连翘叶提取物通过PXR/CYP17A1影响孕马血清促性腺激素在肝脏的代谢

【目的】研究连翘叶提取物(Forsythia suspensa leaves extract,FSLE)对孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)在肝脏中代谢的影响,改善在畜牧生产中因PMSG代谢缓慢而造成的氧化应激。【方法】采用半仿生酶醇法提取连翘叶有效成分,给予昆明雌鼠不同含量的FSLE进行动物体内试验;收集小鼠血清,进行酶联免疫吸附试验,检测各组小鼠血清中PMSG的质量浓度;采集小鼠肝脏组织,检测氧化应激指标谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、丙二醛和过氧化氢的水平;采用Western-blot检测小鼠肝脏组织孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)和细胞色素酶P45017A1(cytochrome P45017A1,CYP17A1)蛋白的表达水平。【结果】FSLE可显著降低小鼠血清中PMSG的质量浓度,且可以减缓PMSG代谢引起的氧化应激。Western-blot结果显示:FSLE可显著下调小鼠肝组织中PXR和CYP17A1蛋白的表达。【结论】连翘叶提取物可能是通过下调肝脏中PXR和CYP17A1的表达减缓PMSG代谢引起的氧化应激。

荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的差异蛋白质组学分析

本试验利用蛋白质组学方法分析荷斯坦奶牛乳与牦牛乳乳清与乳脂肪球膜中的差异蛋白,比较功能差异,为开发不同品种牛乳提供帮助。通过离心法分离荷斯坦奶牛乳与牦牛乳的乳清与乳脂,分别提取蛋白,通过串联质谱标签(TMT)法进行蛋白质定性与定量分析,得到差异蛋白;对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白质互作(PPI)等生物信息学分析。结果显示:牦牛乳的乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物和非乳脂固形物含量均显著高于荷斯坦奶牛乳(P<0.05)。在2种牛乳乳清中共鉴定到可信蛋白641种,在乳脂肪球膜中共鉴定到可信蛋白543种;在乳清中筛选出差异蛋白268种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调70种,下调198种;在乳脂肪球膜中筛选出差异蛋白267种,其中牦牛乳比荷斯坦奶牛乳上调68种,下调199种。GO功能注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白均主要富集在细胞外空间、小分子结合和免疫反应等方面。KEGG注释及富集分析表明2种牛乳的乳清和乳脂肪球膜差异蛋白主要富集在金黄色葡萄球菌感染、补体与凝血级联等通路。差异蛋白互作网络分析发现2种牛乳的乳清差异蛋白中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、α2-HS糖蛋白(AHSG)、簇集蛋白(CLU)、血红素结合蛋白(HP)、补体3(C3)、SERPINA1、热休克蛋白A8(HSPA8)、β-2-微球蛋白(B2M)等度值较高,可能为乳清中的关键蛋白;乳脂肪球膜差异蛋白中血清白蛋白(ALB)、HP、C3、CLU、α-2-巨球蛋白(A2M)、AHSG、HSPA8、B2M等度值较高,可能为乳脂中的关键蛋白。综上可知,牦牛乳较荷斯坦奶牛乳在营养价值方面更优;牦牛乳中丰度较高的蛋白在胃肠道免疫功能、促进钙与磷吸收等方面表现优异,且牦牛乳中部分高丰度蛋白易引起乳制品腐败变质。

泌乳高峰期娟犏牛和牦牛乳汁差异蛋白分析

娟犏牛(Bos taurus)是通过娟姗牛冻精杂交甘南牦牛(Bos grunniens)所产的后代,其产奶量高于牦牛。为探究娟犏牛乳品质与牦牛乳差异,对泌乳高峰期娟犏牛与牦牛的乳汁进行了蛋白质组学分析。通过串联质谱(TMT)标记蛋白质组学方法比较两种奶的乳清和乳脂球膜(MFGM)蛋白差异,结果表明,利用标记定量蛋白质组学技术在泌乳高峰期娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651个乳清蛋白和990个MFGM蛋白,筛选出乳清差异表达蛋白(DEPs)145个,其中娟犏牛奶比牦牛奶上调71个,下调74个;筛选出MFGM DEPs 160个,其中娟犏牛奶比牦牛奶上调78个,下调82个。生物信息学分析结果发现,泌乳高峰期娟犏牛奶乳清与MFGM DEPs主要参与的生物过程是固有免疫应答,定位的主要细胞成分是胞外间隙和胞外区,而乳清DEPs主要参与的分子功能是蛋白质同源二聚体活性,MFGM DEPs主要参与的分子功能是鸟苷-5'-三磷酸酶(GTPase)活性。娟犏牛奶乳清与MFGM DEPs参与的重要免疫途径是补体与凝血级联。综上可知,娟犏牛奶中丰度较高的主要乳清和MFGM DEPs在促进钙磷吸收、免疫保护和免疫调节等方面表现优异,牦牛奶中丰度较高的主要乳清和MFGM DEPs在保证细胞稳定性、促进T淋巴细胞增殖和抗菌等方面表现优异,说明泌乳高峰期娟犏牛奶较牦牛奶在免疫保护和免疫调节等生物过程中发挥更重要作用,推测娟犏牛奶更有助于新生儿建立抗微生物感染的免疫系统。本研究结果为高原奶制品的开发提供了数据支撑,并为生产功能性婴幼儿配方乳粉提供了科学依据。

