分析

目的分析接受新辅助治疗的局部进展期中低位直肠癌患者在根治性切除术中可能影响淋巴结检出数目的因素,并分析淋巴结检出数目对预后的影响。方法回顾性分析2016年3月至2021年12月期间西安交通大学第一附属医院收治且接受新辅助治疗联合根治性手术的局部进展期中低位直肠癌患者的临床病理资料,采用线性回归模型筛选影响淋巴结检出数目的因素,Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果共收集到81例局部进展期中低位直肠癌根治性切除术患者,淋巴结检出数目(12.11±5.54)枚/例;检出淋巴结平均数目<12枚者42例、≥12枚者39例。多因素线性回归模型分析结果显示,男性患者和联合新辅助放疗可降低检出淋巴结数目的概率(分别为:t=–3.17,P=0.002;t=–2.44,P=0.017)。以检出淋巴结平均数目12枚为截点分析<12枚和≥12枚患者的Kaplan-Meier法绘制的生存曲线,经log-rank检验发现,检出淋巴结平均数目<12枚和≥12枚患者的总生存和无病生存曲线比较差异均无统计学意义(分别为:χ^(2)=0.107,P=0.743;χ^(2)=0.027,P=0.870)。对64例临床区域淋巴结阳性患者将淋巴结检出数目平均6~13枚分别以<6枚/≥6枚、……和<13枚/≥13枚作为分组截点进行分层分析的结果显示,以平均7枚和8枚淋巴结检出数目作为分组截点的2组患者的累积总生存情况比较差异有统计学意义(χ^(2)=3.977,P=0.046;χ^(2)=3.977,P=0.046),即检出淋巴结平均数目至少7枚或8枚者的总生存情况更好。结论本研究的数据分析结果提示,男性患者和联合了新辅助放疗的患者对术后获检淋巴结数目会有一定的影响;从总体患者的生存分析看,未发现检出淋巴结数目与总生存和复发有关,但在临床区域淋巴结阳性的患者中发现,至少检出7枚或8枚淋巴结可以改善患者的预后。