重叠延伸PCR合成风疹病毒E1蛋白抗原肽基因及其表达

目的:利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础。方法:利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠延伸PCR法合成相应抗原肽段,克隆后测序鉴定。再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a;利用IPTG诱导抗原肽段的表达,SDS-PAGE和West-ern blot法分析表达产物。结果:经过6轮重叠延伸PCR扩增,成功获得与预期目的序列一致的风疹病毒E1基因抗原肽并构建获得重组质粒pET32-rE1;在37℃下分别以终浓度为1 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导抗原肽表达,SDS-PAGE和Western blot法检测到预期的蛋白条带;且以IPTG终浓度为1 mmol/L诱导6 h后表达量最高。结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因抗原肽段,构建其原核表达载体pET32-rE1并表达该抗原肽。

牛蒡子苷元对子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖抑制作用及机制

目的:探讨牛蒡子苷元(ARG)对子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖抑制作用及机制。方法:HEC-1B细胞分为观察组和对照组,观察组用终浓度为10、20、30、40、60、100μmol/L的ARG干预,对照组用0.5%二甲基亚砜(DMSO)干预。48 h后,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:10、20、30、40、60、100μmol/L ARG干预48 h,HEC-1B细胞的相对生存率分别为(92.36±0.52)%、(89.59±0.74)%、(78.49±0.68)%、(56.47±0.59)%、(40.12±0.69)%、(37.52±0.58)%,且随着ARG作用浓度的升高,HEC-1B细胞的相对生存率呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05),干预48 h HEC-1B细胞50%抑制浓度(IC50)为50μmol/L。对照组和观察组(50μmol/L ARG)细胞凋亡率分别为(2.89±0.56)%、(26.58±3.26)%,观察组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。但观察组细胞周期分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组(50μmol/L ARG)细胞p65、p-IκB-α蛋白表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),2组间IκB-α蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ARG可抑制HEC-1B细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制与可能与降低NF-κB通路相关蛋白表达水平,抑制NF-κB通路活化有关。