果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

多功能Th1细胞在抗结核免疫保护机制中的作用研究进展

人体抗结核免疫保护机制极其复杂，CD4T细胞在抗结核菌保护性免疫中起着关键作用，同时也参与了结核病的病理反应。随着对CD4T细胞各亚群的研究逐渐深入，近年来的研究认为抗结核免疫是Th1／Th2／Th17／Treg四个不同细胞亚群形成网络相互调节的结果。这其中，新近发现的Th1细胞的新亚群即多功能Th1细胞就是一个重要的参与者，研究发现多功能Th1细胞在结核病发生发展中起重要作用，本文就多功能Th1细胞在抗结核免疫保护机制中的作用研究进展做一综述。

TLR2对小鼠IL-17分泌的影响及其在抗结核免疫中的作用

目的通过检测TLR2-/-小鼠和WT小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞在TLR2结核菌配体刺激下IL-17的表达水平,阐明TLR2对Th17细胞的作用及其在抗结核免疫的意义。方法选取TLR2-/-小鼠和WT小鼠各6只,分离出小鼠脾脏淋巴细胞与TLR2结核菌配体(19KD脂蛋白、Mtb、Pam3Cys-SK)共刺激培养3 d,通过流式细胞技术检测CD4+T细胞IL-17的表达水平。结果在TLR2结核菌配体刺激下,WT小鼠的CD4+T细胞分泌的IL-17高于TLR2-/-小鼠,在Mtb刺激下两者之间有统计学差异(P<0.05)。结论结核菌通过TLR2直接影响IL-17表达,从而发挥抗结核免疫作用。

肺结核患者疗程中外周血辅助性和调节性T细胞的动态研究

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)和CD4+CD25+CD127low调节性T细胞与结核病的发病及抗结核治疗转归的关系。方法纳入对象包括32例活动性肺结核患者、25例Mtb潜伏感染者、45例健康对照者。流式细胞术检测外周血Th17细胞分泌细胞因子IL-17和CD4+CD25+CD127low调节性T细胞表达强度。结果以x±s表示,所有数据均使用Prism 4.0统计软件进行分析,两组间比较采用非配对t检验,多组间的比较采用ANOVA方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果肺结核患者组治疗前IL-17表达为(3.25±1.68)%,明显低于健康对照组[(4.62±1.46)%](F=6.633,P<0.0001)。比较活动性肺结核患者组IL-17表达在治疗前、治疗3个月[(4.17±2.27)%]、治疗6个月[(5.58±1.66)%]时的检测结果,发现治疗3个月时高于治疗前,但差异无统计学意义(F=12.244,P=0.057);而治疗6个月时明显高于治疗前(F=12.244,P<0.0001)和治疗3个月时(F=12.244,P=0.004)。健康对照组CD4+CD25+CD127low调节性T细胞表达为(4.97±1.60)%,与Mtb潜伏感染组[(5.00±1.08)%]比较,差异无统计学意义(F=11.986,P=0.937);活动性肺结核患者组治疗前表达为(6.59±1.73)%,显著高于健康对照组及Mtb潜伏感染组(F=11.986,P<0.0001)。比较活动性肺结核患者组治疗前、治疗3个月[(8.28±2.04)%]、治疗6个月[(7.46±1.87)%]时的CD4+CD25+CD127low调节性T细胞表达,发现治疗3个月时的表达明显高于治疗前(F=6.458,P=0.001);治疗6个月时的表达低于治疗3个月时(F=6.458,P=0.085),但差异无统计学意义;治疗6个月与治疗前的表达相比较,差异无统计学意义(F=6.458,P=0.068);治疗6个月CD4+CD25+CD127low调节性T细胞表达明显高于健康对照组(t=6.255,P<0.0001)。结论结核病患者外周血Th17细胞明显减少,经有效抗结核治疗后,Th17细胞逐渐增加,表明Th17细胞在抗结核免疫中起保护作用。结核病患者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞明显增多,经抗结核治疗后CD4+CD25+CD127low调节性T细胞逐渐减少,进一步说明CD4+CD25+CD127low调节性T细胞在抗结核免疫中起抑制作用。

