金虎杂交斑三倍体血细胞特征及染色体核型分析

为了解三倍体金虎杂交斑(棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus♀×蓝身大斑石斑鱼E.tukula♂)的细胞遗传特性。以静水压休克诱导的三倍体金虎杂交斑为研究对象,通过细胞DNA含量测定鉴定出三倍体金虎杂交斑、对三倍体金虎杂交斑进行红细胞大小、形态的比较及染色体核型分析。结果显示,三倍体金虎杂交斑的DNA含量与二倍体金虎杂交斑的DNA含量的比值为1.45︰1。三倍体金虎杂交斑血细胞长轴、短轴分别为二倍体的1.34、1.14倍(P<0.01)。三倍体金虎杂交斑血细胞体积、表面积分别为二倍体的2.07和1.54倍(P<0.01),三倍体金虎杂交斑血细胞核长轴、短轴、核表面积、核体积分别为二倍体的1.22、1.05、1.29、1.57倍(P<0.01)。通过头肾-秋水仙素注射法进行染色体核型分析结果显示,二倍体金虎杂交斑的染色体数目为48,核型为2n=48=2sm+46t,NF=50,三倍体金虎杂交斑的染色体数目为72,核型为3n=72=1m+2sm+69t,NF=75,未发现有性染色体。实验结果为石斑鱼杂交种多倍体育种提供了丰富生物学基础数据。

长期超低温冷冻保存对鞍带石斑鱼精子超微结构及酶活性的影响

为探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化,阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制。实验采集2022年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为23、49和61个月的冷冻保存精液,用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性;用计算机辅助精子分析仪(CASA)检测精子运动参数;测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和肌酸激酶(CK)共6种酶活性的变化及三磷酸腺苷(ATP)浓度变化;用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构。结果显示,伊红-苯胺黑染色后,鲜精质膜完整性最高,为83.43%±2.73%,经过超低温冷冻后,精子质膜完整性显著降低,且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低。CASA结果显示,鲜精活力最高,为90.47%±3.34%,经过超低温冷冻后精子活力显著降低,但长期保存23~61个月的精子活力无显著差异,精子活力保持在(63.95%±3.66%)~(68.58%±2.73%),具有稳定的活力,且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度(VSL)、平均曲线运动速度(VCL)和平均路径速度(VAP)均没有显著差异。精子超微结构显示,鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常。经过超低温冷冻保存后,精子形态结构损伤明显,表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等。鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后6种酶活性的变化及ATP含量结果显示,经过超低温冷冻后,精子内SOD、GSH-Px和CAT及ATP含量均显著降低。精浆中酶活性升高,除GR和CAT外,其余酶活性均差异显著。研究表明,长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著的影响。本研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据,为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标。

金虎石斑鱼和珍珠龙胆石斑鱼幼鱼胃排空特征及消化酶活性

【目的】比较金虎石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus tukula♂)(记作EFT)和珍珠龙胆石斑鱼(E.fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)(记作EFL)胃内容物质量的变化特征,并确定其最优数学模型。【方法】选取遗传背景相近、养殖条件相同的EFT和EFL幼鱼,在水温(24.04±1.87)℃条件下一次性饱食投喂颗粒饲料,在摄食后测定两者胃内容物湿质量,分析胃排空特征,比较线性模型、指数模型和平方根模型对胃排空曲线的拟合程度,分析胃和肠中消化酶活性变化规律。【结果】EFT、EFL幼鱼摄食后胃排空特征均呈典型的先慢后快再慢型,拟合效果最优的模型均为平方根模型,两种鱼类胃内容物(Y)与摄食后时间(t)的回归方程分别为Y0.5=1.0586-0.0142 t(R^(2)=0.9018,P<0.0001)、Y0.5=0.9690-0.0187 t(R^(2)=0.8835,P<0.0001);随着胃排空程度增加,除EFT幼鱼肠淀粉酶、EFL幼鱼肠脂肪酶、肠糜蛋白酶及胃淀粉酶活性变化无明显差异外(P>0.05),其余指标均变化显著(P<0.05),且EFT幼鱼肠脂肪酶和肠糜蛋白酶活性均显著高于EFL幼鱼(P<0.05)。【结论】EFT幼鱼的摄食水平及胃排空率均大于EFL幼鱼,且在胃排空过程中EFT对蛋白质和脂质的消化吸收能力强于EFL幼鱼。

