细菌耐药机制指导在临床抗生素合理应用中的效果及对多重耐药菌检出率的影响分析

目的分析在临床抗生素合理应用中实施细菌耐药机制指导的效果及对多重耐药菌检出率的影响。方法将中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院2020年3月至2022年8月使用抗生素治疗的患者(92例)作为研究对象,依据区间随机法将其分为对照组、研究组,各纳入46例,对照组治疗期间予以常规用药指导,研究组在常规用药指导前提下增加细菌耐药机制指导。比较两组不合理使用抗生素发生情况、抗生素使用知识掌握程度评分、多重耐药菌检出率、抗生素使用时间、抗生素使用费用、住院时间。结果研究组不合理使用抗生素发生率(4.35%)低于对照组(19.57%);研究组对抗生素使用知识掌握程度评分明显高于对照组;研究组多重耐药菌检出率(8.70%)低于对照组(26.09%);研究组抗生素使用时间、住院时间短于对照组,抗生素使用费用低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细菌耐药机制指导能有效促进抗生素合理应用,同时可降低多重耐药菌检出率,值得应用。

钙库操纵性钙内流参与调节ox-LDL诱导的血管内皮细胞通透性改变

目的利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),探讨钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞通透性改变中的作用。方法体外培养HUVECs,传代3次后,用于检测跨内皮电阻(transendothelial electrical resistance,TER)的细胞随机分为对照组和不同剂量ox-LDL(10、25、50、100μg/mL)干预组(n=3)。培养于载玻片上的细胞随机分为对照组和ox-LDL 24 h组、ox-LDL 48 h组,免疫荧光检测细胞骨架蛋白F-actin及细胞连接蛋白VE-cadherin的分布,免疫印迹检测VE-cadherin的含量。细胞孵育钙离子探针(Fluo-3/AM)后,激光共聚焦检测细胞内钙含量(对照组、ox-LDL组、ox-LDL+2APB组)以及SOCE(对照组、ox-LDL 24h组、ox-LDL 48 h组)。结果低剂量的ox-LDL(10、25μg/mL)对TER无明显影响,高剂量ox-LDL(50、100μg/mL)在6 h内对TER影响不明显,但在12 h引起TER降低(P<0.05),此效应在24 h和48 h更加明显(P<0.05)。Ox-LDL(100μg/mL)处理后24、48 h,VE-cadherin的表达减少(P<0.05),并影响F-actin的形态和分布;HUVECs的游离钙浓度显著增加(P<0.05),此效应被SOCE抑制剂2-APB阻断,2-APB能够减弱ox-LDL对TER的影响。ox-LDL(100μg/mL)处理48 h后,SOCE的振幅显著降低(P<0.05)。SOCE降支速度在ox-LDL处理24 h后呈现降低趋势,而在ox-LDL处理48 h后呈显著下降(P<0.05)。结论ox-LDL通过延长内皮细胞SOCE的持续时间上调细胞内游离钙浓度,影响细胞骨架的排列和细胞间连接的完整性,引起细胞通透性的增加。

2型糖尿病患者循环irisin水平与血管内皮功能的相关性研究

目的探讨2型糖尿病患者循环irisin水平与血管内皮功能的相关性。方法选取126例2型糖尿病患者作为观察组(T 2DM组),另选取60例健康体检者作为对照组(NC组)。所有受试者均接受常规体格检查并收集病史,计算体重指数,测量血压,利用全自动生化仪检测血脂、血糖,糖化血红蛋白分析仪检测糖化血红蛋白,酶联免疫吸附试验检测血清irisin、内皮素水平,一氧化氮检测试剂盒检测循环一氧化氮水平,超声心动图仪检测内皮依赖性血管舒张功能(FMD)。采用t检验、Pearson相关分析和多元线性回归进行统计学分析。结果与NC组相比,T 2DM组FMD水平显著降低(P<0.05),Pearson相关分析结果显示,T 2DM组患者FMD与年龄、BMI、SBP、DBP、血清TC、LDL-C、FBG、2 h BG、Hb A1c以及ET-1显著负相关(P<0.05)。与血清HDL-C、irisin及NO水平呈显著正相关(P<0.05);多元线性回归分析发现,在排除其余因素后,FMD与ET-1、NO以及irisin水平显著相关。结论 T 2DM患者血管内皮功能受损,可能与循环irisin水平降低相关。