结核病患者外周血B细胞及其亚群的检测

目的初步建立B细胞分群技术,并了解健康对照者、结核潜伏感染者、结核患者B细胞亚群的分布情况。方法根据B细胞表面CD19/CD5/CD1d标识将B细胞分为四群。利用流式细胞技术比较健康对照、结核潜伏感染者、结核患者外周血B细胞及B细胞分群表达的差异。结果结核患者外周血B细胞较健康对照者减少,但结果无统计学差异。结核患者外周血CD19+CD5+CD1d+B细胞显著高于健康对照及结核潜伏感染者(P<0.05);CD19+CD5-CD1d+B细胞高于结核潜伏感染者(P<0.05);CD19+CD5-CD1d-B细胞低于结核潜伏感染者(P<0.05)。结论肺结核患者外周血中存在着B细胞亚群的紊乱,尤其是CD19+CD5+CD1d+B细胞增多最为明显,而CD19+CD5-CD1d+B/CD19+CD5-CD1d-B细胞只比结核潜伏感染者显著增多或降低,提示B细胞亚群在结核的发病中起重要作用。

结核患者多功能CD8T细胞的表达水平及临床意义

目的:探讨结核患者多功能CD8 T细胞的表达水平及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测结核患者(TB)、潜伏感染者(LTBI)、健康对照(HC)外周血单个核细胞(PBMCs)或胸腔积液单个核细胞(PFMCs)结核特异性及非特异性多功能性CD8T细胞表达水平。结果 :非特异性抗原(PMA+I)刺激下,TB组PBMCs中多功能性CD8T细胞(IL-2+IFN-γ+TNF-α+CD8 T细胞)频率[(5.72±4.32)%]显著低于HC[(22.3±15.7)%(q=7.455,P<0.001)]和LTBI[(14.2±7.72)%,(q=3.110,P<0.05)];结核菌特异性抗原(MTB裂解液)刺激下,TB组PBMCs中多功能性CD8T细胞频率[(0.33±0.83)%]高于HC[(0.017±0.03)%(q=3.97,P<0.05)]和LTBI[(0.019±0.035)%,(q=3.39,P<0.05)];结核性胸膜炎患者PFMCs多功能CD8T细胞频率[(0.623±1.033)%]显著高于相应的PBMCs[(0.034±0.066)%,(P<0.001)];结核患者PBMCs多功能性CD8 T细胞表达水平和其HRCT评分呈负相关(r=-0.265 8,P=0.015 8)。结论:多功能CD8 T细胞表达水平检测有助于鉴别诊断结核患者和潜伏感染者,其与结核患者的病理损伤程度密切相关。

