Mohnarin 2009年度报告:伤口感染细菌的耐药性监测

目的了解2009年度全国114家三级甲等医院中临床伤口感染患者细菌分布情况及对各类抗生素的耐药状况。方法药物敏感试验,用纸片法、MIC法或E-test法;耐药性数据用WHONET 5.5软件进行统计分析。结果共分离菌株6171株,其中革兰阳性菌2728株(44.2%),革兰阴性菌3443株(55.8%);分离率最高的前6位病原菌依次为金黄色葡萄球菌(19.8%)、大肠埃希菌(16.9%)、铜绿假单胞菌(8.9%)、肺炎克雷伯菌(8.0%)、表皮葡萄球菌(6.7%)及鲍曼不动杆菌(5.2%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌检出率分别为31.0%与65.1%;未发现对万古霉素和利奈唑胺中介或耐药葡萄球菌;表皮葡萄球菌对替考拉宁有1.2%的中介率。屎肠球菌对抗菌药物的整体耐药性明显高于粪肠球菌,对万古霉素耐药的粪肠球菌和屎肠球菌分别占0.5%和1.5%;屎肠球菌对替考拉宁的耐药率为1.3%;未发现利奈唑胺耐药的肠球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶(ESBLs)检出率分别为65.5%和40.0%;大肠埃希菌对抗菌药物的整体耐药性,高于肺炎克雷伯菌;鲍曼不动杆菌对大多数监测药物敏感率低于43%;铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药率分别为17.2%,33.8%。结论我国临床患者伤口感染致病菌以葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为主;细菌耐药严重,应定期进行耐药性监测。

胃癌手术前后外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的变化及临床意义

目的:检测CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在胃癌手术前后外周血中的变化,探讨Treg在肿瘤免疫中的作用。方法:收集初治胃癌患者38例作为研究对象,同时收集20例健康人外周血作为正常对照组。检测手术前3 d和手术后14 d外周血中CD4+CD25+Treg比例及T细胞亚群,将各检测结果结合临床、病理指标进行统计学分析。结果:胃癌患者术前外周血中Treg比例显著高于术后比例以及对照组(P均<0.01)。胃癌患者术前外周血CD8+T细胞比例明显低于术后比例以及对照组(P均<0.01)。术前外周血CD8+T细胞比例与Treg比例呈负相关(P<0.05)。胃癌患者术前外周血中Treg比例在不同淋巴结转移情况和TNM分期之间差异具有统计学意义(P<0.05),其与淋巴结转移和TNM分期呈正相关(P<0.01)。胃癌患者手术后Treg比例较术前下降,且下降程度与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、分化程度、病理分型以及手术方式无相关性。结论:Treg可能通过抑制CD8+T细胞的增殖及功能,促进肿瘤细胞的生长和发展。Treg与肿瘤的侵袭、淋巴结转移有关,提示Treg在一定程度上可作为检测疾病进展的免疫学指标。

中华眼镜蛇蛇毒及复方丹参抑制异种移植免疫排斥的实验研究

目的 研究中华眼睛蛇蛇毒因子 (CCV)及复方丹参在异种移植中的作用。方法 采用颈部套袖法建立豚鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前 2 4h按 0 .5 mg/ kg ip CCV,术中以复方丹参注射液灌注供心并 iv复方丹参。研究对照组、CCV组和 CCV+丹参组供心存活时间、复跳时间及血清补体水平的变化。结果 CCV可明显降低血清补体水平 ,延长供心存活时间 ,复方丹参注射液可缩短供心复跳时间。二者合用可进一步延长供心存活时间。结论 在异种移植中补体起着关键的作用 ,CCV通过降低血清补体水平抑制超急性排斥反应 (HAR)的发生 ,复方丹参可减少供心缺血损伤 ,并改善微循环 ,CCV和复方丹参合用对 HAR有良好的抑制效果。

雷公藤多甙对大鼠原位肝移植排斥反应的治疗作用

目的 :研究雷公藤多甙对大鼠肝移植诱导自发耐受过程产生的影响。 方法 :以SD→Wistar大鼠同种原位肝移植为模型 ,观察雷公藤多甙对大鼠原位移植肝脏排斥反应强度、浸润细胞变化及细胞凋亡的改变。 结果 :雷公藤多甙组排斥反应减弱 ,肝脏内浸润细胞明显减少。雷公藤多甙组肝脏内凋亡细胞记数明显高于单纯肝移植组 ,并且以间质细胞为主。 结论 :雷公藤多甙治疗后移植肝脏通过诱导间质中浸润细胞凋亡发挥保护移植脏器的作用 ,雷公藤多甙在大鼠肝移植后近期不仅全面移植了受体的免疫反应状态 。

