癫痫发作的大鼠延髓内脏带神经元的FOS表达

为研究大鼠"延髓内脏带"神经元在红藻氨酸诱导癫痫发作时的反应，本文用抗FOS蛋白和抗酪氨酸羟化酶双重免疫组织化学方法，对下列三组实验动物进行了观察：（1）红藻氨酸（10mg／kg）腹膜腔注射组；（2）L－精氨酸慢性腹膜腔注射给药（40mg／kg，2次／d，共4d）后，再注射红藻氨酸组；（3）L－硝基精氨酸慢性腹膜腔注射给药（50mg／kg，2次／1d，4d）后，再注射红藻氨酸组。所有动物均在红藻氨酸注射3h后处死，制片，染色。结果：红藻氨酸注射组动物出现癫痫发作，"延髓内脏带"内显示密集的FOS阳性神经元，其中FOS／酪氨酸羟化酶神经元占酪氨酸羟化酶神经元总数的85％，占FOS阳性神经元总数的15％；酪氨酸羟化酶神经元出现胞体变形，胞浆内有空泡，突起短缺等现象。L－精氨酸＋酪氨酸羟化酶组癫痫发作较轻，"延髓内脏带"内FOS阳性神经元较少；L-硝基精氨酸＋酪氨酸羟化酶组癫痫发作加重，死亡率增高，"延髓内脏带"内FOS阳性神经元极多。以上结果表明，"延髓内脏带"内神经元在癫痫发作时反应强烈；一氧化氮介质可能有抗惊厥作用。

大鼠上涎核的传出神经纤维与翼腭神经节中的VIP-、DβH-、NPY-神经元的关系──光镜研究

目的 探讨翼腭神经节节前神经纤维在翼腭神经节中的形态、分布 ,以及与含不同神经活性物质的神经节细胞的关系。 方法 用顺行标记结合免疫组织化学方法进行研究。 结果 在翼腭神经节内 ,有大量的顺行追踪标记阳性神经纤维 ,呈篮状缠绕在神经节细胞周围 ,非常密集。免疫双标记法显示这些被顺行追踪阳性神经纤维包绕的神经元多呈 VIP、DβH和 NPY免疫反应性。在顺行追踪免疫反应性篮状神经纤维之间 ,还有 SP、CGRP、VIP、DβH、NPY免疫反应性神经纤维。 结论 翼腭神经节中 VIP(Ch AT)和 DβH。

一种冰冻切片漂片法免疫反应后再用石蜡切片的方法

本文采用组织冰冻切片５０μｍ进行双重标记的免疫组织化学漂片染色后，将其贴在塑料包埋盒内，脱水，经石蜡包埋切为１－３μｍ的薄片贴于载玻片上，干燥后脱水透明封片，最后进行切片观察，免疫阳性产物被准确定位于所观察的细胞或纤维上，得到满意的结果。为免疫组织化学形态学研究工作提供了新的手段。

用漂片法研究中枢和周围神经内GABA能神经元和终末的免疫组织化学改良方法

ＧＡＢＡ的免疫组织化学定位研究是比较特殊且困难的方法，以往的研究在方法上存在许多缺憾。我们对此进行了改良：用０．５％戊二醛，４％多聚甲醛，０．２％苦味酸固定液灌注固定，振动切片，漂片方法，研究了中枢和周围神经系统中ＧＡＢＡ的免疫组织化学定位，得到了满意的结果，避免了内源性、代谢性ＧＡＢＡ呈色，达到快速、经济之目的。

c-fos在电针调控大鼠胃运动中的表达及其意义

目的 :探讨原癌基因c fos在穴位电针对胃运动影响中的表达及其意义。方法 :采用免疫组织化学方法及电生理的方法 ,观察电针刺激“足三里”等不同穴位 ,c fos在中枢延髓的孤束核(NTS)及迷走神经背运动核 (DMV)中的表达 ,同时采用浆膜法检测胃电变化情况。结果 :电针刺激“足三里”等不同穴位c fos在NTS及DMV中的表达情况不同 ,且胃电也发生较为明显的变化。结论 :穴位电针对胃运动具有调节作用。以c fos的表达作为激活标志 。

