舒肝解郁胶囊的UPLC-MS指纹图谱研究

目的建立舒肝解郁胶囊的UPLC-MS指纹图谱分析方法,为其质量评价积累数据。方法以0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱60 min,使用Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm)进行指纹图谱研究,同时通过高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法鉴定部分成分。结果对其中22个共有峰进行了成分鉴定,对34批舒肝解郁胶囊进行了指纹图谱检测和相似度评价,34批样品的相似度均大于0.960,确立了指纹图谱中的12个特征吸收峰。结论所建立的舒肝解郁胶囊的指纹图谱特征性和专属性强,该方法可用于舒肝解郁胶囊的质量控制。

GC法同时测定胆舒胶囊中的4种挥发油

目的采用GC法同时测定胆舒胶囊中桉油精、薄荷酮、胡薄荷酮、薄荷脑的含量。方法采用聚乙二醇为固定相的毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm)、FID检测器,程序升温的初始温度为75℃,保持4 min,以2℃·min-1的速率升温至100℃,再以6℃·min-1的速率升温至190℃,进样口温度250℃,检测器温度250℃。结果桉油精、薄荷酮、胡薄荷酮、薄荷脑的线性范围分别为0.022～0.110、0.656～3.280、0.355～1.780、1.946～9.730 mg·mL-1(r=0.99995),平均回收率均为96.64%～100.45%,RSD均<2.92%。结论所用方法简单、快速、灵敏度高,可同时测定胆舒胶囊中桉油精、薄荷酮、胡薄荷酮、薄荷脑的含量。

HPLC法同时测定舒肝解郁胶囊中金丝桃苷和芦丁的含量

目的：建立同时测定舒肝解郁胶囊中金丝桃苷、芦丁含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-甲醇（90∶10,V/V）-50 mmol/L磷酸盐缓冲液（梯度洗脱）,流速为0.8 ml/min,检测波长为360 nm,柱温为室温。结果：金丝桃苷和芦丁的进样量分别在1.272~-127.240、1.393-139.350μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r=0.9999）;二者精密度、稳定性、重复性的RSD〈2%;平均加样回收率分别为96.9%、98.6%（n均为9）。结论：该方法快速、准确,重复性好,可用于舒肝解郁胶囊的质量控制。

胆舒胶囊的体外溶出度研究

目的以薄荷酮、薄荷脑为指标成分,考察影响胆舒胶囊溶出度的因素,建立溶出度的测定方法。方法分别对溶出介质、溶出方法、转速等因素进行考察,采用GC方法测定薄荷酮、薄荷脑的含量,采用聚乙二醇为固定相的毛细管柱(30 m×0.32 mm,0.25μm),FID检测器,程序升温,初始温度75℃、保持4 min,以2℃·min-1升温至100℃,再以6℃·min-1升温至190℃,进样口温度250℃、检测器温度250℃。结果采用转篮法,以750 m L 60%乙醇为溶出介质,转速50 r·min-1作为胆舒胶囊的溶出度测定方法。结论所用方法可为胆舒胶囊的质量控制及质量标准的完善提供依据。

HPLC测定盐酸普拉克索缓释片中的有关物质

目的采用HPLC法测定盐酸普拉克索缓释片中的有关物质。方法采用Waters Sunfire C18色谱柱,以0.1 mol·L^-1乙酸铵（p H5.0,含0.1%三乙胺）-甲醇（98∶2）为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,检测波长264、326 nm,柱温40℃,流速1.0 mL·min^-1。结果高、中、低浓度杂质的平均回收率为90.5%-105.8%（n=9）;最低检出限为0.15-0.60 ng。结论所用方法简便、快速、灵敏,可用于检测盐酸普拉克索缓释片中的有关物质。

松龄血脉康胶囊UPLC指纹图谱研究及组分鉴别

目的建立松龄血脉康胶囊中葛根及马尾松鲜松叶的UPLC指纹图谱分析方法,为其质量评价累积数据。方法采用RP-HPLC法,以Agilent Eclipse Plus C18 RRHD色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱时间60 min;检测波长250 nm;体积流量0.2 mL.min-1;柱温30℃;进样量1μL,进行指纹图谱研究。同时通过液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法鉴别部分成分。结果建立了松龄血脉康胶囊的指纹图谱,以葛根素为参照峰,确定了28个共有峰,测定了32批样品,样品指纹图谱相似度均大于99%,共鉴别出25个相关成分。结论所建方法操作简便,分离效果好、稳定性高、重复性好,UPLC法使缩短了检测时间,可应用于松龄血脉康胶囊的质量控制及真伪品鉴别。

RP-HPLC-ELSD法测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20的含量

目的： 建立反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的分析方法。 方法： 采用Agilent Poroshell 120 SB-C18（2.7 μm，4.6 mm×150 mm）色谱柱，以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱（0-5 min，5%B；5-6 min，5%B→60%B；6-10 min，60%B→80%B；10-15 min，80%B；15-15.01 min，80%B→5%B；15.01-20 min，5%B），流速0.5 mL·min^-1，蒸发光散射检测器漂移管温度为45 ℃，雾化压力设为2.8×10^5 Pa。 结果： 吐温20进样量在1.12-6.72 μg范围内，与色谱峰面积呈良好线性关系（R^2〉0.999）；高、中、低浓度样品的回收率均在100%±10%范围内。 结论： 本法经方法学验证可用于康柏西普眼用注射液中辅料吐温20含量的检测。

康柏西普制品中CHO细胞DNA残留量的检测

目的建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR（Q-PCR）检测方法。方法采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品;确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性;用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测。结果建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上;检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线;检测高、中、低浓度的DNA标准品（105、103、101pg/ml）的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围（50%~200%）内,批间变异系数分别为9.3%、21.8%、26.8%;检测100pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6%,变异系数为20.4%;康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量。结论已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法。

荧光偏振法测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20的含量

目的建立测定融合蛋白制剂中聚山梨醇酯20(Tween 20)含量的荧光偏振检测方法,并进行验证。方法利用疏水性荧光染料DAF(5-dodecanoylaminofluorescein)与Tween 20胶束内的非极性核心结合,在485 nm激发波长下产生的荧光偏振强度与溶液中胶束浓度呈正相关,来确定样品中的Tween 20浓度。对建立的方法进行专属性、准确性、精密性、拟合度验证。结果该方法的专属性较好,可排除检测体系中蛋白的干扰;该方法重复检测3次高(250μg/ml)、中(150μg/ml)、低(50μg/ml)、定量下限(lower limit of quantitation,LLOQ,25μg/ml)浓度样品的平均回收率均在(100±20)%的可接受范围内,批内和批间变异系数均小于15%;标准曲线拟合度良好。结论立的荧光偏振法专属性、准确性、精密性良好,可用于蛋白制剂中Tween 20含量的测定,并适用于稳定性考察过程中Tween 20有效浓度的监测。

马尾松鲜松叶与干松叶的HPLC特征图谱比较

目的比较马尾松鲜松叶与不同处理方式下的干松叶的成分差异,为松龄血脉康胶囊的君药马尾松松叶的处理方式提供依据,并为马尾松松叶成分的药理药效研究提供参考。方法采用RP-HPLC法测定;通过液相色谱-电喷雾离子阱质谱分析方法鉴别部分成分。结果鲜松叶与两种烘干的松叶成分差异较大,两种烘干方式的松叶成分间无明显差异,而烘干松叶较鲜松叶色谱特征峰减少,某些成分含量有降低。结论鲜松叶中成分明显多于烘干松叶,证实了鲜松叶入药的合理性。