大黄鱼G型溶菌酶对鳗弧菌胁迫的响应研究

溶菌酶作为是鱼体内非特异性免疫因子,在机体起到消化和防御病毒作用。本研究克隆了大黄鱼G型溶菌酶基因ORF长度为582 bp,可编码193个氨基酸,Gen Bank数据库的登陆号为XM-010740410.1,相对分子质量为46.22k Da,理论等电点为5.20,具有三个保守的催化位点Glu71、Asp84和Asp101,四个底物结合位点Leu97,Ile121,Ile128和Gly152,有一个Cys残基,不形成二硫键,无N端信号肽。多序列比对显示,大黄鱼G型溶菌酶氨基酸序列与其他鱼类同源性高达76%以上。进化树发现,大黄鱼G型溶菌酶首先与鲈形目鱼类聚在一起,鱼类G型溶菌酶与鸟类的亲缘关系近。基因结构分析可知,大黄鱼G型溶菌酶基因含有5个外显子和4个内含子。实时荧光定量PCR检测显示,大黄鱼G型溶菌酶8种组织(肝脏、脾脏、肾脏、脑、心、肌肉、鳃、肠)中均有表达,其中在肠中表达水平量最高(16倍),在肾较高(7倍),脾、脑、心与肌肉组织最低。鳗弧菌和poly I:C感染后,大黄鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中G型溶菌酶基因的表达随时间呈先上升后下降趋势,但达到峰值时间点不同。肝脏中鳗弧菌处理下G型溶菌酶在12h达到峰值,poly I:C处理下在24h达到峰值;脾脏中鳗弧菌和poly I:C处理下在36h达到峰值;肾脏中鳗弧菌处理下G型溶菌酶在36h达到峰值,poly I:C处理下在48h达到峰值。说明G型溶菌酶参与了大黄鱼机体免疫过程。

大黄鱼C型溶菌酶对鳗弧菌胁迫的响应研

溶菌酶作为是鱼体内非特异性免疫因子,在机体起到消化和防御病毒作用。本研究克隆了大黄鱼C型溶菌酶基因ORF长度为333bp,可编码110个氨基酸,Gen Bank数据库的登陆号为XM-010753143.1,相对分子质量为27.68k Da,理论等电点为5.24,具有8个半胱氨酸,能形成4对二硫键,有2个保守的催化残基位点Glu17和Asp34。多序列比对显示,大黄鱼C型溶菌酶氨基酸序列与其他鱼类同源性高达71%以上。进化树发现,大黄鱼C型溶菌酶首先与鲈形目鱼类聚在一起,鱼类C型溶菌酶与哺乳动物的亲缘关系近。基因结构分析可知,大黄鱼C型溶菌酶基因含有3个外显子和2个内含子。实时荧光定量PCR检测显示,大黄鱼C型溶菌酶8种组织(肝脏、脾脏、肾脏、脑、心、肌肉、鳃、肠)中均有表达,其中在肝中表达水平量最高(800多倍),脾和肾组织最低。鳗弧菌和poly I:C感染后,大黄鱼肝脏、脾脏和肾脏组织中C型溶菌酶基因的表达变化不大,说明C型溶菌酶在大黄鱼体内主要起到消化作用。