电针刺激足三里穴对内脏痛大鼠行为学及骶髓后连合核中GFAP、OX42表达的影响

探讨电针刺激大鼠足三里穴(ST36)对内脏痛的镇痛作用机制。向大鼠乙状结肠注射福尔马林制作内脏痛模型。将实验大鼠分成A、B、C和D组:A组为单纯内脏痛组;B组为预先给予电针刺激足三里穴,再制作内脏痛模型;C组为制作内脏痛模型后再给予电针刺激足三里穴;D组为对照组。观察大鼠痛行为表现后,应用免疫荧光组织化学方法观察内脏痛大鼠骶髓后连合核(dorsal commissural nucleus,DCN)内星形胶质细胞的标记物胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和小胶质细胞的标记物OX42的表达变化。单纯内脏痛组大鼠的痛行为表现最为明显,内脏痛+针刺组大鼠的痛行为表现略减低,针刺+内脏痛组大鼠的痛行为表现明显减弱。单纯内脏痛大鼠DCN内GFAP和OX42的表达明显增强;内脏痛+针刺组大鼠DCN中GFAP和OX42的表达明显减弱;针刺+内脏痛大鼠DCN中GFAP和OX42表达减低更加显著。实验结果表明电针刺激足三里穴能明显地减弱伤害性刺激引起的内脏痛反应,这种作用可能与星形胶质细胞和小胶质细胞有关。

次声作用后大鼠海马星形胶质细胞的变化

目的研究8Hz,90dB和130dB次声作用后不同时间点,大鼠海马中胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。方法8Hz,90dB和130dB次声作用于大鼠,2h/d,分别作用1,7,14,21,28d后采用免疫组织化学方法,观察大鼠海马星形胶质细胞GFAP表达的时程改变。结果130dB组从作用1d开始大鼠海马中GFAP阳性星形胶质细胞数量开始增加,14d达到高潮,21d开始下降,但仍然维持较高水平;90dB组大鼠各时间点GFAP反应均比130dB组弱。结论8Hz,90dB和130dB次声作用可以激活海马大量星形胶质细胞,对神经元具有保护作用。

膈下迷走神经切断术抑制腹腔给予LPS诱导的延髓内脏带内Fos表达

目的 研究迷走神经在免疫系统至延髓内脏带 (MVZ)通路中的可能性。 方法 对雄性 SD大鼠行膈下双侧迷走神经干切断术或假切断手术 ,存活 4周后再经腹膜腔注入免疫刺激剂脂多糖 (L PS)或无菌生理盐水(NS) ,3h后处死 ,用免疫组织化学 ABC法对 MVZ进行 Fos染色。 结果 假手术组大鼠腹腔给予 L PS后 ,MVZ可发现大量 Fos表达 ;膈下迷走神经切断术组大鼠腹腔给予 L PS后 ,MVZ内的 Fos表达量则明显减少。 结论 迷走神经参与外周免疫信息向中枢的传递 ,外周免疫信息可经迷走神经传至 MVZ,MVZ是“免疫 -脑通讯”的中继站 ,机体内存在“迷走神经→ MVZ”神经免疫调节通路。

低功率半导体激光照射对大鼠神经损伤后脊髓降钙素基因相关肽表达的影响

目的 :研究 15mW半导体激光照射对大鼠坐骨神经损伤后脊髓降钙素基因相关肽 (CGRP)表达的影响。方法 :96只成年雄性SD大鼠制成坐骨神经损伤模型 ,半导体激光照射损伤的坐骨神经 ,能量密度为 31.85J/cm2 ,应用免疫组化方法观察脊髓内CGRP的变化。结果 :神经损伤后 1天脊髓内CGRP表达即增加 ;第 2周及第 4周时激光照射组CGRP的表达高于对照组 ,阳性表达主要集中于脊髓前角运动神经元和背根感觉纤维 ;第 8周时降钙素基因相关肽仍保持较高水平的表达 ,但与对照组比较无明显差异。结论 :15mW半导体激光照射大鼠损伤的坐骨神经可引起脊髓内神经元CGRP表达的变化 。

