抗霉素A抑制PC12细胞线粒体COⅡ基因表达

采用不同浓度的抗霉素 A(一种能提高线粒体内活性氧水平的线粒体抑制剂 )处理 PC12细胞 ,利用血细胞计数、台盼蓝排除法以及 MTT法进行细胞活性检测。实验证明 ,当抗霉素 A的浓度达到 15 0 μmol/L时 ,PC12细胞开始出现损伤 ;进一步采用 RNA斑点杂交和 RT-PCR技术分析发现抗霉素 A所致的细胞损伤和线粒体内细胞色素 C氧化酶亚基 (CO )基因表达下降有关。本研究证实线粒体介导的活性氧的产生能早期诱导线粒体细胞色素氧化酶的活性的改变 ,逐步引起

周期性机械拉伸对C2C12成肌细胞增殖的影响

目的:探讨不同的周期性拉伸应变条件对C2C12成肌细胞增殖的影响。方法:周期性拉伸的各种力学条件通过BioFlex加载系统实现,采用应用流式细胞术和BrdU法对拉伸应变下的细胞增殖动力学变化进行分析,反映成肌细胞增殖情况。结果:不同的周期性机械拉伸条件影响C2C12细胞的增殖,拉伸的频率对C2C12细胞增殖有较大的影响。在0.5Hz拉伸频率下,2.5%、5%和10%的细胞变形幅度都不能促进细胞的增殖,其中10%(0.5Hz)的拉伸幅度抑制C2C12成肌细胞的增殖;而在0.125Hz拉伸频率下,10%的细胞变形幅度明显地促进C2C12成肌细胞的增殖。结论:较低的拉伸频率有利于成肌细胞的增殖,高频率的拉伸抑制成肌细胞的增殖。

活性氧促使L6成肌细胞的分化

目的探讨氧化应激对L6成肌细胞生长分化的影响。方法MTT法检测H2O2对L6细胞活力的影响;观察H2O2引起的细胞形态学变化,RT-PCR检测myogenin基因表达水平。结果在较短的处理时间内(1h),低浓度的活性氧(50μmol/LH2O2)有利于细胞的生长(P<0.05);H2O2处理12h后,50和150μmol/L的H2O2能够诱导成肌细胞分化的标记分子-myogenin基因的表达,形态学研究结果表明H2O2能够诱导肌管的形成,促使成肌细胞的分化。结论活性氧可能是细胞内诱导细胞生长与分化的信号分子。

离子硅对成骨细胞NF-kappa B核内转录因子活性的影响

目的研究离子硅对体外培养的成骨细胞NF-kappa B核转录因子活性的影响。方法分别用终浓度为1 mmol/L和2 mmol/L离子硅(SiO32)-处理MC3T3-E1成骨细胞,处理时间分别为6、12、24和48 h,设置对照组(不加处理因素);采用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞的增殖指数;Westernblotting方法检测NF-kappa B信号通路的相关蛋白表达量及其变化。结果流式细胞术结果显示,与对照组相比,1 mmol/L浓度的离子硅处理24 h组和48 h组,MC3T3-E1细胞增殖明显;Western blot结果显示,1 mmol/L浓度的离子硅促进成骨细胞增殖与p-NF-kappa B表达上升密切相关。结论骨材料中释放的微量的硅不会引起成骨细胞损伤,相反,微量的硅酸盐可能通过激活NF-kappa B诱导成骨细胞增殖。

miRNA 520h影响神经胶质瘤发生的初步研究

目的:综合分析胶质瘤标本中基因的表达,体外生物学作用的检测及对临床病例预后的长期随访,评价胶质瘤中miR-520h的生物学作用及其与NF-κB通路的关系。方法:选取46例II到IV级胶质瘤标本,常规RT-PCR检测前体microRNA(pri-miR-520h)的表达,免疫组织化学方法评估Ki-67指数;对46例患者的预后进行KPS评分及肿瘤复发与相关死亡率监测;用520h抑制剂转染U251胶质瘤细胞后缺氧培养,Western blotting检测p-NF-κB/p65等蛋白的表达水平。结果:miR-520h的RT-PCR分析及免疫组织化学结果显示,表达前体miR-520h(Pri(+))的病例Ki-67阳性率较低,而表达成熟miR-520h的病例Ki-67阳性率增加;长期随访结果显示,Pri(+)病例的KPS评分比Pri(-)病例显著增高;此外,高表达前体miR-520h(Pri(+))的病例预后较好,肿瘤复发和相关死亡率较低,说明pri-miR-520h(+)病例预后较好;Western blotting显示浓度为200 nmol/L的has-miR-520h抑制剂在缺氧条件下,促进U251胶质瘤细胞中p-NF-κB/p65的表达。结论:miR-520h在胶质瘤的发生中具有重要的作用,成熟miR-520h作为原癌miR,能诱导胶质瘤细胞的发生。

