UPLC-LTQ-Orbitrap XL分析知母-黄柏药对化学成分

目的:分析知母-黄柏药对的化学成分。方法:采用超高效液相-线性离子阱-轨道阱质谱联用仪(UPLCLTQ-Orbitrap XL),在正、负两种离子模式下,利用质谱的高分辨率以及成分的二级碎片信息,鉴别药对中的成分。结果:共鉴别了55个化学成分,其中从知母中鉴别了18个化学成分,黄柏中鉴别了37个化学成分,3个化学成分为首次在该药对中报道。结论:UPLC-LTQ-Orbitrap XL能快速、精确的对知母-黄柏药对的化学成分定性分析,为知母-黄柏药对药效物质基础研究提供依据。

LC-MS/MS同时测定配伍知母对黄柏中5种成分含量的影响

目的:建立LC-MS/MS法同时测定黄柏中巴马汀、药根碱、黄柏碱、木兰花碱和小檗碱的含量,研究配伍知母对黄柏中5种成分含量的影响。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(65∶35),流速0.25 mL/min,柱温30℃;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,正离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定。结果:巴马汀、药根碱、黄柏碱、木兰花碱和小檗碱分别在3.42~91.2 ng/mL、3.15~84.0 ng/mL、3.45~92.0 ng/mL、2.97~79.2 ng/mL、179.0~1 253.0 ng/mL浓度范围内线性关系良好(r≥0.9994);平均加样回收率均在99.5%~102.0%。黄柏配伍知母后,除药根碱外其他4种成分含量均有变化。结论:该方法快速、准确、重复性好,可用于黄柏中5种成分的含量测定;配伍知母对黄柏中巴马汀、木兰花碱、黄柏碱和小檗碱的含量有影响。

炮天雄多糖硫酸酯衍生物的制备及生物活性研究

目的制备岭南炮天雄多糖(PTXP)硫酸酯化衍生物,评价其抗氧化、免疫调节和抗肿瘤活性。方法使用三氧化硫-吡啶法制备炮天雄多糖硫酸酯衍生物,用红外光谱测定炮天雄多糖硫酸酯衍生物的结构,用氯化钡-明胶比浊法测定硫酸基的取代度(DS),通过体外抗氧化实验检测炮天雄多糖硫酸酯衍生物的抗氧化能力,用CCK-8法检测炮天雄多糖硫酸酯衍生物对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,以HepG2肝癌细胞增殖实验探究炮天雄多糖硫酸酯衍生物的抗肿瘤活性。结果炮天雄多糖的硫酸基取代度随着三氧化硫吡啶复合物用量增加而增加。红外光谱检测发现1220 cm^(-1)与810 cm^(-1)附近分别出现S=O与C-O-S的吸收峰,说明炮天雄多糖分子上已经成功引入硫酸基团。体外抗氧化实验结果说明炮天雄多糖的硫酸酯衍生物有清除DPPH和ABTS自由基能力(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验结果说明炮天雄多糖硫酸酯衍生物的炮天雄多糖-S2(PTXP-S2)能促进小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。抗肿瘤细胞增殖实验则说明PTXP-S2有一定的抗肿瘤活性(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论炮天雄多糖经硫酸酯化修饰后有一定的抗氧化与免疫调节活性,但抗肿瘤活性不明显。

传统中药炮天雄的研究进展

通过查阅炮天雄的相关文献,从炮制工艺、质量标准和药理作用3个方面综述了炮天雄的研究进展。发现炮天雄尚存有两种炮制方法,分别被岭南和四川地区沿用,已有学者建立了相关的质量标准。认为炮天雄安全无毒,其主要成分为生物碱类,具有温肾助阳、调节免疫、强心等功效。虽然炮天雄现在已经少用,但是其仍具有巨大的药用潜力。

响应面法优化土茯苓多糖除蛋白工艺

为了优化土茯苓(Smilax glabra Roxb.)多糖溶液除蛋白的工艺,采用Sevage试剂法除蛋白,在单因素实验的基础上,以多糖保留率和蛋白清除率为指标,使用响应面法对Sevage试剂法除蛋白工艺进行优化。结果显示,Sevage试剂法去除土茯苓多糖的最佳工艺为采用Sevage试剂:供试液=1:3、振摇强度8挡、振摇时间10 min、除蛋白次数5次,蛋白清除率为97.39%,多糖保留率为74.13%。优化后的除蛋白工艺重复性好,与理论值误差较小,可用于土茯苓多糖除蛋白。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中京尼平苷的浓度

目的建立大鼠血浆中京尼平苷液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的快速检测方法。方法以芍药苷为内标,血浆样品用甲醇沉淀蛋白法处理,色谱柱为AgilentZORBAXEclipseplus-C18柱（2.1mm×150mm,3.5μm）;流动相为甲醇-5mmol·L^-1乙酸铵（含5mmol·L^-1乙酸）（60∶40）;采用电喷雾离子化（ESI）和正离子多反应离子监测（MRM）方式检测京尼平苷。结果京尼平苷在64.5-12900ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,定量下限为64.5ng·mL-1,日内精密度（相对标准偏差,RSD）〈5.2%,日间精密度（RSD）〈11.5%,准确度在98.8%-106.2%之间。结论本研究所建立的LC-MS/MS方法快速、准确、稳定,适用于京尼平苷在大鼠体内的血药浓度测定及药动学研究。