胃伤害性刺激诱导大鼠脑干星形胶质细胞GFAP蛋白表达及其与神经元的关系

研究大鼠在福尔马林诱发胃伤害性刺激时脑干内星形胶质细胞及神经元的变化。应用免疫组织化学三重标记法在脑原位切片同时显示脑干内 Fos蛋白、胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、酪氨酸羟化酶 (TH)的表达。结果显示 :1.在福尔马林诱发胃伤害性刺激后 ,脑干胶质细胞 GFAP表达阳性 ,并表现出明显的核团或亚核定位特点。在延髓内脏带 (MVZ)、中缝大核 (RMg)、蓝斑 (L C)、臂旁外侧核 (L PB)、中缝背核 (DR)、中脑导水管周围灰质腹外侧区 (vl PAG)、上丘中灰层 (Ing SC)等脑区有较多的 Fos阳性细胞 ,而且 Fos阳性表达的分布与上述 GFAP阳性分布基本一致 ;2 .MVZ、L C、DR、vl PAG等部位有大量 Fos及 TH双标阳性神经元 ,周围有密集的 GFAP阳性细胞 ;3.随着刺激后存活时间的变化 ,GFAP与Fos阳性细胞的反应均经历逐渐升高后又渐降低直至消失的变化。结果表明

人胚胎海马发育的形态学研究 Ⅴ.室管膜的发生

运用HE和Nissl染色、免疫组织化学法、透射电镜及扫描电镜，对60例6周至足月的人胚胎海马室管膜上皮变化进行了观察。发现胚胎发育过程中室管膜发生了剧烈变化。最早室管层神经上皮细胞为假复层柱状，随着未分化细胞向外迁徙，海马室管膜层神经上皮细胞迅速增殖，形成复层上皮。当室管膜层细胞停止迁徙时，室管膜开始向假复层柱状及单层柱状上皮转变。电镜观察，胚胎早期神经上皮细胞由未分化细胞构成；其特点是，细胞质内各种特化细胞器匮乏，但糖原丰富。15周左右未分化细胞开始向长突细胞及室管膜细胞分化。长突细胞电子密度高，底部有细长突起，表面有微绒毛，胞质内微丝丰富；而室管膜细胞电子密度低，底部无突起，但表面有丰富的纤毛。对长突细胞及免疫组化染色的GFAP阳性细胞进行形态和发育特征的比较，提示两者属同一类细胞。扫描电镜下，15周前室管膜表面微绒毛较多，以后纤毛逐步发育，大量密集纤毛布满于室管膜表面。此外，还能见到一类接触脑脊液神经元，这类神经元可为多极或双极，并有突起伸入室管膜上皮内。

康复训练对脑梗塞偏瘫大鼠的行为学和脊髓GAP-43表达的影响

目的 :研究康复训练对实验性脑梗塞偏瘫大鼠行为学和脊髓生长相关蛋白 (GAP - 43)表达的影响。方法 :采用光化学法制成脑梗塞偏瘫大鼠模型 ,并随意分为康复训练组和制动组 ,每天置于滚筒式网状训练器内转动训练 ,在平衡木、转棒上做行走训练 ;共 30min ;每周 5次。在梗后 2 4h、7d、14d、2 1d、2 8d观察行为学变化和脊髓的GAP- 43的表达 ,同时以正常大鼠作为对照。结果 :Bederson神经功能、平衡木、转棒行走 (7- 2 8d)、网屏实验 (7- 14d)康复组较制动组明显好转 (P <0 .0 5 )。正常组脊髓的GAP - 43较少 ;脑梗塞后 2 4h康复组、制动组大鼠脊髓未瘫痪侧脊髓前角有大量的GAP - 43的表达 ,脑梗塞后 7- 14d康复组瘫痪侧及未瘫痪侧脊髓前角区均有GAP - 43表达 ,制动组阳性染色淡 ;2 1- 2 8d康复组未瘫痪侧脊髓前角较瘫痪侧GAP - 43表达的多 ,而制动组不明显。结论 :脑梗塞后康复训练可促进行为恢复及脊髓前角GAP -

