补肾法对老龄大鼠脾脏免疫细胞功能的影响

实验根据中医补肾为延缓衰老的治则 ,探讨并对比补肾阴代表方药六味地黄汤、补肾阳代表方药金匮肾气汤对老龄大鼠免疫细胞功能的影响。以自然衰老大鼠为受试对象 ,长期给药后 ,检测大鼠脾脏免疫细胞功能的变化。结果表明 ,六味地黄汤和金匮肾气汤 ,可以明显改善自然衰老机体状态 ;显著提高ConA诱导的T淋巴细胞的增殖能力和MΦ的吞噬能力 ;对LPS诱导的B淋巴细胞增殖反应 ,六味地黄汤具有明显的促进作用 ,而金匮肾气汤则是明显抑制和降低。提示补肾阴和补肾阳方药可以提高免疫功能 ,延缓衰老 ,但在影响B淋巴细胞功能上存在差异 ,在作用机理上还有待于进一步探讨。

黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺损伤的作用机制研究

目的研究黄芩苷对甲型流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性损伤的作用机制。方法将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100 mg.kg-1),黄芩苷组(1 500、750、375 mg.kg-1)[5],每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,制备小鼠流感病毒性肺炎模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺组织H-E染色切片病理变化,采用RT-PCR测定肺组织c-jun、c-fos mRNA表达,采用Western blot测定肺组织c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达,应用ELISA检测肺匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的含量。结果黄芩苷750、375 mg.kg-1剂量均能明显减轻肺组织炎性损伤;明显降低c-jun、c-fosmRNA的表达(P<0.05,P<0.01),明显降低c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达(P<0.01);明显抑制TNF-α、IL-1β的分泌(P<0.01)。结论黄芩苷能够缓解甲型流感病毒诱导的炎性病理损伤,其可能通过抑制流感病毒感染引起的转录因子AP-1高表达而降低炎性细胞因子的分泌水平,从而发挥抗流感病毒感染的作用。

流感病毒H1N1感染A549细胞诱导凋亡及黄芩苷干预作用的研究

目的研究黄芩苷对流感病毒H1N1感染A549细胞诱导的凋亡干预作用,探讨黄芩苷抗流感病毒感染的作用机制。方法采用基因芯片技术研究流感病毒感染细胞后细胞内凋亡信号通路中相关基因转录的变化。同时,采用荧光定量PCR检测各组细胞中天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-8(caspase-8)和caspase-3的mRNA表达的变化。Western blot法检测各组细胞中的相关蛋白的变化。结果利用基因芯片技术,通过KEGG pathway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Casp3、Casp7、Casp8、Casp10、TRAIL、MYD88、IL1A、和IL1B明显上调;与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组对差异表达基因Casp3、Casp4和Casp8明显下调;黄芩苷高剂量组对差异表达基因Casp3、Casp4、Casp6和Casp8明显下调;黄芩苷低剂量组除上述差异表达基因外,还明显下调了IL1RAP和Cn。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组caspase-3和-8的mRNA表达均明显升高。与H1N1感染组比较,奥司他韦对照组、黄芩苷高低剂量组的caspase-3和-8的mRNA表达均明显降低(P<0.01);并且,黄芩苷低剂量组的治疗效果优于高剂量组;该结果和基因芯片表达的结果基本相符。结论流感病毒体外感染细胞A549后诱导凋亡,黄芩苷能通过调控天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白家族介导凋亡通路的相关基因表达,对病毒感染诱导的细胞凋亡有干预作用,从而发挥抗病毒作用。

黄芩苷体外抗流感病毒作用的研究

[目的]通过观察黄芩苷对甲型流感病毒（H1N1）感染人肺癌细胞株（A549细胞株）的作用,探讨其在体外抗甲型流感病毒的作用。[方法]通过细胞病变效应（CPE）观察黄芩苷对病毒致细胞病变作用的影响,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测药物对人肺癌细胞株A549的最大无毒浓度（TC0）和半数中毒浓度（TC50）。检测药物不同给药方式和作用时间的吸光度,比较各组抗病毒有效率,找出黄芩苷最佳抗病毒作用方式。采用Probit回归计算最佳作用方式时其对病毒感染的半数抑制浓度（IC50）以及治疗指数（TI）。[结果]在7.920～0.495 mg/L范围内的黄芩苷作用24～48 h,对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,细胞存活率明显高于病毒感染组。其中,抗病毒生物合成组（Ⅲ）在给药后48 h,其抗病毒有效率最高,浓度为3.960 mg/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达89.107%。计算该条件下黄芩苷IC50为1.399 mg/L,TI为22.608。[结论]黄芩苷在一定浓度下有抗病毒作用,主要是通过抑制病毒在感染的A459细胞内生物合成而发挥抗病毒作用。