药对知母-黄柏对胰岛素抵抗的改善作用

目的 研究药对知母-黄柏(ZB)对胰岛素抵抗(IR)的改善作用。方法采用高脂高糖饲料联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。随机分为正常组、模型组、二甲双胍组、知柏高、低剂量组(ZB 4.5、1.5 g·kg -1 ),连续灌胃给药4周。检测体质量、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素水平(FINS)及甘油三脂含量(TG),计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(Homa-IR)。另以棕榈酸和油酸联合诱导HepG2细胞产生IR。分为正常组、模型组、二甲双胍组、知柏高、中、低剂量组(ZB384、192、96 mg·L^-1 ),各组给药24 h后检测糖耗量及TG含量。结果药对知母-黄柏能明显降低糖尿病大鼠的FBG、FINS、TG含量( P <0.05)及Homa-IR( P <0.01),提高ISI( P <0.05),并能明显降低HepG2-IR细胞的TG含量( P <0.05),提升糖耗量( P <0.05)。结论药对知母-黄柏能提升胰岛素敏感性,促进糖脂代谢,对胰岛素抵抗具有改善作用。

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中士的宁及其代谢物

目的建立LC-MS/MS法同时测定士的宁及其代谢物士的宁氮氧化物在大鼠血浆中的浓度。方法以盐酸麻黄碱为内标,甲醇沉淀法处理血浆样品。采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm)分离,以甲醇-10 mmol·L-1乙酸铵(用甲酸调p H=4)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 m L·min-1,用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测士的宁和士的宁氮氧化物。结果士的宁及其氮氧化物的线性范围分别为0.510~306.3 ng·m L-1和0.102~306.0 ng·m L-1,定量下限分别为0.510,0.102 ng·m L-1,日内、日间相对标准偏差(RSD)均<15%,准确度分别为(89.44±3.43)%^(97.45±6.25)%和(95.86±5.19)%^(106.41±7.43)%。结论该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于血浆中士的宁及其代谢物士的宁氮氧化物含量的同时测定。

LC-MS-MS测定配伍黄柏对知母中4种有效成分含量的影响

目的:建立高效液相色谱串联质谱法(LC-MS-MS)测定知母黄柏药对中芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ的含量,研究不同配伍比例对4种成分含量的影响。方法:采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm),柱温30℃,流动相0.1%甲酸水-乙腈,流速0.25 m L·min^(-1),梯度洗脱;质谱条件为电喷雾(ESI)离子源,负离子多反应离子监测(MRM)用于定量测定。结果:芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ和知母皂苷BⅡ分别在5.05~404,5.3~424,5.05~404,20.8~1 664μg·L^(-1)线性关系良好(r≥0.999);平均回收率分别为100.6%,99.2%,99.1%,98.5%。知母单煎时芒果苷、知母皂苷AⅢ含量最高;新芒果苷在知柏配伍比例1∶1时含量最高;知母皂苷BⅡ的含量各配伍比例没有明显差异。结论:该方法快速、准确,适用于知母黄柏中4种成分的含量测定。知母与黄柏配伍比例不同,芒果苷、新芒果苷、知母皂苷AⅢ的含量不同,配伍黄柏时对知母成分含量有影响。

单向在体肠灌流模型研究P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷肠吸收的影响

目的:研究P糖蛋白(P-gp)和多耐药相关蛋白2(MRP2)对芒果苷肠吸收的影响。方法:采用大鼠单向在体肠灌流模型,以酚红为标示物;UPLC法测定灌流液中芒果苷的含量,计算芒果苷在空肠和回肠段及加入P-gp抑制剂和MRP2抑制剂后的吸收常数(Ka)和表观渗透系数(Peff)。结果:芒果苷(5μg/ml)在回肠和空肠的吸收差异无统计学意义。在回肠段,加入P-gp抑制剂维拉帕米(0.1mmol/L)和环孢霉素A(0.1mmol/L)或MRP2抑制剂吲哚美辛(0.04mmol/L)后,芒果苷吸收的Peff值和Ka值均明显增加;在空肠段,维拉帕米可明显升高芒果苷吸收的Ka值,而其他各组的Peff值和Ka值虽有一定程度的增加,但无显著性差异。结论:P-gp和MRP2抑制剂对芒果苷的肠吸收,特别是回肠吸收,具有明显的促进作用,提示芒果苷为P-gp和MRP2的底物。

京尼平苷在大鼠体内药代动力学性别差异研究

目的:建立大鼠血浆中京尼平苷和京尼平快速液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,考察毒性剂量下,性别差异对京尼平苷在大鼠体内的药代动力学特征的影响。方法:将大鼠分为雌雄两组,分别灌胃给与700 mg/kg的京尼平苷水溶液,收集各时间点的大鼠血浆,采用LC-MS/MS法测定血浆京尼平苷和京尼平浓度,通过DAS 2.1.1软件计算主要药代动力学参数。结果:大鼠灌胃京尼平苷后,体内京尼平苷主要的药代动力学参数为:雄性组AUC(0-t)为(17860±6886)μg·h/L,Cmax为(3059±1499)ng/ml,t1/2为(7.4±3.4)h;雌性组AUC(0-t)为(17197±7576)μg·h/L,Cmax为(3904±1062)ng/ml,t1/2为(5.3±2.9)h。结论:灌胃700mg/kg京尼平苷后,京尼平苷药动学特征不具性别差异,而京尼平的药动学特征可能存在性别差异。