沙门菌的耐药性机制研究进展

自上世纪末期沙门菌耐药菌株的逐渐增多,特别是多重耐药菌株的出现,给沙门菌病治疗带来了极大困难,成为公共健康的一大威胁。目前关于沙门菌耐药性机制,国内外已有较多研究报道,主要集中于以下几个方面:①拓扑异构酶基因的突变;②抗菌药物摄取或累积量降低;③可转移遗传元件介导的耐药性机制;④质粒介导的喹诺酮类药物耐药性(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)。本文着重综述上述几种沙门菌耐药性机制研究进展。

胶体金免疫层析技术在疟疾诊断中的应用

疟疾仍然是21世纪人类健康的严重威胁之一,快速准确的诊断是疟疾防治的关键。目前利用胶体金免疫层析技术研制的诊断盒主要有4种,在疟疾快速检测方面发挥了重要作用,本文着重综述了这4种诊断盒在疟疾检测中的应用情况以及各自的特点。

恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物免疫原性的鉴定

目的:克隆表达恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,p.f)海南株(FCC1/HN)乳酸脱氢酶(LDH),并对其免疫原性进行鉴定,为制备抗LDH抗体用于胶体金法快速检测疟原虫奠定基础。方法:应用PCR技术对恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a(+),重组表达载体经鉴定后诱导表达;重组LDHpf(rLDHpf)经纯化后,免疫家兔制备兔抗rLDHpf免疫血清,间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达产物的免疫原性。结果:构建了pET-32a/LDHpf重组表达载体,测序后同源性分析显示p.f不同株间LDH氨基酸序列同源性大于98%,不同种间同源性也在90%以上;间接免疫荧光和Western印迹分析显示rLDHpf具有较好的免疫原性。结论:LDHpf基因高度保守;rLDHpf得到高效表达并具有良好的免疫原性。

鲍曼不动杆菌bla_(NDM-1)基因序列分析及表达

目的研究NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株耐药性产生的分子机制。方法 Vitek32测定耐药谱。根据Gen-Bank发表blaNDM-1基因序列设计合成引物,利用PCR技术扩增NDM-1鲍曼不动杆菌的blaNDM-1结构基因及其上下游调控序列片段,连接T载体,转化至大肠杆菌E.coli DH5α,序列测定并进行BLAST分析比对。测定始发菌株与重组菌株对美洛培南的最小抑菌浓度。结果药敏试验结果显示,该菌株对碳青霉烯类及β-内酰胺类抗生素耐药。NDM-1鲍曼不动杆菌厦门分离株blaNDM-1基因与HK-01同源性为100%;与KP-05-506相比,在blaNDM-1和trpF之间有24bp的插入。美洛培南最小抑菌浓度测定结果表明,重组菌株E.coli DH5α(pMD18-T::blaNDM-1)MIC值比始发菌株E.coli DH5α升高256倍。结论获得blaNDM-1基因的大肠杆菌能够表达碳青霉烯酶,该基因是碳青霉烯类抗生素耐药性产生的分子基础,该基因具有跨种水平传播的可能。

CRISPR在细菌分型和进化中的研究进展

规律成簇的间隔的短回文重复序列(CRISPR)是近年发现的一类存在于古细菌和细菌基因组内的结构,该结构可以使细菌获得对外源DNA如质粒和噬菌体的免疫,同时由于其结构的多态性,也可作为细菌分型和进化研究的位点。简要综述了CRSIPR系统的基本结构,及其在分型和进化应用方面的研究进展。

沙眼衣原体多形态膜蛋白D基因序列分析及其B细胞抗原表位预测

分析沙眼衣原体多形态膜蛋白D（PmpD）的基因序列并预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位。在GenBank中检索沙眼衣原体不同血清型的PmpD基因序列，进行序列比对分析。以L2血清型PmpD基因序列为材料，采用Karplus-Schulz、Chou-Faaman和Gamier-Robson方案预测蛋白质的二级结构和柔性区；按Jamesonv-wolf方案预测抗原指数，运用Kyte-Doolittle方案预测PmpD氨基酸的亲水性，利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。检索到20个沙眼衣原体不同菌株的PmpD基因序列，分析发现其核苷酸序列非常保守，一致性高达99．14％-100％；对预测结果综合分析，推测最有可能的B细胞表位位于PmpDN端的67-74、132-140、335-340、851-861、972-988及1091-1097。多参数方案综合预测PmpD蛋白的B细胞抗原表位，为进一步实验鉴定PmpD抗原表位及其多表位疫苗设计和研究奠定基础。