疏风宣肺方和解表清里方干预流感病毒性肺炎小鼠细胞凋亡的研究

目的病毒感染宿主细胞后,细胞凋亡天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(caspase)途径激活限制病毒复制,但甲型流感病毒感染引起的细胞凋亡的分子机制尚不完全清楚。探讨流感病毒性肺炎小鼠肺组织细胞凋亡相关的基因及2种不同抗流感病毒方药的治疗作用。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方高、中、低剂量组,解表清里方高、中、低剂量组。提取各组小鼠肺组织总RNA,采用基因组芯片筛选出与凋亡密切相关的差异表达基因,并用荧光定量PCR对天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白基因进行验证。结果肺炎模型组肺组织中差异表达基因casp-3、casp-8、casp-9、Fas、FasL、TNF、TNFrasf1a、Tradd、IL1a、IL1b、IL1r1、IL1r2、casp-7明显上调,与空白组比较差异有统计学意义。疏风宣肺方中剂量组差异表达基因casp-8、casp-7、Fas、FasL、TNF、TNFrasf1a、Tradd、IL1a、IL1b、IL1r1、IL1r2明显下调。疏风宣肺方低剂量组下调上述基因的作用强于解表清里方低剂量组,疏风宣肺方中剂量组治疗效果优于解表清里方中剂量组。疏风宣肺方低剂量组与解表清里方中剂量组对casp-3、-8、-9表达有显著抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。不同剂量疏风宣肺方的治疗效果与解表清里方比较如下:疏风宣肺方低剂量组>疏风宣肺方中剂量组>解表清里方中剂量组>解表清里方低剂量组。结论疏风宣肺方对细胞凋亡调控基因的调控作用强于解表清里方,上调casp-3、-8、-9表达,对抗流感病毒感染后的细胞凋亡较强,对甲型流感病毒性肺炎小鼠治疗作用优于解表清里方。

疏风宣肺、解表清里方药对流感病毒性肺炎小鼠辅助性T细胞1／2平衡调节的研究

目的观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒性肺炎小鼠肺组织CD4＋辅助性T细胞1／2（Thl／2）平衡的调控作用。方法选择SPF级雄性ICR小鼠108只，按随机数字表法分为对照组、模型组、达菲组以及疏风宣肺方高、中、低剂量组和解表清里方高、中、低剂量组9组，每组12只。采用流感病毒亚甲型鼠肺适应株（FMl）滴鼻感染小鼠建立流感病毒性肺炎模型，对照组以0．05ml生理盐水滴鼻。于病毒感染后2h，对照组、模型组灌胃蒸馏水；达菲组给予达菲2．5g·ml-1·d-1；其余6组分别灌服疏风宣肺抗流感方药（主要药物金银花、连翘、牛蒡子、蝉蜕、荆芥等）高、中、低剂量（3．762、1．881、0．941g·kg-1·d-1）和解表清里抗流感方药（主要药物炙麻黄、生石膏、黄芩、杏仁、生甘草等）高、中、低剂量（4．368、2．184、1．092g·kg-1·d-1）；均每日1次，每次0．2ml，连用4d。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（Westernblotting）分别测定肺组织1-干扰素（IFN-1）、白细胞介素-4（IL-4）mRNA以及蛋白表达水平。结果与对照组比较，模型组IFN-叮mRNA及蛋白表达均明显降低，IL-4mRNA及蛋白表达均明显升高（均P〈0．05）。与模型组比较，各药物组IFN-1mRNA及蛋白表达均升高，以疏风宣肺方低剂量组和解表清里方中剂量组升高更显著（IFN-1mRNA：0．85±0．14、0．58±0．06比0．15±0．48，均P〈0．01）；IL-4mRNA及蛋白表达均有所降低，以疏风宣肺方中剂量组降低更显著（IL-4mRNA：1．06±0．19比2．89±0．75，P〈O．05）。结论疏风宣肺方通过升高IFN-1水平、降低IL-4水平，纠正Thl／2的平衡，减轻肺组织免疫病理损伤，以中低剂量组为优。