胃癌组织中游离氨基酸变化与肿瘤进展程度的关系

目的 :探讨胃恶性肿瘤病人氨基酸代谢变化与肿瘤进展程度之间的关系 ,为胃恶性肿瘤氨基酸失衡疗法提供理论依据。 方法 :采用 Beckm an- 6 30 0高效氨基酸自动分析仪 ,检测 41例胃恶性肿瘤组织和癌旁胃粘膜组织中 19种游离氨基酸的含量 ,对不同分期肿瘤组织氨基酸进行比较分析。 结果 :与癌旁胃粘膜组织比较 ,胃恶性肿瘤组织中牛磺酸、苏氨酸、丝氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸含量升高 (P<0 .0 5 )。进展期肿瘤与早期肿瘤相比 ,脯氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸升高 (P<0 .0 5 )。 结论 :胃癌组织多种游离氨基酸含量显著高于癌旁胃粘膜组织 。

KAI-1和nm23-H1的表达与结直肠癌侵袭转移的关系研究

目的检测结直肠癌组织中KAI-1、nm23-H1基因及蛋白的表达,探讨其在结直肠癌浸润转移中的作用及临床意义。方法以45例结直肠癌手术标本为研究对象,分别采用荧光实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肿瘤组织和切端组织中KAI-1、nm23-H1的mRNA及蛋白表达水平,并结合临床病理资料进行统计学分析。结果结直肠癌组织中KAI-1和nm23-H1的mRNA表达水平及蛋白表达阳性率均显著低于切端组织,差异有统计学意义(P<0.01);淋巴结转移者KAI-1、nm23-H1的mRNA表达水平及蛋白表达阳性率均显著低于不伴淋巴结转移者,且二者会随着浸润深度及Dukes分期的增加而表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结直肠癌组织中KAI-1 mR-NA的表达均与nm23-H1的表达呈正相关(rs值分别为0.583和0.327,P<0.05)。结论 KAI-1和nm23-H1低表达均与结直肠癌的侵袭转移有关,联合检测这两项指标有助于指导临床治疗和预测肿瘤进展。

结直肠癌中Ets-1和整合素α6β4的表达及临床意义

目的:检测结直肠癌中转录因子Ets-1和整合素α6β4的表达,探讨其在结直肠癌浸润转移中的作用及临床意义。方法:选取2007年6月至2008年6月间天津医科大学总医院外科40例结直肠癌手术标本为研究对象,分别采用荧光实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肿瘤和切端组织中Ets-1和整合素α6β4的mRNA和蛋白表达水平,并结合临床病理资料进行统计学分析。结果:Ets-1和整合素α6β4在肿瘤组织中的mRNA表达水平和蛋白表达水平均高于切端组织(P<0.05);Ets-1 mRNA的表达与肿瘤的组织学类型、肿瘤部位、大小及分化程度未见相关性(P>0.05),伴淋巴结转移者Ets-1 mRNA的表达明显高于不伴淋巴结转移者,其差异具有统计学意义(P<0.05),Ets-1 mRNA表达与大肠癌浸润深度及Dukes分期存在正相关,伴随肿瘤浸润深度和临床分期的增加,Ets-1 mRNA表达明显增加,其差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移者的Ets-1蛋白阳性率为91.3%(2l/23),无淋巴结转移者为58.8%(10/17),两者差异具有统计学意义(P<0.05),伴随肿瘤浸润深度和Dukes分期的增加,肿瘤组织中Ets-1蛋白阳性率也显著增加(P<0.05),而Ets-l蛋白表达水平与病理类型及分化程度未见相关性(P>0.05);结直肠癌中Ets-1的表达与整合素α6β4的表达呈正相关(P<0.05)。结论:检测结直肠癌内Ets-l和整合素α6β4的表达可作为评价肿瘤侵袭转移、判断预后的重要指标,Ets-1可能成为结直肠癌基因治疗新的靶点。

高表达IDO的树突状细胞抑制T细胞增殖的实验研究

目的:研究基因转染后高表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的树突状细胞(DC)对T细胞增殖的抑制作用,以探讨其在器官移植中排斥反应的作用。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从腹膜炎小鼠的小肠组织中获取IDO全长cDNA片段,将其克隆至真核表达质粒pTracer中,构建真核表达质粒IDO-pTracer,随后用LipofectamineTM2000介导转染小鼠脾脏DC,分为未转染组、空载体转染组、IDO基因转染组和IDO基因转染并添加1-甲基色氨酸(1-MT)组,以混合淋巴细胞反应的方法检测转染后DC对同种异系T细胞增殖的作用。结果:克隆的小鼠IDO基因全长cDNA大小约1.3kb,无碱基突变,以构建的重组真核表达质粒IDO-pTracer转染DC后,混合淋巴细胞反应结果显示IDO基因转染组的刺激指数(SI)低于未转染组、空载体转染组及IDO基因转染并添加1-MT组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了IDO基因的真核表达载体IDO-pTracer,且IDO基因转染DC具有抑制异系T细胞增殖的作用。