8 Hz 90 dB次声对大鼠海马细胞内钙离子及内质网钙通道蛋白RyRs表达的影响

目的:实验观察8Hz,90dB次声作用对大鼠海马细 胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及内质网钙通道蛋白(Ryanodine receptors,RyRs)的影响,为进一步研究次声作用机制及为次声 卫生防护提供理论依据.方法:将SD大鼠60只随机分为5个 组,即对照组、次声作用1,7,14和21d组,每组再随机分为 Ca2+测定组和RyRs检测组.通过急性细胞分离、Ca2+荧光探针 及激光共聚焦显微镜观察大鼠脑海马细胞[Ca2+]i变化;采用 免疫组织化学方法观察其海马CA1及CA3区锥体细胞RyRs 表达状态.结果:频率8Hz,90dB次声分别作用2h/d,1d、7d 组于作用后海马细胞[Ca2+]i与对照组相比均无显著性差异 (均P>0.05),14d组海马细胞[Ca2+]i显著增高(P<0.01 vsallofothers),21d组明显回落,但较对照组仍然增高(P< 0.05);海马CA1及CA3区锥体细胞RyRs阳性表达细胞数,1, 7d组与对照组相比均无显著性差异(均P>0.05)。

白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α对大鼠下丘脑CRH神经元兴奋作用的研究

为证明下丘脑产生的促肾上腺皮质激素释放激素（ＣＲＨ）与白细胞介素－６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的中枢作用有关，应用免疫组织化学方法，通过观察即早基因ｃ－ｆｏｓ的表达，对ＩＬ－６和ＴＮＦα经脑室引入后对下丘脑ＣＲＨ神经元的兴奋作用进行了研究。结果显示，在脑室注射ＩＬ－６或ＴＮＦα５ｈ后，下丘脑室旁核小细胞部出现强烈Ｆｏｓ表达。免疫组织化学双标记法显示，两种细胞因子诱导的Ｆｏｓ表达细胞中均有许多细胞同时呈现ＣＲＨ免疫反应。相比之下，双标细胞数量在ＩＬ－６引入者较ＴＮＦα引入者多。该结果表明。

人胚胎海马发育的形态学研究──Ⅱ．神经细胞与神经胶质细胞的分化

利用Ｈ－Ｅ和Ｎｉｓｓｌ染色法、免疫细胞化学法、Ｇｏｌｇｉ镀银法及透射电镜技术，对６０例６周至足月人胚胎海马神经细胞及神经胶质细胞的分化、发育进行了观察。结果表明；神经细胞及神经胶质细胞均由未分化细胞转化而来。未分化细胞、神经细胞和神经胶质细胞在对硝酸银的嗜染性、免疫细胞化学特征及超微结构特征等方面都有显著差别。神经细胞为神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）阳性细胞，主要有锥体细胞、颗粒细胞和篮状细胞等。星形胶质细胞和放射状胶质细胞为胶质原纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）阳性细胞。未分化细胞体积小、球形、胞质少，为ＮＳＥ及ＧＦＡＰ阴性，硝酸银镀染也不着色；透射电镜下未分化细胞核异染色质丰富，胞质内缺乏特化的细胞器，但糖原含量丰富。胚胎早期室管膜神经上皮细胞及由此迁徙而来的中间层细胞均由未分化细胞构成。星状胶质细胞和放射状胶质细胞出现较早，第１１周开始出现于室管膜下的室床及海马伞部；随胎龄增加，单位面积垦状胶质细胞数量增加，１７周后维持在相对稳定状态，并且均匀分布于海马各个部位与区域。１５周后中间层细胞陆续开始分化为锥体细胞和颗粒细胞，到足月胚胎锥体层及颗粒层不再有未分化细胞。

康复训练对脑梗死大鼠脑GAP-43表达的影响

目的 研究康复训练对脑梗死大鼠脑的生长相关蛋白 (GAP- 43)表达的影响 .方法 SD大鼠采用光化学法制成脑梗死模型后 ,随机分康复组、制动组、自由组及正常组 ,每组大鼠在 1,3,7,14,2 1,2 8d取脑组织免疫组化染色 ,以观察脑梗死大鼠各组不同时期脑的 GAP- 43表达 .结果 1,3,7,14d脑梗死周边区可见 GAP- 43阳性细胞 ,2 1,2 8d时梗死周边 GAP- 43阳性细胞逐渐减少 ,康复组较制动组在 7,14d明显增加 ,尤以胼胝体为著 .结论 康复训练可引起损伤周边区 GAP- 43表达的变化 。