流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用

目的研究流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方大、中、小剂量组(SL、SM和SS),解表清里方大、中、小剂量组(JL、JM和JS)。提取总RNA,采用基因芯片Pathway分析,挑选参与调控炎症相关通路中的靶基因。同时,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对IL-1β、IL-8、IL-10、CCL5(RANTES)、ICAM-1的mRNA表达水平进行验证。采用Western blot法对肺组织IL-1β的表达进行验证。结果模型组差异表达基因IL-1β、CXCR2、CCL5、IL-10、IL-6、IL-18、TGF-β1、CCL2明显上调,较正常组差异显著。各剂量治疗组对IL-1β、CXCR2、IL-10、IL-6表达有显著的下调作用,SM及SS组下调IL-18、TGF-β1、CCL2、CCL5基因的表达,JM及JL组下调差异表达基因IL-18、CCL5。qRT-PCR和Western blot法结果显示,两种方药各剂量组均可降低IL-1β的mRNA与蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。SM组和JM组对IL-8、IL-10、RANTES、ICAM-1的mRNA有显著抑制(P<0.05或P<0.01)。qRT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后肺组织的免疫炎症损伤。

四倍体金银花药材体外抗菌抗病毒实验研究

目的:研究四倍体金银花的体外抗菌和抗病毒作用。方法:以二倍体金银花为对照,用最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度法(MBC)测定四倍体金银花水提物对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念球菌、肺炎克雷伯菌的抗菌和杀菌作用。采用细胞病变效应法(CPE)观察四倍体金银花水提物对狗肾传代细胞(MDCK)的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)。将100TCID50的甲型流感病毒FM1加入MDCK细胞培养板中,吸附1 h后弃病毒液于MDCK细胞培养板中加入四倍体金银花水提液的最大无毒浓度稀释液,通过CPE法观察提取物对病毒致细胞病变作用的影响。结果:四倍体金银花水提物对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念球菌、肺炎克雷伯菌均具有抑菌和杀菌作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌和杀菌作用最为明显,四倍体对乙型链球菌抑菌强度高于二倍体,对肺炎克雷伯菌的杀菌强度高于二倍体。四倍体金银花水提物在浓度为0.030 5 mg·m L-1对甲型流感病毒FM1所致的细胞病变作用显示抑制作用,而其对照药材二倍体金银花水提物在浓度为0.488 0、0.244 0 mg·m L-1对流感病毒所致的细胞病变作用显示抑制作用。结论:四倍体金银花具有体外抗菌及抗流感病毒的作用。

三硝基苯磺酸诱导Balb/c小鼠结肠炎的实验研究

目的建立三硝基苯磺酸(TNBS)小鼠结肠炎模型。方法采用不同剂量的TNBS给♀Balb/c小鼠灌肠后制备结肠炎模型。观察动物的存活率、疾病活动度指数、结肠肉眼观和组织学变化,并检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的活力及小鼠脾T淋巴细胞增殖情况。结果随着TNBS剂量的提高,模型组小鼠存活率下降。存活的多数小鼠疾病活动度指数及MPO活力升高,病理切片显示结肠固有层及粘膜下层有大量淋巴细胞、单核巨噬细胞以及中性白细胞浸润,伴有肠腺扭曲、减少,杯状细胞丢失,隐窝脓肿,血管增生,肠壁增厚等病理改变,表明均建立了慢性结肠炎模型。结论每只小鼠给予1.5mgTNBS灌肠,动物死亡较少,并能够成功制备小鼠结肠炎模型。

痰热清注射液对流感病毒FM_1感染小鼠的保护作用

目的研究痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染小鼠的保护作用。方法观察痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用,以及肺指数和肺组织病理形态学变化,同时检测肺组织匀浆中流感病毒血凝滴度。结果痰热清注射液治疗组对流感病毒FM1感染小鼠具有明显的保护作用,死亡保护率与模型组小鼠比较,差异显著(P<0.05);肺组织病理形态学观察发现,痰热清注射液治疗组肺部炎症反应较模型组有显著改善。另外,痰热清注射液对肺组织匀浆中流感病毒血凝滴度具有明显的抑制作用。结论痰热清注射液(4mL/kg)对流感病毒FM1感染小鼠具有明显的保护作用。这种保护作用与痰热清注射液在体内抑制流感病毒增殖、减轻肺部炎症反应有关。

扶正透邪方联合抗生素体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究

目的探讨扶正透邪方含药血清联合抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法运用二倍稀释法检测单用抗生素、空白血清、含药血清及血清联合抗生素的体外抑菌情况。结果空白血清对多重耐药铜绿假单胞菌无体外抑菌作用,含药血清则具有明显的体外抑菌作用;抗生素联合含药血清较单纯抗生素和抗生素联合空白血清的抑菌情况有明显差异。结论扶正透邪方含药血清能够降低抗生素的最低抑菌浓度值、最低杀菌浓度值,含药血清与抗生素具有体外协同抑菌作用。

