丹参多化学成分的UPLC-LTQ Orbitrap MS快速表征解析

目的:建立超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UHPLC-LTQ Orbitrap MS)技术快速鉴别分析中药丹参中的化学成分。方法:采用电喷雾(ESI)正、负离子电离模式对中药丹参化学成分进行数据采集,根据高分辨数据及二级质谱信息对丹参化学成分进行快速鉴定。结果:归纳总结了丹参酮IIA、丹酚酸B等标准品的特征碎片及质谱裂解规律,并根据高分辨数据及二级质谱信息对丹参化学成分进行快速鉴定,在丹参提取物中共鉴定出70种化合物,包括二萜类、酚酸类、醌类等。结论:该方法可快速对丹参中的化学成分进行定性分析,能够为丹参质量控制及药效学研究提供技术支持,同时也为复杂中药成分的全面表征提供一定借鉴。

桑叶对2型糖尿病大鼠肝脏Toll样受体及其下游信号元件基因表达的影响

目的:观察桑叶降糖作用,分析桑叶对2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏Toll样受体及其下游信号元件基因表达的影响,初步探讨其降糖机制。方法:选取SPF级雄性Wistar大鼠46只,高脂饲料饲喂8周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ),以制备T2DM模型。根据血糖值将模型大鼠随机分成模型组、阳性药二甲双胍(0. 2 g/kg)组和桑叶高、低剂量(3 g/kg,1 g/kg)组,每组12只,另取10只大鼠为正常对照组。灌胃给药,持续12周,每周测其空腹血糖,并于第11周时进行OGTT和ITT实验。以上实验结束后免疫吸附试验(ELISA)试剂盒测定血清中胰岛素、IL-6、肿瘤坏死因子-(TNF-)和C反应蛋白(CRP)水平,实时PCR法测定大鼠肝脏TLRs及MyD88、TRAF-6、核因子-B mRNA水平。结果:大鼠给药桑叶后,血糖值降低,饮水量明显减少,差异有统计学意义(P <0. 05),糖耐量得到显著改善,血清中IL-6、CRP水平明显降低,差异有统计学意义(P <0. 05),TLR7、TLR8、TLR9以及其下游信号元件TRAF-6、MyD88、核因子-B mRNA相对表达均较模型组明显降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:桑叶降糖可能与其抑制肝脏组织TLRs及其下游信号表达,降低炎性反应有关。

小儿珠珀散治疗感冒药效学的动物实验研究

目的:探讨小儿珠珀散治疗感冒的药物效应,为临床应用提供参考。方法:针对感冒过程中儿童可能出现的发热、咳嗽、痰多、消化不良等症状,分别利用脂多糖(LPS)致热家兔,氨水诱发小鼠咳嗽,酚红排泌法、半固体营养糊小鼠肠推进实验探讨小儿珠珀散对症治疗的作用。结果:小儿珠珀散可降低小鼠耳肿胀程度、家兔体温上升幅度;延长小鼠咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,减少小鼠气管酚红排出量;促进小鼠胃排空,增加小鼠小肠推进率(P均<0.05)。结论:小儿珠珀散可缓解感冒过程中的多种症状。

北京市13家医院门诊2016年至2020年理血类中药注射剂使用现状

目的了解2016年至2020年北京市13家二级以上医院门诊理血类注射剂的使用现状,旨在探讨我国中药注射剂治疗的发展趋势,以及关于中药注射剂政策的执行情况,同时为临床合理用药提供参考。方法抽取北京市二级以上医院门诊2016年至2020年间使用的,属于医保范围内的13种理血类中药注射剂,统计年度用量排名前6位的品种,运用Access系统分析每年理血类中药注射剂的实际使用情况,对限定日剂量(DDD)、用药频度(DDDS)、限定日费用(DDC)、年增长(降低)率及中药注射剂使用注意事项等进行分析评价。结果醒脑静注射剂、丹红注射剂、疏血通注射剂、苦碟子注射剂、灯盏细辛注射剂和血栓通注射剂是年度用量排名前6位的品种,上述中药注射剂的使用数量、使用金额、用药频度、限定日费用均下降,药品销售与患者使用同步性趋于稳定。结论醒脑静注射剂、丹红注射剂、疏血通注射剂、苦碟子注射剂、灯盏细辛注射剂和血栓通注射剂等主要中药注射剂的使用量都是逐年大幅递减,临床医生开具处方不合理情况亦逐年降低,符合国家药品监督管理局严格限制使用中药注射剂使用的政策。