8Hz 90dB次声作用对大鼠海马蛋白激酶A表达及cAMP反应元件结合蛋白磷酸化水平的影响

目的:观察8Hz90dB次声作用对大鼠海马PKA表达及CREB磷酸化水平的影响。方法:采用免疫组织化学方法,观察8Hz90dB次声作用不同时间点大鼠海马PKA表达及p-CREB-1(Ser-133)磷酸化水平。结果:8Hz90dB次声作用后,大鼠海马CA1区各时间点PKA表达均上调,相应时间点CREB磷酸化水平亦上调,两者之间的变化呈显著正相关。CA3区除7d组PKA表达上调、CREB磷酸化水平亦上调外,两者之间总变化趋势为显著负相关。DG各时间点PKA表达与CREB磷酸化水平变化之间无显著相关性。结论:8Hz90dB次声作用对大鼠海马各区PKA表达及CREB磷酸化水平均有不同程度的影响,提示次声对学习记忆功能影响的机制可能涉及对cAMP浓度增高→PKA激活→CREB磷酸化→CRE依赖性转录这一分子链产生了干扰作用。

哮喘小鼠肺内CGRP免疫反应阳性神经纤维的变化

目的 探讨 BAL B/c小鼠哮喘后肺内 CGRP免疫阳性神经纤维分布及形态变化 .方法 成年雄性小鼠随机分为正常组和哮喘组 ,采用免疫组织化学法观察小鼠肺内 CGRP免疫反应神经纤维的变化 .结果 哮喘组肺内 CGRP免疫反应神经纤维数量及分布发生了显著变化 ,从肺内支气管到终末细支气管均有较密集的 CGRP免疫反应阳性纤维分布 ,成束走行 ,以平滑肌外层和粘膜下层为主 .此外 ,粘膜表面可见裸露的阳性纤维 .哮喘组与正常对照组比较 CGRP免疫反应阳性纤维的数量显著增加 ( P<0 .0 1) .结论 肺内 CGRP免疫反应神经纤维增生与哮喘发病密切相关 ,并可能是导致哮喘持续和发展的原因之一 .

康复训练对大鼠脑梗死灶周围BDNF表达的影响

目的研究康复训练对大鼠脑梗死灶周围脑源性神经营养因子 (BDNF)表达的影响。方法 60只SD大鼠采用光化学诱导法制作脑梗死大鼠模型 ,于 2 4h后将模型大鼠随机分为康复训练组和制动组。前者每天进行水迷宫、转棒和滚笼训练 ,后者置于筒状网笼内限制活动。分别在 1d、3d、7d、10d、14d取脑行免疫组化染色 ,每组每个时间点各 6只 ,观察各时间点脑梗死灶周围BD NF的表达。结果 1d两组梗死灶周围BDNF阳性神经元均明显增多 ;3d训练组较制动组有更多BDNF阳性神经元 (P <0 0 1) ;随时间延长 ,BDNF阳性神经元减少 ,染色亦变浅 ,在 7d两组梗死灶周围仅有少量BDNF阳性神经元 ;10d、14d两组梗死灶周围偶见BDNF阳性神经元 ;BDNF阳性胶质细胞在 3d、7d、10d、14d大量表达 ,且康复训练组较制动组多 (P <0 0 1)。结论康复训练能促进中枢神经系统表达较高水平的BDNF。

氟烷吸入麻醉引起c-fos基因在中枢神经系统的表达与分布

目的:研究氟烷吸入麻醉在中枢神经系统的作用部位.方法:应用C-fos基因免疫组织化学方法.结果:SD大鼠在吸入氟烷浓度为O.75%,1.5%和2%麻醉1h后,Fos阳性神经元主要分布于端脑:梨状皮层、杏仁核簇、伏核、外侧隔核、终纹床核、海马CAI区、海马回嗅觉小岛,间脑:丘脑室旁核、丘脑中央中核、菱形丘脑核、丘脑腹后外侧核、下丘脑室旁核和室周核、视前中核、视上核和视交叉上核、内外侧缰核;脑干:中脑导水管周围灰质和E-W核.同时发现Fos阳性神经元的数目随着氟烷吸入浓度增加而增多.结论:提示这些神经核团可能参与了氟烷的麻醉过程,但对各功能性核团之间的联系方式和相互作用机制仍需进一步研究.