PGE2和NF-κB信号途径在骨再生中的相互作用

目的本研究旨在利用MC3T3-E1成骨细胞株与大鼠骨折模型来研究骨折愈合过程中PGE2和NF-κB信号途径的相互作用。方法利用PGE2与NF-κB抑制剂BAY 11-7082处理MC3T3-E1成骨细胞和大鼠骨折模型,采用碱性磷酸酶活性测定、Western blot分析、EMSA分析以及ELISA测定等研究手段,研究PGE2、NF-κB、BMP-7、Id2以及SOD2在骨再生中的作用。结果利用10μmol/l PGE2处理MC3T3-E1细胞10 min,30 min和2h后,能够显著地促进成骨细胞增殖与分化,当细胞用5μmol/L BAY 11-7082处理后,PGE2诱导作用受到抑制,表明PGE2增加ALP的表达是通过NF-κB途径来介导。局部注射NF-κB抑制剂后PGE2的生物合成明显减少;此外,抑制骨折部位ALP的活性,在骨折的损伤修复过程中,NF-κB、BMP-7以及SOD2的表达均明显上升,而Id2的表达明显下降;加入NF-κB活性抑制剂后,BMP-7与Id2的表达恢复到正常水平,而SOD2的表达没有改变。结论PGE2能够同时通过抑制Id2细胞因子和激活NF-κB信号途径诱导成骨细胞分化。

β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤

目的:探讨Aβ(1-42)对PC12细胞的氧化损伤作用。方法:利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞,采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响,分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。结果:随着Aβ(1-42)浓度的增加,SeGPx的表达不断下降;0·1μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加,Aβ(1-42)对PC12的损伤作用能被acetovanilon(一种抑制内源性自由基产生的化合物)所抑制。结论:Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。

冠心病患者线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因片段的重排

采用玻璃粉微量吸附法获取DNA直接作为PCR反应的模板 ,利用巢式PCR技术 ,检测冠心病患者血细胞内编码细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的线粒体DNA扩增片段多态性 ,探讨线粒体DNA的片段缺失与动脉粥样硬化发生发展的关系。研究发现在全部冠心病患者编码细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的基因中出现了大约 10 0bp的缺失片段 ,其中 1例冠心病患者中还出现了大约 45 0bp核基因组和 6 0 0bp的线粒体DNA扩增片段 ,而在正常对照老人中没有出现片段的重排现象。表明冠心病患者中存在该基因片段的缺失和模板量减少的现象 ,该基因可能参与了冠状动脉粥样硬化的形成与发展 ,编码呼吸链复合物一些亚基线粒体DNA片段的重排可能是动脉粥样硬化进行性发展的恶化因素。

二氧化锗诱导L_6成肌细胞株的MyoD基因表达

目的:探讨成肌细胞的MyoD基因在线粒体肌病发生发展中的作用。方法:采用二氧化锗(GeO2)处理大鼠的成肌细胞系L6,观察细胞形态的变化,利用MTT分析GeO2对成肌细胞的影响,用RT-PCR检测MyoD基因表达。结果:发现GeO2在损伤成肌细胞的同时,能够诱导MyoD基因的表达,表明MyoD基因在线粒体肌病的发生发展中起着重要作用。结论:MyoD基因表达的增强是线粒体肌病中骨骼肌萎缩的一个信号分子,MyoD基因表达有可能成为线粒体肌病检测的参考指标。

安定导致小鼠大脑的线粒体氧应激损伤

目的 探讨安定对大脑神经元产生毒副作用的分子机制。方法以１０ ｍｇ／ｋｇ·ｂ．Ｗ安定给小鼠进行腹腔注射，连续 ３ｄ后，取相同质量的大脑进行线粒体蛋白的分离，进行有关ＭｎＳＯＤ和细胞色素氧化酶ＩＶ活性以及线粒体ＤＮＡ断裂 程度等指标的测定。结果（１）安定导致小鼠大脑的线粒体蛋白含量降低，线粒体蛋白含量从（３．３０７±０．２４０）mg／ml下降到 （２．７４６±０．４５１）mg/ml（ｔ=２．６９０,０．０１＜Ｐ＜０．０５）；（２）安定引起神经元线粒体的ＭｎＳＯＤ活性从（７５.４６±６．６３）Ｕ／ｍｇ下降到 （５５．３０±３．８３）Ｕ／ｍｇ（ｔ＝６．４４８， Ｐ＜０．０１）；（３）安定对细胞色素氧化酶具有显著的损伤作用，５５０nm处细胞色素吸收值从 （０．１１２±０．００８）下降到 ０．０６９±０．００８（t＝８．７８２， Ｐ＜０.０１）；（４）安定能导致小鼠大脑的线粒体ＤＮＡ大量断裂。在碱裂解过程 中，０°Ｃ条件下，ＤＮＡ双链的百分比从（９２．９５±２．８２）％下降到（７９．５３±２．３３）％（ｔ=８．４６６，Ｐ＜０.０１）；在 １５℃作用１ｈ，ＤＮＡ双 链的百分比从（７７．４５±３．４９）％下降到（４３．１５±６．１）％（ｔ＝１３．