重组sCR1在毕赤酵母细胞中的表达、纯化及鉴定

目的:酵母细胞SMD 1168表达人sCR1,并对重组蛋白进行纯化。方法:从人外周血中提取总RNA,应用RT-PCR获得人sCR1全长cDNA,将其克隆入真核表达载体pPIC9K,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9K-sCR1);经测序鉴定正确后,将重组质粒转化入毕赤酵母菌细胞SMD 1168中,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析及W estern b lot鉴定,并通过N i2+-NTA agarose亲和层析纯化。结果:经甲醇诱导的含pPIC9K-sCR1的酵母细胞表达出重组人sCR1的融合蛋白,48~72 h sCR1融合蛋白表达量最高。此蛋白在凝胶上表现为M r大于31 KDa的蛋白区带,在W estern b lot分析中可被sCR1的CD35单克隆抗体(mAb)识别。经N i2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCR1融合蛋白。结论:人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统中的高水平表达,并且有与人体天然蛋白相同的抗原活性。

ATP生物荧光法检测细菌的准确性及菌落数的相关性

目的:探讨ATP生物荧光法检测细菌的准确性.方法:分别采用平板计数法和ATP生物荧光法检测金黄色葡萄球菌和大肠杆菌不同浓度梯度的菌悬液,比较两种方法检测结果的相关性,并评价ATP生物荧光法检测的准确性.结果:金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在ATP生物荧光检测仪检测范围内均为直线模型较为合适,两种细菌的lg(菌落数)和两种检测仪lg(RLU)在一定范围内均呈直线正相关,且细菌与检测仪之间的相关系数r均大于0.9,准确性较好.结论:ATP生物荧光法检测结果与细菌菌落总数之间相关性良好,是一种较为快速准确的细菌检测方法.

重组人sCR1多克隆抗体制备及纯化鉴定

目的制备原核表达人sCR1多克隆抗体并对其进行鉴定。方法提取人总RNA进行RT-PCR扩增合成cDNA,以cDNA为模板,构建重组表达质粒pET28a-sCR1。在大肠杆菌中表达人sCR1融合蛋白作为免疫原制备兔多抗。采用ELISA法检测抗体效价,免疫亲和层析法纯化后,进行SDS-PAGE鉴定分析。结果sCR1表达融合蛋白免疫家兔制备的兔抗人sCR1多克隆抗体,可特异地识别人sCR1融合蛋白。结论纯化复性后的sCR1融合蛋白作为抗原免疫家兔,有较好的抗原性和免疫原性,成功地制备出兔抗人sCR1多克隆抗体,并有较高的效价及特异性。为进一步大量表达纯化及临床免疫学检测方法的键立奠定了基础。

军事飞行人员非酒精性脂肪肝病患者白细胞计数、C反应蛋白、尿酸与糖脂代谢、胰岛素抵抗和肝纤维化指标的相关性研究

目的:研究军事飞行人员非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、尿酸(UA)与糖脂代谢、胰岛素抵抗和肝纤维化指标的相关性。方法:选择2018年7月至2021年12月期间海军青岛特勤疗养中心收治的100例NAFLD军事飞行人员作为NAFLD组,另取同期健康体检者90例作为对照组。检测并对比两组的WBC、CRP、UA、糖脂代谢、胰岛素抵抗以及肝纤维化相关指标,采用Pearson相关系数分析WBC、CRP、UA与糖脂代谢、胰岛素抵抗和肝纤维化指标的相关性。结果:NAFLD组的WBC、CRP、UA水平均明显高于对照组(P<0.05)。NAFLD组的空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹胰岛素(FINS)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平均高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05)。NAFLD组的Ⅲ型前胶原肽(PC-Ⅲ)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)水平均明显高于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,WBC、CRP、UA与TC、TG、LDL-C、HOMA-IR、PC-Ⅲ、LN、HA、Col-Ⅳ均呈正相关,而与HDL-C呈负相关(P<0.05);WBC、CRP、UA与FBG、FINS无显著相关性(P>0.05)。结论:军事飞行人员NAFLD患者体内WBC、CRP、UA明显升高,且与糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗和肝纤维化有关。