远交系大鼠小肠移植的实验研究——Ⅰ.移植免疫反应初探

使用显微外科技术建立大鼠全小肠移植模型。原位移植和异位移植的手术成功率分别为80.00％和85.71％,原位移植、异位移植及环孢素A治疗组大鼠术后平均生存天数有显著性差异。异位小肠移植大鼠的组织病理研究证实,不同品系远交系大鼠间小肠移植后排斥反应的发生时间不同,组织相容性抗原差异愈大排斥反应愈迅速;移植免疫反应可以同时出现排斥移植物反应和移植物抗宿主反应。

大肠癌组织中VEGF-C、STAT3的表达变化及意义

目的观察大肠癌组织中血管内皮生长因子C(VEGF-C)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA及其蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法分别采用荧光实时定量PCR法和免疫组化法检测60例大肠癌组织及远癌切端大肠组织中的VEGF-C、STAT3 mRNA及其蛋白。结果大肠癌组织组织中VEGF-C、STAT3 mRNA表达量分别为0.81±0.331、.33±0.48,VEGF-C、STAT3蛋白阳性表达者分别为39例、42例;远癌切端大肠组织中分别为0.62±0.281、.04±0.30、15例4、例。两者比较,P均<0.05。大肠癌组织中,VEGF-C、STAT3 mRNA及其蛋白表达呈正相关(r分别为0.982、0.892,P均<0.01)。VEGF-C、STAT3 mRNA及其蛋白表达水平与大肠癌肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关(P均<0.05)。结论大肠癌组织中STAT3、VEGF-C mRNA及其蛋白高表达。二者在大肠癌的淋巴结转移中发挥重要作用。

复方丹参对异种移植物的保护作用

目的 :研究复方丹参在异种移植中对移植物的保护作用。方法:采用颈部套袖法建立豚鼠对大鼠心脏异种移植模型。于术前24h按0.5mg/kg 腹腔注射中华眼镜蛇蛇毒 (CCV) ,术中以复方丹参注射液灌注供心并静注复方丹参。研究对照组、CCV组和CCV +丹参组供心存活时间、复跳时间的改变。结果 :复方丹参注射液缩短异种移植心脏复跳时间 ,合用CCV可使供心存活时间进一步延长。结论 :在异种移植中应用复方丹参可减少供心缺血损伤 ,并改善微循环 ,与CCV合用能抑制异种移植的超急性排斥反应。

多靶点联合用药抑制小鼠到大鼠异种心脏移植排斥反应

目的:研究药物联合应用控制小鼠对大鼠协调性异种异位心脏移植免疫排斥反应的方法。方法:采用改良的Heron颈部套袖法建立小鼠对大鼠异种异位心脏移植模型,受体大鼠分为4组:1组,仅行异种移植不给药;2组,联合应用补体抑制剂中华眼镜蛇蛇毒因子(CCV)、环磷酰胺(CTX)、FK506;3组,将2组中CCV剂量加倍,其它药物用量不变;4组,在2组用药组合基础上再加用前列腺素E1(PGE1)。观察移植供心存活时间,并检测受体大鼠血清补体总活性(CH50)改变、移植供心病理改变。结果:异种移植术后各组小鼠供心平均存活时间:1组为(2.25±0.52)d,2组为(4.25±1.25)d,3组为(3.75±0.65)d,4组为(6.92±2.46)d。2、3、4组补体活性明显降低。移植供心HE病理显示1组为典型超急性排斥反应改变,4组出现急性排斥反应改变。结论:在小鼠对大鼠的协调性异种移植中,CCV+CTX+FK506+PGE1联合应用可明显抑制异种超急性排斥反应的发生。

原发干燥综合征患者外周血T细胞亚群变化的相关研究

目的:了解原发干燥综合征患者外周血T细胞亚群的变化及其临床意义。方法:用流式细胞术检测并比较原发干燥综合征(pSS)与系统性红斑狼疮(SLE)患者和对照组外周血中T淋巴细胞亚群的差异。分析T细胞亚群与血沉、血清免疫球蛋白IgG和类风湿因子等病情活动指标的关系。结果:pSS组和SLE组外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值较正常对照组明显减低(P<0.05),而pSS与SLE两组则无明显差异(P>0.05)。pSS组外周血CD8+T淋巴细胞水平明显高于正常对照组(P<0.05)和SLE组(P<0.05),SLE组外周血CD8+T淋巴细胞水平也高于正常对照组(P<0.05)。pSS患者外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值在疾病活动期下降,并与pSS的疾病活动性指标血清IgG、血沉呈负相关性(P<0.05)。CD8+细胞水平在疾病活动期明显升高,且与以上指标呈正相关性(P<0.01)。结论:pSS患者外周血T淋巴细胞亚群存在异常,与发病密切相关。pSS患者外周血CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和CD4+/CD8+比值与病情活动有关。