结核病患者体内抗原特异性多功能辅助性T细胞1的检测及分析

目的 了解结核分枝杆菌特异性多功能辅助性T细胞1(Th1)在外周血和胸腔积液中表达的变化及其临床意义.方法 纳入对象包括结核病(TB)患者93例,其中普通肺结核患者66例,结核性胸膜炎患者27例;结核分枝杆菌潜伏感染者(LTBI)30例;健康对照(HD) 66例.首先分离外周血和胸腔积液中的单个核细胞,特异性结核分枝杆菌抗原刺激后,进行胞内细胞因子染色,根据CD4+T淋巴细胞细胞因子产生的不同,将其分为7个不同亚群,分别为白细胞介素(IL)-2+干扰素(IFN)-γ+肿瘤坏死因子(TNF)-α+、I12+ IFN-γ+、ID2+ TNF-α+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、TNF-α+、IFN-γ+细胞亚群.结果 以“(x)±s”表示,所有数据均使用GraphPad Prism 4.0统计软件进行分析,两组间比较采用配对t检验,多组间比较采用ANOVA方差分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 TB患者外周血特异性多功能Th1细胞(II2+ IFN-γ+INF-α+)表达水平为(0.107±0.278)％,明显高于LTBI(0.019±0.032)％和HD(0.008±0.016)％(F=5.675,P-0.004);IL-2+TNF-α+细胞在TB和LTBI分别为(0.049±0.123)％和(0.046±0.050)％,均高于HD(0.003±0.014)％(F=5.435,P=0.005);TB患者IFN-γ+TNF-α+、IL-2+IFN-γ+细胞表达水平分别为(0.136±0.256)％和(0.146±0.347)％,明显高于HD(0.052±0.082)％和(0.029±0.042)％(F=3.774,P=0.024;F=4.912,P=0.008).结核性胸膜炎患者胸腔积液中特异性多功能Th1、IL-2+ TNFα+、IFN-γ+ TNF-α+、IL-2+、IFNγ++应答水平分别为(0.719±0.996)％、(0.628±1.284)％、(0.704±0.829)％、(0.955±1.538)％、(1.188±1.924)％,均高于外周血单个核细胞(0.033±0.065)％、(0.095±0.174)％、(0.137±0.317)％、(0.285±0.434)％、(0.318±0.598)％(t=3.700,P=0.001;t=2.125,P=0.043;t=3.216,P=0.003;t=2.144,P=0.041;t=2.412,P=0.023).结论 结核分枝杆菌特异性多功能Th1细胞应答激活与结核分枝杆菌感染的发病密切相关,多功能Th1细胞在TB的保护性免疫反应中起一定作用.

肺结核患者血浆和胸水中抑瘤素-M检测及临床意义

目的探讨血浆和胸水中抑瘤素-M在肺结核中的变化及其临床意义。方法应用双抗体夹心ELISA法检测24例健康体检者、21例活动性肺结核患者血浆和10例结核性胸膜炎胸水中OSM的水平。结果肺结核患者血浆中OSM水平低于健康对照组,差异有统计意义;结核性胸膜炎患者胸水中OSM高于肺结核患者血浆中OSM水平,差异有统计意义。结论OSM是局部病灶炎症反应的重要作用因子,可能参与了肺结核的免疫发病机制。

IL-22基因单核苷酸多态性与肝癌易感性的相关性研究

目的:利用高通量飞行时间质谱来探讨IL-22基因多态性与肝癌易感性的相关性。方法:选取2011年1月至2012年12月赣南医学院第一附属医院普外科收治的病理确诊的肝癌患者55例,同期在本医院体检科体检的健康人60例为对照组,采用美国Sequenom公司建立的Massarray检测平台分析IL-22基因4个SNP位点(rs2227472、rs2227478、rs2227483、rs2227473)基因型,统计两组人群各个SNP等位基因频率;应用ELISA方法检测不同基因型肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的培养上清液中IL-22浓度。结果:IL-22基因rs2227472位点存在GG、GA和AA 3种基因型,病例组等位基因G频率(57.2%)高于健康对照组(51.7%),差异有统计学意义(P<0.05),其他3个位点病例组和对照组之间差异无统计学意义;rs2227472位点GG基因型肝癌患者的PBMC培养上清液中IL-22浓度为(40±6)ng/L,明显高于AA/GA基因型肝癌患者(17±5)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-22基因rs2227472多态性与肝癌易感性有相关性,其等位基因G可能和肝癌发生有关;rs2227472多态性影响机体PBMC的IL-22的分泌,在肝癌的免疫学机制中起关键作用。