娟犏牛与牦牛乳汁相同蛋白质组学分析

利用蛋白质组学的方法对娟犏牛奶与牦牛奶乳清和乳脂球膜(MFGM)相同蛋白进行分析,而娟犏牛产奶量高于牦牛,若娟犏牛奶的功能与牦牛奶相近,将提高当地牧民的经济水平。通过离心法分离乳清与乳脂,分别提取蛋白;通过串联质量标签(TMT)技术,进行蛋白质定性与定量分析得到相同蛋白;对相同蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路、蛋白互作等生物信息学分析。结果表明,利用标记定量蛋白质组学技术在娟犏牛奶与牦牛奶中共鉴定到651种乳清蛋白和990种MFGM蛋白,筛选出298种乳清相同蛋白,283种MFGM相同蛋白。GO注释分析发现,鉴定的娟犏牛奶与牦牛奶乳清相同蛋白主要参与的生物过程是内肽酶活性的负调控、免疫应答和免疫球蛋白产生,MFGM相同蛋白参与的生物过程主要是内肽酶活性的负调控和补体激活,经典途径乳清与MFGM相同蛋白定位的细胞成分主要是胞外间隙和胞外区,参与的分子功能主要是三磷酸鸟苷(GTP)酶活性、GTP结合。KEGG富集分析发现,娟犏牛奶与牦牛奶乳清与MFGM相同蛋白主要富集的途径包括补体和凝血级联反应、吞噬体和内质网中的蛋白加工。娟犏牛奶和牦牛奶中丰度较高的蛋白显示出其在免疫和促进营养吸收等方面表现优异,然而,娟犏牛产奶量高于牦牛,这将增加当地牧民的经济收入,也为人们提供更多有价值的高原奶制品。

小鼠血清外泌体不同提取方法的比较

目的:通过超速离心法和密度梯度离心法分离小鼠血清来源外泌体,为今后研究选择适合的方法提供参考。方法:将18只昆明系小鼠雌雄各半分为3组,每组6只,其中两组分别用超速离心法及密度梯度离心法提取小鼠血清中外泌体。通过透射电子显微镜观察2种方法提取外泌体的形态结构。之后在不同日期对剩下1组同种系同日龄6只小鼠的血清利用超速离心法提取外泌体,对得到的外泌体与之前该方法得到的结果进行比较,检验超速离心法的重复性。结果:通过对2种方法提取到的外泌体进行观察,与密度梯度离心法相比,超高速离心法提取的外泌体浓度更高,杂质较少。结论:超高速离心法是更为可靠且有效的外泌体提取方法。

基于网络药理学研究连翘叶提取物通过AMPK抗恩诺沙星诱导肝损伤的作用

【目的】运用网络药理学并通过体内试验研究连翘叶提取物(Forsythia suspense leaves extract,FSLE)治疗恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)诱导的肝损伤(enrofloxacin induced liver injury,EILI)的作用机制。【方法】采用乙醇-酶法提取连翘叶有效成分,通过液相-质谱法(LC-MS)鉴定FSLE主要的化学成分。利用PubChem、Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库分析预测FSLE有效活性成分及作用靶点,通过GeneCards疾病数据库搜索EILI的作用靶点。运用STRING在线网站及Cytoscape 3.8.0软件构建FSLE治疗EILI的核心靶点,借助Metascape网站进行GO功能及KEGG通路富集分析,并用Cytoscape 3.8.0软件绘制“成分-靶点-信号通路”可视化网络。通过体内试验验证FSLE抗EILI的药理作用,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测不同处理组腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的表达,通过商业化试剂盒检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。【结果】结合LC-MS与各数据库分析得出FSLE活性成分有20种,对应靶点338个;EILI疾病靶点913个;药物-疾病交集靶点124个,包含FSLE治疗EILI核心靶点12个,KEGG通路20条,其中AMPK通路与FSLE治疗EILI密切相关。动物试验结果显示,FSLE可显著降低EILI小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transferase,AST)活力(P<0.05)。FSLE可显著升高小鼠肝脏AMPK的基因和蛋白表达量水平(P<0.05)。与正常对照组相比,FSLE可显著降低小鼠肝脏组织中MDA和H_(2)O_(2)含量(P<0.05),显著升高GSH含量和SOD活力(P<0.05),抑制EILI诱导的肝脏氧化应激。【结论】FSLE可通过上调AMPK的表达抑制肝脏氧化应激发挥抗EILI的作用,对肝损伤药物的开发具有重要的意义。

不同海拔下黄牛乳蛋白差异表达的蛋白组学分析

通过对黄牛乳进行乳成分分析及TMT定量蛋白质组学分析,筛选不同海拔黄牛乳成分差异表达蛋白,结合DAVID数据库分别进行乳清蛋白、乳脂肪球膜蛋白(MFGM)的GO和KEGG富集分析,使用STRING在线工具和Cytoscape 3.8.2软件构建不同海拔地区黄牛乳清、MFGM蛋白的蛋白质互作网络。结果,两种海拔中,3 850 m海拔地区(后记作HA)黄牛乳营养成分高于2 700 m海拔地区(后记作LA)黄牛乳;HA黄牛乳清蛋白、MFGM蛋白浓度显著高于LA黄牛乳清蛋白与MFGM蛋白。乳清蛋白中123个差异表达蛋白上调,122个差异表达蛋白下调;MFGM蛋白中172个差异表达蛋白上调,95个差异表达蛋白下调。黄牛乳清蛋白、MFGM蛋白共同参与免疫调控过程、代谢过程、发育过程;共同涉及的分子功能包括调节酶活性、能量结合、脂质结合。补体和凝血级联、溶酶体代谢、Ig A产生的肠道免疫网络、抗原加工和呈递、B细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性是主要的免疫相关信号通路。结果表明,HA黄牛乳的蛋白浓度更高,可使犊牛血清总蛋白(STP)升高,从而可影响犊牛成年后的繁殖性能。HA黄牛乳清、MFGM蛋白可能在抑制肿瘤发生、增强宿主免疫防御的信号通路中发挥重要作用,LA黄牛乳汁在抑制炎症反应过程中发挥作用。