鱼精蛋白/DNA复合物的构建与生物性能评价

目的研究非病毒基因载体鱼精蛋白/DNA复合物的制备方法及对其细胞毒性、不同量鱼精蛋白对pDNA的结合能力、体外细胞转染率。方法不同量鱼精蛋白与DNA在室温孵育后,得到鱼精蛋白/DNA复合物;用MTT法检测鱼精蛋白对HeLa子宫颈癌细胞的毒性作用,同时与PEI进行比较;利用琼脂糖电泳实验测定不同N/P比形成复合物时对DNA的阻滞情况;用结合沉淀试验比较不同量鱼精蛋白对包裹DNA的能力的影响;在荧光显微镜下观察比较它们对BEL-7402肝癌细胞转染率的大小。结果当鱼精蛋白/DNA复合物浓度升高时,对He-La子宫颈癌细胞的毒性均为0级,而聚乙烯亚胺(PEI)浓度升高时,对细胞的毒性明显增加;鱼精蛋白与质粒DNA形成复合物时所需的N/P比为1.5∶1,较PEI/DNA复合物形成时所需的N/P比2∶1要小;鱼精蛋白包裹DNA的能力随N/P比增大而增强,并且包裹DNA的能力要比PEI/DNA复合物转变得快;鱼精蛋白/DNA复合物对BEL-7402肝癌细胞的转染率较PEI/DNA复合物低,但毒性较低。结论鱼精蛋白/DNA复合物是一种制备工艺简单、细胞毒性小、对pDNA包裹能力高、转染率相对较高,具有一定应用潜力的非病毒基因载体。

一种非病毒载体的组成与体外转基因能力的研究

目的:合成羟丙基β-环糊精偶联小分子量聚乙烯亚胺的共聚物,探讨不同聚乙烯亚胺偶联率的共聚物缩合DNA的能力,探讨不同偶联率的阳离子共聚物组成与转基因效率的关系。方法:通过NMR表征,凝胶阻滞DNA试验考察其缩合DNA能力,以MTT法检测不同偶联率共聚物的细胞毒性。以不同的偶联率共聚物为载体,在不同的N/P比值条件下,将荧光素酶基因导入非洲绿猴肾细胞COS-7,通过荧光素酶的表达检测比较不同偶联率的共聚物转染效率。结果:合成的不同偶联率的共聚物缩合DNA能力不同,转染效率也不同。结论:聚乙烯亚胺偶联率较高的阳离子共聚物缩合DNA的能力较强,转染效率较高。