结核病患者外周血和胸腔积液中多功能Th1细胞检测

目的探讨结核病患者外周血和胸腔积液中IL-2+IFN-γ+TNF-α+多功能Th1细胞的水平及其临床意义。方法选取结核患者49例,其中结核性胸膜炎患者14例,结核潜伏感染者27例,健康对照66例,采用佛波酯(PMA)和离子霉素刺激全血和胸腔积液中单个核细胞,胞内细胞因子染色,流式细胞术检测CD4+T细胞细胞因子分泌的情况。结果依据CD4+T细胞产生细胞因子的不同,将其分为7个不同亚群,分别为IL-2+IFN-γ+TNF-α+、IL-2+IFN-γ+、IL-2+TNF-α+、IFN-γ+TNF-α+、IL-2+、TNF-α+、IFN-γ+细胞亚群,外周血中结核病患者的IL-2+IFN-γ+TNF-α+多功能Th1细胞的比例明显低于健康对照和潜伏感染者(P<0.01),IL-2+IFN-γ+细胞、IFN-γ+TNF-α+细胞表达水平明显低于潜伏感染者和健康对照(P<0.05);TNF-α+细胞则高于健康对照和潜伏感染者(P<0.05);其他各亚群无明显变化。胸腔积液单个核细胞(PEMC)的IL-2+IFN-γ+TNF-α+多功能Th1应答水平高于外周血单个核细胞(P<0.05);外周血单个核细胞中IL-2+细胞低于PEMC(P<0.01),其他各亚群无明显变化。结论非特异性Th1细胞应答与结核菌感染的临床转归有关,IL-2+IFN-γ+TNF-α+多功能Th1细胞在结核的保护性免疫反应中起一定作用。

IL-22在抗结核免疫机制中的作用研究进展

人体抗结核免疫机制非常复杂。CD4T细胞在抗结核菌感染免疫、结核病的病理生理过程中起了至关重要的作用。近年来的研究认为,抗结核免疫应答是CD4T细胞各个亚群及其细胞因子形成网络相互调节的结果。其中,白介素-22细胞因子（interleukin-22,IL-22）就是结核病发生发展中的一个重要参与者,它由激活的Th1细胞、Th17细胞、NK细胞、NKT细胞、以及新近发现的Th22细胞产生,

hMLH1基因对脑胶质瘤替莫唑胺耐药的影响及机制研究

目的:观察h MLH1基因对脑胶质瘤替莫唑胺耐药的影响并探讨其机制。方法:检测脑胶质瘤患者组织、耐药细胞株(U251/TMZ)和亲本敏感细胞株(U251)的h MLH1表达水平;使用5氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)予耐药细胞株去甲基化干预后,采用MBP法检测其h MLH1基因启动子甲基化水平;检测干预前后耐药细胞株的h MLH1表达水平以及替莫唑胺IC50的变化。结果:脑胶质瘤复发患者组织h MLH1表达水平低于初治患者;耐药细胞株h MLH1表达水平低于敏感细胞株,去甲基化干预后耐药细胞株h MLH1表达水平及对替莫唑胺敏感性增加。结论:h MLH1沉默促进脑胶质瘤替莫唑胺耐药,其机制可能与该基因启动子甲基化增强有关。

基于全基因转录组的结核诊断标识研究

早期诊断是结核患者得到及时治疗的关键,目前结核病诊断手段不足,迫切需要更加快速、简便的诊断方法.本研究分析9例治疗前结核患者、6例结核潜伏感染者、6例健康对照的全基因转录组表达谱,并对结核患者治疗前后表达谱进行随访.结果发现,与健康对照和结核潜伏感染者比较,结核患者有77个高表达、50个低表达的差异表达基因,其中有12个差异表达基因表达量经抗结核治疗后下调;差异表达基因GO分析筛选出9个与炎症反应、免疫应答、趋药性相关的生物学功能通路,KEGG pathway分析发现,1个细胞因子和细胞因子受体相关的信号转导通路,各通路均有趋化因子或者细胞因子参与.应用RT-qPCR方法进行临床扩大样本验证,发现大部分基因RT-qPCR验证结果与基因芯片结果趋势一致,其中HBB等8个基因一致性最好;绘制ROC曲线评价HBB和TNFRSF10C两个基因诊断结核病的效能,AUC均在0.9以上,敏感性和特异性均在95%以上;本研究发现的差异表达基因为结核病研究提供了新的生物学标识,为结核病诊断方法的建立、疗效的监测、发病机制的揭示提供了新依据.