产新德里金属β-内酰胺酶耐药菌感染治疗的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM)自2009年首次被报道以来,产NDM耐药菌已在全球范围流行并引发多种类型感染,有效控制和治疗产NDM耐药菌感染具有重要的现实意义。然而,目前并没有确切的关于产NDM耐药菌的临床治疗方案。我们对产NDM耐药菌感染的治疗研究现状做简要综述,为产NDM耐药菌感染的控制和临床治疗提供科学合理的依据和指导。

某部急性呼吸道感染病原谱的流行特征

目的调查了解某部队急性呼吸道感染病原体流行情况,为疫情防控提供依据。方法采集该部队急性呼吸道症候群病例咽拭子、血清等标本,采用荧光定量PCR检测呼吸道常见病毒。结果 2年共检测呼吸道感染病例标本801份,阳性299份,阳性率为37.3%。其中2014年检测536份,阳性率为39.9%,病原体主要为季节性H3N2病毒(占57.5%)、腺病毒55型(占40.6%)和乙型流感病毒(占1.9%)。2015年检测265份,阳性率为32.08%,病原体主要为乙型流感病毒(占30.1%)、腺病毒7型(占27.1%)和甲型H1N1病毒(占23.5%),其他为冠状病毒OC43型(占16.5%)和NL63型(占1.2%)。结论当前该部急性呼吸道感染病原体以甲、乙型流感病毒、腺病毒为主,也有冠状病毒检出。做好部队呼吸道病原监测工作,对部队传染病的防控有重要意义。

志贺菌属整合子系统研究进展

志贺菌属(Shigella)是感染性腹泻的主要病原,对公共健康造成严重威胁,也给国家带来巨大的疾病负担。随着临床治疗上抗生素的不合理应用,志贺菌耐药问题越来越凸显,其中整合子-基因盒系统在其多重耐药性传播发展过程中起重要作用。以往单一针对志贺菌属整合子-基因盒系统的传播规律和流行特点的研究较少。本文拟对志贺菌属整合子系统及其耐药调控机制和耐药性的传播特点进行综述。

重组外膜脂蛋白LipL32与致病性钩端螺旋体抗体的免疫反应性及与不同血清群交叉反应性的Western blotting评价

目的研究钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32与致病性钩体抗体的免疫反应性以及与不同钩体血清群之间的交叉反应性,为钩体病的血清学检测提供抗原。方法依据黄疸出血群赖型56601株外膜脂蛋白LipL32基因序列设计引物,扩增出该基因片段DNA,将其克隆至表达载体pET-28a中。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21并诱导表达,表达的重组蛋白纯化后采用Western blotting评价其与56601株及其他14个血清群致病性钩端螺旋体抗体的免疫反应性和交叉反应能力。结果扩增获得了56601株脂蛋白LipL32基因,成功构建了原核表达重组质粒pET28a-LipL32。重组蛋白rLipL32为包涵体表达,且与56601株及另外14个血清群的致病性钩端螺旋体的兔抗体发生了特异性免疫反应。结论原核表达重组外膜脂蛋白rLipL32在致病性钩体血清群之间有良好的交叉反应能力,可初步作为属范围内的钩端螺旋体抗体检测候选抗原。

志贺菌基因组进化研究进展

志贺菌属(Shigella)是引起全球范围内细菌性痢疾的重要病原菌.近年来,多重耐药型和新血清型志贺菌的不断出现给志贺菌的监测和防控带来了新的挑战.基因组学的快速发展为深入了解志贺菌的进化来源、变异机制及传播规律等提供了极大的帮助,对控制细菌性痢疾的蔓延具有重要的科学意义.本文首先从遗传来源角度探讨志贺菌与大肠杆菌的进化关系及其可能的分子机制,随后对福氏、宋内和1型痢疾志贺菌的基因组进化进展进行了总结,详细描述了它们的时空分布特点以及耐药基因变异在进化中所发挥的作用,以期为志贺菌的研究和防控提供参考.