RS3型芭蕉芋抗性淀粉的减肥降脂作用及急性毒性分析

目的:评价芭蕉芋RS3型抗性淀粉对肥胖型高脂血症小鼠的减肥降脂作用,并进行安全性评价。方法:KKAy小鼠高脂饲料喂养20周,建立肥胖型高脂血症模型,随机分为模型组,辛伐他汀组(4mg·kg^-1),RS3抗性淀粉高、低剂量组(2,1g·kg^-1),并以维持饲料喂养的小鼠为正常组。给药组分别灌胃相应药物,正常组及模型组给予等量去离子水。8周后,处死小鼠,检测血清中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转氨酶(ALT)的含量,精密称量脂肪质量,计算脂/体比、体脂率及Lee's指数,伊红-苏木素(HE)染色观察肝脏及脂肪组织的病理学变化;采用限量法评价RS3抗性淀粉的安全性,连续观察14d,记录小鼠毒副反应情况。结果:RS3抗性淀粉高剂量能显著降低小鼠体质量、脂肪质量、体脂率、脂/体比、Lee's指数,以及血清中TC,TG,LDL-C,AST,ALT水平(P<0.05)。组织形态学检测显示,给予RS3抗性淀粉可以明显改善肝脏组织的脂肪病变情况,保肝作用明显,可以抑制脂肪细胞膨大,降低小鼠脂肪累积,以高剂量为优;急毒实验小鼠按36g·kg^-1剂量给药后,动物未出现中毒反应及死亡。结论:RS3型芭蕉芋抗性淀粉具有良好的减肥降脂作用,且以高剂量组为佳,最大给药量证明无毒副作用,临床常用剂量安全可靠。

桑叶改善3T3-L1细胞胰岛素抵抗的作用及其机制分析

目的:观察桑叶含药血清对脂肪细胞株3T3-L1胰岛素抵抗(IR)模型葡萄糖消耗量及细胞活力的影响,筛选出桑叶含药血清的最佳浓度,并检测其对炎症因子含量的影响,探讨可能的作用机制。方法:取对数生长期3T3-L1前脂肪细胞,10mg·L^-1胰岛素(Ins),0.25mmol·L^-1地塞米松(DEX),0.5mmol·L^-13-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导48h后,10mg·L^-1 Ins再次诱导48h,待其分化为成熟脂肪细胞后,1μmol·L^-1DEX诱导96h以建立IR细胞模型。桑叶水提物含药血清培养12,24,36,72h后,采用葡萄糖氧化酶法检测桑叶含药血清培养后细胞葡萄糖的消耗量,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测桑叶含药血清培养后IR模型的细胞活力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测桑叶含药血清对细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定桑叶含药血清对胰岛素信号通路胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物(IRS),磷酸化IRS1(p-IRS1),葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达的影响。结果:桑叶含药血清可显著提高IR细胞葡萄糖消耗量(P<0.01),增强细胞活力(P<0.01),降低炎症因子TNF-α的含量(P<0.01),调节胰岛素信号通路下游蛋白的表达量(P<0.05,P<0.01)。结论:桑叶可明显改善3T3-L1细胞IR状态,其作用机制可能与抑制TNF-α表达、促进胰岛素信号通路蛋白的表达有关。

2017—2020年我国9城市121家医院安神类中成药使用分析

目的 分析2017—2020年我国9城市121家医院门诊安神类中成药使用情况及发展趋势,为临床应用与管理提供依据。方法 各医院按季度随机抽取门诊中成药处方(共40个工作日),根据国家医保目录选择安神类中成药,整理处方信息,对患者年龄、性别以及9城市安神类中成药使用情况、用药频度(DDDs)、日均费用(DDC)、排序比(B/A)等进行统计分析。结果 2017—2020年间安神类中成药使用频数及用药金额占比呈逐年递增趋势;安神类中成药患者年龄集中在40-79岁,占比超60%,男女比例为3∶5;9城市用药金额占比及患者次均金额多数为呈升高状态;乌灵胶囊在4年期间用药金额及DDDs始终处于第1位;百乐眠胶囊用药金额位居第2,但用药金额及DDDs呈下滑趋势,DDC值逐渐升高;用药频度前10药品中,多数安神类中成药排序比接近于1。结论 安神类中成药门诊整体使用情况呈逐年增长趋势,临床使用较为合理,对部分药品仍需加强管理与监督。

