脂肪干细胞来源外泌体通过miR-21a-5p/PTEN途径促进牙周膜干细胞成骨分化

目的 研究脂肪干细胞(ADSCs)来源外泌体通过miR-21a-5p/第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)途径促进牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的效应。方法 培养ADSCs、分离外泌体并用磷酸盐缓冲液溶解备用。培养PDLSCs、进行成骨诱导分化并分组,外泌体组加入15μg/ml外泌体、对照组加入等体积磷酸盐缓冲液,NC组加入等体积磷酸盐缓冲液并转染NC序列,NC+外泌体组加入15μg/ml外泌体并转染NC序列,miR-21-5p敲低+外泌体组加入15μg/ml外泌体并转染miR-21-5p抑制物;诱导后21 d时进行茜素红染色并检测A540水平,诱导后7 d时检测miR-21a-5p、PTEN、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)的表达水平。培养PDLSCs并分为转染NC序列的NC组、转染miR-21a-5p模拟物的miR-21a-5p组,采用双荧光素酶报告基因验证miR-21a-5p靶向PTEN。结果 外泌体组PDLSCs的A540水平及miR-21a-5p、ALP、OCN、CoL-Ⅰ的表达水平均高于对照组,PTEN的表达水平低于对照组(P<0.05);miR-21a-5p组PDLSCs中PTEN的表达水平及野生型双荧光素酶报告基因的荧光值均低于NC组(P<0.05);miR-21-5p敲低+外泌体组PDLSCs的A540水平及miR-21a-5p、ALP、OCN、CoL-Ⅰ的表达水平均低于NC+外泌体组,PTEN的表达水平高于NC+外泌体组(P<0.05)。结论 ADSCs来源外泌体通过调控miR-21a-5p/PTEN途径促进PDLSCs成骨分化。

CGRP样阳性终末在脊神经结扎模型大鼠脊髓背角浅层内的表达变化

目的:观察降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)样阳性终末在L5脊神经结扎模型大鼠脊髓背角浅层内的表达变化。方法:建立大鼠L5脊神经结扎模型(L5 spinal nerve ligation model,SNL),建模后分别在1、3、5、7 d和14 d不同时间点通过von Frey丝检测大鼠后爪的机械性痛敏,然后在大鼠分别存活7 d和14 d时灌注取材,采用免疫组织化学染色结合平均光密度(optical density,OD)分析的方法以及免疫电镜标记技术检测脊髓背角浅层内CGRP样阳性物质的表达变化。结果:(1)行为学结果显示:模型组大鼠的机械性痛敏的阈值明显降低,与正常组比较有显著性差异(p<0.05),提示建模成功;(2)免疫组织化学染色显示:正常大鼠脊髓背角浅层内存在大量密集分布的CGRP样阳性终末,主要分布于脊髓背角的I层和II层。SNL模型大鼠在结扎7 d和14 d后脊髓背角浅层内CGRP样阳性产物的表达明显增多,其平均OD值分别为38.30±3.11和35.70±2.36,与正常对照组(25.10±2.30)比较,具有显著性差异(P<0.05);(3)电镜结果显示:CGRP样免疫活性物质只分布于轴突终末内,且主要与树突结构形成非对称性突触。结论:CGRP样免疫阳性物质在SNL模型大鼠脊髓背角浅层内的表达增加,提示CGRP样阳性终末在伤害性信息的传递中具有重要作用。

电刺激对大鼠缺血性脑卒中的保护作用

目的探讨皮层电刺激对大鼠永久性缺血性脑卒中的保护作用。方法雄性SD大鼠随机分成对照组和实验组。实验组根据刺激频率不同分成2Hz组,20Hz组,100Hz组,100/2Hz组。建立永久性梗塞模型。梗塞3 h后,电极植入右侧大脑缺血区皮层进行刺激。分别在梗塞5 h和24 h进行行为学评分。在梗塞24 h行2%氯化三苯基四氮唑溶液染色测量脑梗死比。于刺激结束1 h后取脑组织Western blot分析脑源性神经营养因子(BDNF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达量的变化。结果 2Hz电刺激组在梗死比的减少及行为学评分的改善方面最显著(均P<0.05)。VEGF的表达量下降,而BDNF表达水平较其他各组无显著性差异。结论对于脑缺血溶栓未通患者,皮层电刺激对脑缺血可能有保护作用。