1株mphA和mcr-1阳性鼠伤寒沙门菌的鉴定及耐药特征分析

目的1株mphA和mcr-1阳性鼠伤寒沙门菌的鉴定及耐药特征分析;方法分离自4岁腹泻患者粪便样本中的1株鼠伤寒沙门菌,使用沙门菌血清凝集法进行菌株鉴定,质谱法复核鉴定结果;使用微量肉汤稀释法进行药敏试验;通过全基因组测序及耐药基因注释鉴定菌株所携带的耐药基因;通过质粒测序及生信分析进行质粒类型鉴定、质粒耐药基因、插入子等注释及质粒结构分析;通过质粒接合转移试验评估质粒的水平转移能力。结果药敏试验结果显示分离株对包括阿奇霉素、多黏菌素、头孢曲松和环丙沙星等临床常用抗生素药物耐药。耐药基因鉴定结果显示:该分离株携带包括大环内酯类抗性基因mphA,多黏菌素抗性基因mcr-1在内的12类45个耐药基因及1个氟喹诺酮类耐药点突变gyr A S83F。质粒测序分析结果显示:该菌株携带一个260,008bp大小的Inc HI2型质粒,该质粒携带包括mphA基因和mcr-1基因在内的19个耐药基因,15种插入子,4种转座子。质粒接合转移实验结果显示该质粒可以在肠杆菌目细菌之间水平转移。结论研究结果为临床治疗鼠伤寒沙门菌感染中合理使用抗生素以及有效预防、控制耐阿奇霉素、多黏菌素鼠伤寒沙门菌的传播提供了科学依据。

多个地区不同来源山夫登堡沙门菌分子分型研究

目的研究不同地区、不同来源山夫登堡沙门菌之间的传播关系,并分析其耐药情况。方法对分离的70株山夫登堡沙门菌采用K-B纸片扩散法分析其耐药性,并通过脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分子分型技术进行山夫登堡沙门菌的聚类分析。结果 70株山夫登堡沙门菌对于大多数抗生素耐药性较低,但是对于磺胺异噁唑,耐药和中介耐药的菌株达到了60%以上。同时还出现了3株对头孢噻呋耐药的菌株。PFGE结果分析显示70株山夫登堡沙门菌可分为42个不同的PFGE带型。北京市、上海市、南京市的部分菌株,有人、食品和环境3种不同来源,表现出完全相同的PFGE带型,亲缘关系十分密切。结论山夫登堡沙门菌具有遗传多态性,可能在环境、食品和人之间相互传播,应该加强监测,防止其进一步扩散。

细菌信号小分子耐药机制的相关研究进展

细菌耐药性问题已逐渐成为社会广泛关注的问题。然而,可运用于临床的新型抗生素却十分匮乏。这主要是因为细菌的耐药机制极其复杂,我们对细菌耐药机制的理解不够全面和深入。近几年,多种生物小分子被发现能够使细菌获得广谱的耐药性,并被证明是广泛存在于细菌中的一种耐药机制,这是对目前细菌耐药理论和模型的一个非常重要的补充,更有助于在抗生素的研发过程中寻找新的作用靶标。我们通过总结分析一氧化氮、硫化氢及吲哚这3种信号小分子与细菌耐药的相关研究进展,探讨信号小分子使细菌获得耐药性的相关机制。

无乳链球菌流行现状与耐药性研究进展

无乳链球菌是一种条件致病菌,可以通过多种途径进行传播。它是引起孕妇、新生儿和老年人等高危群体发病和死亡的重要病原菌,可导致严重的临床感染,在成人中引起的侵袭性感染性疾病发病率有持续上升的趋势。目前无乳链球菌已鉴定出多种序列型、克隆复合物以及10种血清型,它们在不同人群和不同地区的流行状况不尽相同。另外,近年无乳链球菌对抗生素耐药形势愈发严峻,不仅对红霉素、克林霉素等二线抗生素耐药率长期处于高位,甚至对青霉素耐药菌株的报道都已屡见不鲜,这使得无乳链球菌感染的临床治疗面临更多挑战。本文主要对无乳链球菌的流行现状以及对抗生素耐药性研究进展进行综述,以期更加清晰地认识无乳链球菌并为其科学防控提供参考依据。

食源性疾病监测网络现状与展望

食源性疾病是指凡是通过摄食而进入人体的致病因子（病原体）所造成的人体患感染性或中毒性的疾病。食源性疾病给世界带来了严重的社会卫生保健问题和沉重的经济负担,作为卫生体系相对完善的美国来说,每年仍有数百万的人患上食源性疾病,直接导致9000余人死亡,