基于高分辨液质联用技术的不同产地鲜丹参药材品质分析

目的分析不同产地新鲜丹参中主要活性成分含量,合理评价鲜丹参药材品质。方法采用LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱仪测定全国7个不同产地新鲜丹参中5个丹酚酸类和12个丹参酮类成分。在此基础上,进行主成分分析(PCA)和最小二乘法分析(PLS)。结果同一产地新鲜丹参主要活性成分的含量基本一致,不同产地新鲜丹参主要活性成分的含量差异显著;其中,湖北产区丹参的丹酚酸类成分含量最高,四川和河南产区丹参的丹参酮I和丹参酮IIA成分含量最高;PCA和PLS分析显示,大部分活性成分的含量分布具有明显的产地特异性。结论不同产地新鲜丹参质量差异显著并具有较显著的产地特异性,以新鲜丹参药材作为品质评价材料,是现今基于干药材为品质评价原料研究方法的有益补充,为更全面综合的评价丹参及其他中药材探索了新的研究途径。

丹参KSL基因多态性对其编码酶催化反应的影响

目的分析全国不同产区丹参KSL基因的变异类型,初步探究丹参KSL基因多态性对其编码酶催化效率的影响。方法设计特异性引物,同源克隆河南、山东、四川、湖北、山西、内蒙古、河北产区丹参KSL基因全长,比较变异类型,选取突变样品构建原核表达体系,进行体外诱导表达;通过气相色谱-质谱(GS-MS)技术检测该基因酶催化产物,进一步分析丹参KSL基因多态性对蛋白酶催化效率的影响。结果丹参KSL基因全长1 788 bp,共编码595个氨基酸,不同产区的丹参KSL基因存在基因多态性,并能够引起同义和非同义突变。丹参KSL不同基因型中催化效率明显不同,山西产区的催化效率最高,内蒙古产区的催化效率最低。其中,产自山西、湖北、山东、四川的丹参均包含1 047 bp处A型变异,其催化效率明显高于不包含A型变异的河南、河北、内蒙古3个产区的丹参的催化效率。结论不同产区丹参KSL基因存在多态性,由基因多态性引起的非同义突变进一步导致氨基酸序列的变化,最终使编码酶的催化效率产生差异。以丹参酮类成分合成途径中关键酶基因的多态性作为切入点,为丹参酮类成分积累机制的揭示及丹参优良种质的选育提供进一步的参考。

基于LC-MS的代谢组学技术分析孜亚比提片的降糖作用机制

目的:观察孜亚比提片对2型糖尿病大鼠的降糖效果,并基于代谢组学技术分析其降糖作用机制。方法:根据临床调研结果对不同组分来源的孜亚比提片进行筛选,筛选出最佳组方配比;并以2型糖尿病大鼠为实验对象进行药效学实验研究,正常组和模型组分别给予相同剂量的生理盐水、孜亚比提片组给予300 mg·kg-1孜亚比提片、二甲双胍组给予300 mg·kg-1盐酸二甲双胍片,每组8只,记录给药后实验组的空腹血糖值及体质量变化并进行数据分析;同时利用超高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱组合式高分辨质谱联用(UHPLC-LTQ Orbitrap MS)技术对大鼠血清进行代谢组学分析,采用主成分分析(PCA),偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对不同组别大鼠血清代谢物进行分析,鉴定出潜在生物标记物,并分析维吾尔族药孜亚比提片的降糖作用机制。结果:与正常组比较,模型组大鼠的空腹血糖值升高(P <0. 01);与模型组比较,孜亚比提片组大鼠状态整体较好,毛色光滑,其空腹血糖值也有所下降(P <0. 05),表明孜亚比提片对2型糖尿病大鼠有一定的降糖作用;根据LC-MS代谢组学数据结果最终得到8个生物标记物。与模型组相比孜亚比提片组中L-valine,propionylcarnitine含量均降低(P <0. 05),sphingosine-1-phosphate,LPC(16∶1/0∶0),LPC(18∶0/0∶0),LPC(18∶2/0∶0),LPC(20∶1/0∶0),PC(19∶0/0∶0)的含量均升高(P <0. 05)。结论:孜亚比提片能够降低2型糖尿病大鼠血糖值,并能改善2型糖尿病大鼠的一般生理特征,其作用机制可能与改善氨基酸代谢,脂质代谢有关。