骨髓间充质干细胞外泌体调控STAT3通路促进牙周膜干细胞成骨分化

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体调控信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路促进牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的作用及机制。方法:原代培养BMMSCs和PDLSCs,取第3代BMMSCs细胞分离外泌体,取第3代PDLSCs细胞进行成骨诱导并分组,外泌体组加入15μg/mL重悬于磷酸盐缓冲液(PBS)的外泌体,PBS组加入等体积PBS,拮抗剂组加入15μg/mL外泌体和50μmol/L以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂的STAT3拮抗剂AG490,外泌体+DMSO组加入15μg/mL外泌体和等体积DMSO,DMSO组加入等体积PBS及DMSO。诱导7 d后,Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、磷酸化酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达;诱导21 d后进行茜素红染色,检测光密度(OD)值。结果:PDLSCs中ALP、OCN、Col-Ⅰ、p-JAK2及p-STAT3的表达和茜素红染色OD值,外泌体组高于PBS组,拮抗剂组低于外泌体+DMSO组(P<0.05)。结论:BMMSCs外泌体通过激活JAK2/STAT3通路促进PDLSCs成骨分化。

细胞外囊泡的生物学功能及其临床应用

细胞外囊泡是由细胞分泌的不同大小的被膜囊泡,因其内容物包含有各种生理病理信号分子且可以稳定地在循环系统中停留,在临床上常被应用为疾病诊断和预后恢复的检测指标及有益的治疗方式。目前,EVs在多种疾病的诊疗、免疫微环境调控及组织再生中均得到了不同程度地应用。因此,通过进一步认知和研究EVs的生物学功能,有望为疾病的诊断和治疗提供新策略。

黄芩小分子化合物对雌激素缺乏骨质疏松的预防和治疗作用

目的:探讨黄芩中提取的小分子化合物对大鼠去势后骨质疏松的预防和治疗作用。方法:选取雌性SD大鼠建立去势骨质疏松模型,从黄芩中提取小分子化合物,对其腹腔注射。预防组从建模1周开始给药,治疗组从建模2月开始给药,分别在给药后第6、12周未Micro CT扫描一侧股骨,比较骨体积和骨小梁数目差异;同时培养各组大鼠骨髓间充质干细胞,检测其对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响。结果:Micro CT显示,预防组和治疗组动物的骨体积和骨小梁数目相比对照组均有所增加;而MTT生长曲线和细胞克隆形成显示药物可以促进培养的骨髓间充质干细胞的增殖;ALP染色和茜素红染色显示药物对骨髓间充质干细胞的成骨分化也有促进作用。结论:黄芩中小分子化合物可以在一定程度上预防和治疗雌激素缺乏所致的骨质疏松,并促进骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。

供体MSCs来源的外泌体转运miR-26a恢复宿主MSCs功能并缓解骨质疏松

目的:探讨移植的供体间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)通过分泌外泌体缓解雌激素缺乏导致的骨质疏松的机制。方法:建立12只小鼠雌激素缺乏骨质疏松模型,通过siRNA调控MSCs外泌体释放及直接注射外泌体,明确外泌体的分泌在MSCs治疗骨质疏松中的作用;通过体外成骨分化诱导、茜素红染色、qPCR明确供体MSCs来源的外泌体对宿主MSCs功能的影响;通过miR-26a模拟物、抑制物转染、qPCR明确外泌体发挥治疗作用的机制。结果:供体MSCs通过分泌外泌体缓解雌激素缺乏骨质疏松,并证明外泌体通过恢复骨质疏松宿主MSCs成骨分化功能缓解骨质疏松,外泌体可通过转运miR-26a恢复骨质疏松宿主MSCs的成骨分化功能。结论:供体MSCs来源的外泌体可通过转运miR-26a恢复宿主MSCs功能并缓解骨质疏松。

西安地区军队离退休干部口腔疾病现况调查与发展对策

了解驻西安地区军队干休所离退休干部口腔健康状况,为提出离退休干部口腔疾病防治对策提供依据。方法:采用年度健康体检方式,对参加2021年度健康体检的驻西安地区9个军队干休所的离退休干部进行整群调查,以WHO(2007)口腔健康检查标准为依据,调查龋齿、牙周炎、牙结石、牙列缺损及口腔粘膜病等状况。结果:获取196名驻西安军队干休所离退休干部口腔健康现况,其中患龋率为76.53%、牙周炎的检出率为80.61%、牙结石检出率为76.02%、牙列缺损检出率为89.28%、口腔黏膜病发病率为4.59%。结论:驻西安地区军队干休所离退休干部口腔病病率较高,需要重视口腔保健工作、加强口腔健康教育、修复口腔健康基本功能、提高驻军医院老年口腔医疗水平。