传染病疫情现场预测预警系统的构建

目的:在突发传染病疫情现场,实现疫情的发展趋势预测及重要流行病参数估计。方法:基于SIR、SIS及SEIR动力学模型,实现疫情发展趋势预测,基于退火算法实现疫情重要参数估计,并基于JAVA语言建立重要呼吸道传染病疫情现场预测预警系统。结果:该系统不仅可以根据已知的流行病学特征参数预测传染病疫情发展趋势,还可以根据每天的新增发病人数,精确估计重要的流行病学特征参数,从而进行疫情的发展趋势预测。结论:该系统的建立能够实现疫情的现场快速有效预测预警,从而提高了疫情处置的时效性和科学性。

2015~2018年北京市成人流感病毒性肺炎共感染病原调查

目的分析北京地区2015~2018年流感病毒感染性肺炎的共感染情况,为临床抗生素药物与抗病毒药物的选用提供参考依据。方法从北京市23家医院2015年1月~2018年12月收集的流感病毒(Ⅳ)感染肺炎标本中筛选出114份流感病毒PCR检测阳性标本,其中重症肺炎77例。采用荧光定量PCR法检测呼吸道12种病毒和11种细菌的共感染情况。结果114例流感肺炎患者中,仅检出有Ⅳ感染的共22例(19.3%),其中甲型流感病毒(ⅣA)感染18例(15.8%),乙型流感病毒(ⅣB)感染4例(3.5%)。Ⅳ混合其他病原感染共92例(80.7%),其中与1种病原共感染47例(51.1%),与多种病原共感染45例(48.9%)。Ⅳ与1种病原共感染的47例中,ⅣA和ⅣB共感染情况最多(8.5%);与细菌共感染42例(89.4%),其中与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的感染率最高,其次为肺炎链球菌和铜绿假单胞菌。结论流感病毒性重症肺炎≥80%存在流感病毒与细菌共感染现象,2015~2018年北京地区流感病毒与细菌共感染的细菌病原排序为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌>肺炎链球菌>铜绿假单胞菌,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是北京市近年来与流感病毒共感染最为普遍的细菌。本研究结果为临床治疗用药筛选提供了可靠依据。

沙门菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

目的:建立一种可快速检测沙门菌的实时荧光定量PCR方法,对粪便、海鲜等样本中的沙门菌进行检测。方法:根据沙门菌ompF基因的特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立检测沙门菌的实时荧光定量PCR快速检测方法,对方法的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并对临床样本中的沙门菌进行检测。结果:该检测方法可扩增不同型别沙门菌的基因组DNA,对其他10种不含沙门菌的肠道病原菌基因组DNA均不扩增,具有很好的特异性;对构建的阳性质粒模板检测灵敏度可达0.1 ng/L,对菌株样本基因组DNA检测灵敏度为10 CFU/mL,可快速准确地检出临床样本中分离的沙门菌阳性菌株,且与商业化沙门菌检测试剂盒的阳性检出率相同;该方法的重复性也很高,5次重复实验Ct值的变异系数低于0.8%。结论:建立的沙门菌TaqMan实时荧光定量PCR法具有简单快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可应用于临床沙门菌核酸检测。

CRISPR/Cas9系统清除细菌多药耐药基因IMP-4和KPC-2的机制

目的利用CRISPR/Cas9系统对细菌多药耐药基因IMP-4、KPC-2进行清除,恢复抗菌药物的杀菌效力.方法采用分子克隆方法构建CRISPR/Cas9质粒.制备耐药菌感受态细胞,采用质粒转化的方法将CRISPR/Cas9系统递送至耐药菌.利用菌落聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因携带情况.采用实时荧光定量PCR检测各个CRISPR/Cas9靶点针对耐药基因的清除效率.采用Sensititre药敏板法及E-test药敏试纸条法检测细菌药敏表型.结果针对IM4P-4、KPC-2构建携带目的sapcer的CRISPR/Cas9质粒;菌落计数结果表明耐药基因被CRISPR/Cas9系统清除,清除率为100.00%(5/5);对细菌耐药基因进行相对定量分析,结果显示各个靶点的清除效率在24 h即达到99.9%;药敏鉴定实验结果表明实验组细菌恢复对抗菌药物的敏感性,而对照组细菌依旧对抗菌药物耐药.在药敏Etest试纸条中,与对照组相比,实验组细菌哌拉西林的最小抑菌浓度(MIC)值减少约204.8倍(P<0.05),恢复了细菌对抗菌药物的敏感性;CRISPR/Cas9系统能阻断细菌通过转化途径对耐药质粒的获取,且阻断效率高达99.9%(P<0.05).结论利用CRISPR/Cas9系统快速清除细菌耐药基因IMP-4、KPC-2,恢复抗菌药物的杀菌效力,展现了极大的临床应用价值.