Na^(+)、K^(+)、pH及3种单糖对湖拟鲤精子活力的综合调控

【目的】明确Na^(+)、K^(+)、pH及3种单糖对湖拟鲤精子活力的单独调控和综合调控,筛选出湖拟鲤精子的适宜激活配方,为其人工繁殖及种质资源保护提供技术参考。【方法】以快速运动时间(FT)和寿命时间(LT)为指标,采用单因素试验和正交试验研究不同渗透压条件下Na^(+)、K^(+)、pH及3种单糖(葡萄糖、果糖和半乳糖)对湖拟鲤精子活力的单独和综合调控作用,筛选湖拟鲤精子的适宜激活液配方。【结果】Na^(+)溶液渗透压为282.36 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(40.00和285.33 s),K^(+)溶液渗透压为211.77 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(36.00和130.33 s),葡萄糖溶液渗透压为352.95 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(43.67和355.33 s),果糖溶液渗透压为352.95 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(45.00和372.67 s),半乳糖溶液渗透压为235.30 kPa时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(40.00和357.00 s),pH为8.0时湖拟鲤精子的FT和LT达最大值(30.00和100.33 s)。正交试验结果表明,湖拟鲤精子活力综合调控的最优配方为果糖溶液渗透压117.65 kPa、pH 8.0、Na^(+)溶液渗透压188.24 kPa,对应的FT和LT分别是58.33和370.00 s;果糖、pH和Na^(+)对湖拟鲤精子活力的调控力度为果糖>Na^(+)>pH,且表现为果糖和Na^(+)对湖拟鲤精子的FT和LT调控效果有显著影响(P<0.05),而pH的影响不显著(P>0.05)。【结论】适宜浓度的Na^(+)、K^(+)、葡萄糖、果糖及半乳糖对湖拟鲤精子活力均具有较好的促进作用,主要是通过改变渗透压来调控湖拟鲤精子活力;适宜的pH为7.5~8.5。通过正交试验筛选出的湖拟鲤精子最优激活配方为果糖溶液渗透压117.65 kPa、pH 8.0、Na^(+)溶液渗透压188.24 kPa,其调控效果优于单因素最优渗透压,调控力度为果糖>Na^(+)>pH。

虾青素对赤点石斑鱼生长、体色、皮肤色素和抗氧化性的影响

【目的】探究虾青素对赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)生长、体色、皮肤色素和抗氧化性的影响,为虾青素在赤斑石斑鱼饲料中的应用及功效评价提供科学依据。【方法】在赤斑石斑鱼基础饲料中分别添加虾青素0、100、200、400和800 mg/kg,制成5种等氮等脂饲料,分别记为AST0(对照)、AST100、AST200、AST400和AST800组,饲喂初始体质量(6.17±0.26)g、全长(7.84±0.54)cm的赤点石斑鱼90 d,测定石斑鱼生长性能指标,用色差仪测定石斑鱼体色参数,通过双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)测定石斑鱼皮肤中类胡萝卜素和黑色素,用试剂盒测定石斑鱼肝脏总抗氧化能力(T-AOC)等抗氧化性能。【结果】与对照组比较,各实验组赤点石斑鱼的体质量、增重率、特定生长率、存活率、饲料系数和肥满度均无显著差异(P> 0.05),AST800组的肝体指数显著降低(P <0.05)。随着饲料中虾青素添加量的增加,赤点石斑鱼的头部、体侧和尾部的皮肤斑点变橙黄色,腹鳍基部变深红色;鱼鳍上的色素团分布均呈背鳍、臀鳍和尾鳍色素细胞密度较高,胸鳍和腹鳍色素细胞密度较低的规律;虾青素添加组腹鳍中黄色素细胞和红色素细胞的数量增加。各虾青素添加组鳃盖、背部和尾柄皮肤与胸鳍、背鳍的亮度(L^(*))较对照组显著升高(P <0.05),鳃盖皮肤和背鳍的红度(a^(*))较对照组显著升高(P <0.05),鳃盖、背部、腹部和尾柄皮肤与胸鳍、背鳍和尾鳍的黄度(b^(*))较对照组显著升高(P <0.05)。饲料中添加虾青素显著增加赤点石斑鱼背部和腹部皮肤的类胡萝卜素浓度(P <0.05),以及腹部皮肤黑色素浓度(P <0.05)。赤点石斑鱼肝脏T-AOC、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性随饲料中虾青素添加量的增加而显著升高(P <0.05),丙二醛含量随饲料中虾青素添加量的升高而显著降低(P <0.05)。【结论】饲料中添加虾青素未显著影响体质量、增重率和特定生长率,显著改善赤点石斑鱼的体色、内在色素沉着,提高肝脏抗氧化能力。综合生长、体色、皮肤色素含量、抗氧化性数据,赤点石斑鱼饲料中适宜虾青素添加量为200~400 mg/kg。

石斑鱼杂交新种质“金虎石斑鱼”培育及产业化应用

石斑鱼养殖产业的迅速发展对健康优质鱼苗需求量逐年增大,但养殖公司缺乏对繁育群体的选育技术,导致石斑鱼种质资源退化,石斑鱼苗种成活率低、畸形率高、疾病频发等现象普遍存在,严重影响着石斑鱼产业的可持续发展。1金虎石斑鱼杂交新种质培育近年来团队选育构建了棕点石斑鱼和蓝身大斑石斑鱼育种群体500多尾,发明了生长快、耐低氧、耐低温石斑鱼杂交育种技术,蓝身大斑石斑鱼性别转化及精子冷冻保存技术,建立了石斑鱼精子冷冻库,冷冻保存蓝身大斑石斑鱼精子1000 mL。