NDRG2通过调控CD24影响肝癌细胞侵袭能力的研究

目的:阐明NDRG2(N-Myc downstream-regulated gene 2)在肝癌细胞中对CD24的调控及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:Western blot检测低转移性的肝癌细胞Huh7、高转移性的肝癌细胞系MHCC97h及正常人肝细胞系L-02中NDRG2和CD24的表达;通过腺病毒载体上调MHCC97h细胞中NDRG2的水平,或利用siRNA下调Huh7细胞中NDRG2的表达,检测CD24的变化以及细胞侵袭能力的改变。结果:MHCC97h细胞中NDRG2基因和蛋白的表达水平低于Huh7细胞,而CD24的表达水平高于Huh7细胞;在MHCC97h细胞中上调NDRG2可以抑制CD24的表达并抑制其侵袭能力,而在Huh7细胞中下调NDRG2的表达可以提高CD24的水平及细胞的侵袭能力。结论:NDRG2可能通过影响CD24参与调控肝癌细胞的侵袭能力。

虚拟仿真复合模拟备洞在口腔医学专业学生手灵活性训练中的应用探索

目的探索Simodont虚拟仿真系统和进阶性仿真备牙教具模拟备洞实践训练在口腔医学专业学生手灵活性训练中的应用效果。方法2021年9月至2022年9月,选取空军军医大学2020级五年制口腔医学专业44名学生为研究对象,通过虚拟仿真系统和仿真备牙教具2种仿真实践训练提升其手灵活性。2种仿真实践训练分别进行2次操作,记录每次操作评分;统计学生训练前后的奥康纳镊子灵活性测试用时。采用配对t检验比较2次操作评分及灵活性测试的前后差异。采用问卷调查了解学生对训练的主观感受。结果学生虚拟仿真系统2次操作评分分别为(8.27±2.84)分和(8.89±2.90)分,仿真备牙教具评分分别为(8.29±2.45)分和(8.96±2.48)分,差异均有统计学意义(均P<0.05)。学生训练前后奥康纳镊子灵活性测试用时分别为(316.80±40.64)秒和(295.08±39.27)秒,差异具有统计学意义(P<0.05)。问卷调查结果显示,所有学生均认为2种仿真实践训练方法都具有较好的操作灵敏度,且2种方法各有侧重,可以实现优势互补。结论采用2种仿真实践训练方法进行教学,有助于提升五年制口腔医学专业学生的手灵活性,并获得了良好的满意度,为临床前训练学生手部技能提供了参考和借鉴。

肿瘤坏死因子α对喉黏膜间充质干细胞免疫调节能力的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)对喉黏膜间充质干细胞(laryngeal mucosa mesenchymal stromal cell,LM-MSC)免疫调节能力的影响及其潜在的分子机制。方法2017年4月至2018年3月,取喉癌全切手术患者组织标本中的正常喉黏膜组织,通过酶消化法分离培养LM-MSC。通过LM-MSC细胞与T细胞体外直接共培养模型,检测LM-MSC的免疫调节能力。通过炎症因子TNF-α长期刺激在体外模拟慢性炎症模型,比较正常与慢性刺激后的LM-MSC免疫调节能力的差异。通过Western blot和实时定量反转录PCR(RT-qPCR)等方法检测正常与TNF-α慢性刺激后的LM-MSC表观遗传基因组蛋白乙酰基转移酶复合体(general control non-repressed protein5,GCN5)的表达差异。采用SPSS 17.0统计学软件对数据进行统计分析。结果在炎症因子TNF-α慢性作用下,与对照组(设为1)相比,GCN5的RNA相对表达量为0.31±0.03(3 d)和0.53±0.06(7 d),差异有统计学意义(F=13.45,P<0.05),LM-MSC诱导T细胞凋亡率低于对照组,差异有统计学意义[6.27%±0.81%(3 d)和4.99%±0.52%(7 d)比10.02%±1.02%,F=11.13,P<0.05]。并且LM-MSC诱导T细胞凋亡的能力受到GCN5的调节。在TNF-α的慢性炎症刺激后,FAS/FASL与GCN5表达水平一致,并且随着GCN5的变化而变化。结论TNF-α慢性刺激后,LM-MSC中GCN5的表达降低,从而使得其免疫调节能力受损。