海洋亚历山大藻属分子系统学研究进展

亚历山大藻属Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ是一类重要的赤潮甲藻，由于传统的分类鉴定往往标准不一，因而容易引起分类上的混乱．近年来，人们已逐渐转向分子分类、分子系统及分子毒理方面的研究，试图从分子水平认识亚历山大藻的遗传特征，以便获得稳定、可靠的分子指标．本文对这一最新研究进展作了综合分析。

阿尔茨海默病患者血液细胞线粒体内细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因存在缺失

目的 调查 2 5例老年痴呆患者血细胞线粒体中细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因的突变情况 ,探讨线粒体DNA突变与阿尔茨海默病 (AD)性老年痴呆发生发展的关系。 方法 采用微量法提取血细胞总DNA直接作为PCR模板 ,进行巢式PCR扩增 ,最后采用DNA序列分析鉴定突变。 结果 在正常老人组 ,只扩增了 2 80bp的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ基因 (COX2 )扩增片段 ,而在老年痴呆患者中出现了 4 6 4bp和 2 80bp的多态性扩增片段 ,并且发现了 1个 32 0bp的新的线粒体DNA缺失片段 ,1位AD患者的COX2基因存在一种新的缺失后重组现象 ,COX2基因的 1条单链在np75 0 3处断裂 ,另 1条单链在np7785处断裂 ,这两个断裂的游离片段通过插入 1个额外的胞嘧啶核苷酸重新连接起来。 结论 老年痴呆患者中的COX2基因存在片段扩增多态性。

微生物基因工程与农业产业化发展探究

微生物可以用于提高农业生产效益,基于此,介绍和探讨饲料用植酸酶、固氮微生物肥料以及微生物农药的研究与开发,如微生物农药中细菌杀虫剂、真菌杀虫剂、病毒杀虫剂和杀虫抗生素等的最新研究进展。同时,建议加强微生物基因工程的基础研究,明确确定研究重点,为后续革新生产工艺,调整研发结构,促进产业发展奠定基础。

精英教育理念在理科类研究生培养中的应用

随着高等教育大众化成为高校发展的主流方向 ,高级人才的整体水平下降成为令人关注的问题 ,精英教育理念必须同时并存于大众化教育中 ,特别是在研究生的培养和教学中更加需要灌输精英教育理念。

生物分子系统学研究中的RAPD技术

RAPD技术在Williams等人于1990年首先提出后,在检测DNA多态性方面受到了广泛的应用.RAPD技术以其简单、快速、信息量大等特点渗透在基因诊断,法医检测,生物药品的检验,生物种群关系的研究各个领域.以核酸为指标构建的生物系统进化树,不受主观因素的影响,避免了经典植物系统学的人为影响因素,因而受到广泛应用,在分子系统研究中出现了RFLP,RAPDDNA和RNA测序等分子生物学技术,其中RAPD技术不需要经过DNA分子克隆、分子杂交等繁锁步骤,也不需用放射性同位素显示,并且多态性检出率高,因而受到普遍关注.

聚类分析和分支分析方法及其在金花茶组七个种的系统学研究

本文阐述了聚类分析和分支分析的理论和方法。对我国学者提出的三种分支分析方法进行了比较,利用金花茶组七个种的35个性状进行了聚类分析,并认为七个种都是成立的。利用KEXUE和谐性分析方法和法莱斯—瓦格纳法对35个性状进行了分析初步阐明其演化关系。

甲藻单个细胞DNA的制备及在赤潮藻类分子鉴定中的应用

报导一种赤潮甲藻单个细胞ＤＮＡ的制备方法．该法仅需１或数个甲藻细胞，在常规实验条件下，２０～３０ｍｉｎ即可完成整个过程．此方法的建立，可直接对自然种群进行分子分析，避免了实验室培养种与自然种群的差异，同时，使材料的来源并不依赖于甲藻培养技术的完善．最后。

南海有毒塔玛亚历山大藻的分子地理标记分析

采用聚合酶键扩增反应（PCR）和限制性片段长度多态性分析（RFLP）方法，对1992年5月和1994年间月采自中国南海大鹏湾、大亚湾、香港海域的赤潮有毒甲藻塔玛亚历山大藻8个不同地理株的核糖体小亚基RNA基因（Ss－rDNA）进行分析，并与北美、西欧等地的比较。结果表明，中国南海的塔玛亚历山大藻缺少B基因，这与北美等地的塔玛亚历山大藻（包括有毒和无毒株）不同，而与西欧、澳洲等地的有毒和无毒株相似，提示B基因的存在可以作为一种分子地理标记而不是藻种有毒的标记。

井冈山空气负离子浓度特征及其与气象条件关系

利用井冈山空气负离子观测站2007年12月～2008年11月12个月的资料,分析了该地空气负离子的浓度特征,探讨了空气负离子浓度与气象条件的关系。结果表明,月平均浓度最低值为2610个/cm3,出现在2008年1月;最高值为7126个/cm3,出现在2008年11月;负离子浓度日变化不明显,上午、下午的观测值差别不大。在阵雨、间歇性小雨和雷暴天气过后,负离子浓度明显升高。负离子浓度与相对湿度、风速、云量、日照、降水量的相关性均不明显。