胃恶性肿瘤病人血清游离氨基酸含量变化的研究

目的 :探讨胃恶性肿瘤患者氨基酸代谢变化的特征 ,为胃恶性肿瘤氨基酸失衡疗法提供理论依据。方法 :采用 Beckman- 630 0高效氨基酸自动分析仪 ,检测 41例胃恶性肿瘤病人及 41例健康人血清有中 1 9种游离氨基酸的含量。结果 :41例胃恶性肿瘤患者血清总游离氨基酸较健康对照组有降低趋势 ,但无统计学意义 ( P>0 .0 5) ,而单个氨基酸中组氨酸明显升高 ( P<0 .0 1 )。结论 :胃恶性肿瘤病人血清游离氨基酸谱无特征改变。

胰岛素瘤的定位与外科治疗

目的 :评价胰岛素瘤影像学定位价值和外科治疗方式。方法 :对1995年5月～2000年10月外科治疗的26例胰岛素瘤进行回顾分析。结果 :BUS术前定位准确率23.1 %、CT定位准确率55 %、DSA定位准确率50 %,手术探查准确率96.2%。行肿瘤剜除术21例 ,切除肿瘤21枚 ,行胰体尾部及脾切除4例 ,切除肿瘤7枚 ,其中1例为多发胰岛素瘤伴胰岛细胞增生 ,胰岛素瘤多达4枚 ,恶性胰岛素瘤伴肝转移1例。结论 :胰岛素瘤影像学术前定位率很低。

简易大鼠自体原位小肠移植模型建立及意义

目的：为研究供体小肠的灌注与保存，利用显微外科技术模拟小肠移植中供体获取的条件，建立一种简易大鼠自体原位小肠移植模型。方法：除血管吻合外，该模型同原位小肠移植，小肠经历了热、冷缺血及再灌注损伤过程。选用肠系膜上动脉直接插管灌注，肠系膜上静脉末梢为灌注流出道，且排除了排斥反应及血管吻合等造成的并发症带来的影响。结果：该模型模拟性好，且安全简便、损伤小、可比性高。结论：该模型是用于供体小肠缺血再灌注损伤、器官灌注与保存及功能恢复等研究的方法。

毛细管电泳检测nm23-H_1基因在乳腺癌组织中的表达

目的:检测nm23-H1基因在乳腺癌中的表达与突变,寻找它们与淋巴结转移的关系。方法:用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测nm23-H1mRNA表达,毛细管聚丙烯酰胺凝胶电泳(CPAGE)行单链构象多态性分析(SSCP)检测DNA突变。结果:应用CPAGE可在30min内分离出nm23-H1基因RT-PCR产物的单链及双链峰。nm23-H1表达、突变在腋淋巴结有、无转移组均有差异;mRNA在有远处转移组呈现低表达;DNA突变率在肿瘤≤5cm和>5cm组间有差异。结论:nm23-H1表达和突变可以做为评估乳腺癌转移危险的指标;CPAGE技术用于肿瘤组织的PCR-SSCP分析具有快速灵敏、准确、重复性好的特点。

FasL转染小鼠树突状细胞诱导异系T淋巴细胞凋亡的研究

目的:制备稳定表达FasL蛋白的小鼠骨髓源树突状细胞(DC)并探讨其体外诱导异系T淋巴细胞凋亡的机制。方法:采用培养基选择法体外培养小鼠骨髓源DC,脂质体法转染FasL基因至小鼠成熟DC,流式细胞仪检测转染前后FasL蛋白的表达。混合淋巴细胞培养,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DC对异系T淋巴细胞增殖的影响,流式细胞仪检测诱导异系T淋巴细胞凋亡的能力。结果:体外培养可获得成熟的小鼠骨髓源DC,转染FasL基因的DC较未转染DCFasL蛋白表达明显升高,混合淋巴细胞培养结果显示,FasL转染后DC对异系T淋巴细胞刺激指数明显下降(P<0.01),且诱导T淋巴细胞凋亡的能力明显增加(P<0.01)。结论:培养基选择法可收获大量骨髓源DC,具有典型形态,高表达MHCⅡ和共刺激分子,所获骨髓源DC能激活初始型T细胞免疫应答。脂质体转染FasL基因至小鼠骨髓源DC,可以使DC高表达FasL蛋白。转染FasL的DC体外刺激异系T淋巴细胞增殖的能力下降,且能明显诱导T淋巴细胞凋亡。