一株产α-L-鼠李糖苷酶菌株的分析与鉴定

筛选得到了一株能够分泌α-L-鼠李糖苷酶的菌株。利用TLC和HPLC的方法,对芦丁的生物转化情况进行研究。结果表明,该菌株可以将芦丁降解形成槲皮素。测序结果表明该菌种具有α-L-鼠李糖苷酶基因。根据菌落形态学观察和分子生物学的18SrDNA基因序列分析及系统进化树分析,将该菌株初步鉴定为黑曲霉。

黑曲霉所产α-L-鼠李糖苷酶酶学性质及其在异槲皮素制备上应用

本文前期筛选得到一株产α-L-鼠李糖苷酶的黑曲霉,并利用该酶转化芦丁制备异槲皮素。该黑曲霉在以芦丁作为诱导剂的培养基中生长,对发酵液用70%硫酸铵沉淀,透析得到α-L-鼠李糖苷酶的粗酶液,酶活为798 U/m L,用此酶液对芦丁进行水解制得异槲皮素。采用SDS-PAGE电泳测定粗酶液的酶蛋白分子量为55 k Da,经优化该酶的最适温度为55℃,最适p H为5.5,在此条件芦丁转化45 min后的转化率高达到95%以上。用柱层析处理能得到纯度99%以上的异槲皮素。该酶同样具有良好的热稳定性和高催化活性。本研究可为α-L-鼠李糖苷酶用于天然产物的脱糖基化这一类生物转化提供有效借鉴。

黑曲霉所产α-L-鼠李糖苷酶制备普鲁宁

前期筛选得到一株产α-L-鼠李糖苷酶的黑曲霉,并利用该酶转化柚皮苷制备普鲁宁。该黑曲霉在以芦丁作为诱导剂的液体培养基中发酵72h,对发酵液用70%硫酸铵沉淀,透析得到α-L-鼠李糖苷酶的粗酶液。经优化该酶的最适转化温度为50℃,最适pH为5.0,在此条件柚皮苷转化2h后的转化率高达到97%以上。本研究可为α-L-鼠李糖苷酶用于制备普鲁宁这一类生物转化提供有效借鉴。

类胡萝卜素清除自由基活性构效关系

为探讨类胡萝卜素结构对其自由基清除能力的影响,采用四种自由基清除方法分别测定β-胡萝卜素、叶黄素、虾青素、番茄红素的自由基清除能力,对十三种类胡萝卜素进行了量子化学计算,通过AM1法对其结构进行初步优化后,再用密度泛函方法(Density functional theory,DFT)在B3LYP/6-311(d,p)水平上进一步优化计算。结果表明,不同种类类胡萝卜素对不同的自由基清除能力不同,虾青素最强,其次是番茄红素、叶黄素,β-胡萝卜素最弱;根据前线轨道能级差、NPA净电荷分布发现,类胡萝卜素多个共轭双键的特殊结构是其具有自由基清除能力的重要原因,其端环上的基团能够促进分子的活性,酮基是对其活性影响最大的基团,其次是羟基与环氧基,这与实验结果相吻合,表明前线轨道能级差、NPA电荷分布是表征类胡萝卜素自由基清除能力的重要参数。

2.4.6-三羟基苯乙酮的合成及条件优化

介绍了一种全新的2.4.6-三羟基苯乙酮的合成方法,以柚皮苷为原料,经15%KOH开环得到根皮乙酰苯-4'-新橙皮苷,然后8%的稀硫酸去掉糖基得到2.4.6-三羟基苯乙酮,对反应条件进行优化,总收率达到81%。此路线原料柚皮苷是大宗产品,反应条件温和,实验重复性高,适合工业化生产。