清热化痰法对AECOPD大鼠血清中性粒细泡弹性蛋白酶水平的影响研究

目的:初步探究清热化痰法指导下的蒌芩止嗽煎对慢性阻塞性肺病急性加重期(AECOPD)大鼠血清中性粒细胞弹性蛋白酶水平的影响。方法:建立大鼠AECOPD模型,60只AECOPD大鼠模型随机分为模型对照组(20只)、氨溴索组(20只)、蒌芩止嗽煎组(20只),用酶联免疫吸附法(ELISA)测定AECOPD大鼠模型治疗前后血清中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)指标。结果:蒌芩止嗽煎组、氨溴索组治疗后与治疗前比较,NE均有明显下降(P<0.01)。结论:清热化痰法指导下的蒌芩止嗽煎初步研究是通过降低NE水平,从而减少AECOPD大鼠模型的气道黏液高分泌,减轻气道阻塞。

清热化痰法对AECOPD痰热证大鼠模型病理肺组织的影响

[目的]基于前期研究清热化痰方可以提高青霉素在慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)痰热证大鼠模型肺组织中药物浓度基础上,研究清热化痰方是否通过改善AECOPD受损肺组织的形态结构来利于抗生素在肺组织内的转运。[方法]50只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氨溴索组、二陈汤组、蒌芩止嗽煎组各10只。用熏吸香烟加气管内注射内毒素及鼻腔滴入金黄色葡萄球菌,鼓风干燥箱中进行风热刺激的方法建立大鼠AECOPD痰热证模型,病理组织使用苏木精-伊红(HE)染色,应用图文分析软件(IPP6.0)测量肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)、肺泡腔面积与总面积比(PAA);同时对Weigert染色标本测量弹力纤维的相对面积。[结果]病理结果显示,AECOPD模型组与正常组比较肺组织结构严重受损,炎症细胞增多,说明模型复制成功,蒌芩止嗽煎组与氨溴索组受到破坏相对较轻,二陈汤组次之。MAN及PAA:蒌芩止嗽煎组、氨溴索组、二陈汤组与模型组相比较差异有统计学意义。Weigert染色显示,肺泡壁弹力纤维,其中以蒌芩止嗽煎组弹力纤维含量最高,以模型组受破坏最严重,其顺序从高到低依次为蒌芩止嗽煎组、氨溴索组、正常组、二陈汤组和模型组。[结论]中西医化痰法对AECOPD痰热证大鼠模型受损肺组织结构均有较好的保护作用,以清热化痰法最为明显;清热化痰法提高抗生素的肺内转运作用的机制可能是通过不同程度改善肺组织受损的形态结构,降低受损肺泡结构对抗生素的渗透限制来协助抗生素在肺组织中的正相扩散,协同抗生素发挥作用。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠模型的建立

目的:建立大鼠COPD急性加重期模型的方法,确定滴注感染细菌的浓度。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(每组再分为高、中、低细菌浓度组,空白组)。进行一般体征的观察,基础体温的测定,感染前后血清中白细胞总数测定,肺组织病理形态的观察。结果:从对照组及COPD模型组的基础体温测定看,高浓度细菌组的基础体温高于中、低浓度组及空白组。对照组:高浓度细菌组的白细胞计数均高于对照组中、低浓度组及空白组(t=-4.012,P<0.05;t=-3.939,P<0.05;t=-6.52,P<0.01);模型组:低、中、高浓度组WBC计数高于空白组(t=-4.517,P<0.05;t=-10.32,P<0.01;t=-7.094,P<0.01);高、中浓度组WBC计数高于低浓度组(t=-4.32,P<0.05;t=-3.86,P<0.05)。并且无论是对照组还是模型组,高浓度细菌组感染后白细胞计数明显高于感染前白细胞计数(t=-14.319,t=-7.06,P<0.01)。从病理学角度看,对照组的高浓度细菌组的肺组织病理学改变符合人类肺炎的病理表现,COPD模型组的高浓度细菌组的肺组织病理学改变符合人类COPD合并肺炎的病理表现。结论:用熏吸香烟加气管内注射内毒素及鼻腔反复高浓度滴入金黄色葡萄菌(细菌浓度为2.4×109cfu/mL)的方法可建立大鼠AECOPD模型,可用于实验研究。

四神丸和葛根芩连片对结肠炎小鼠炎性细胞因子的影响

目的探讨四神丸和葛根芩连片对硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导的小鼠急性和慢性结肠炎细胞因子的影响。方法小鼠自由饮用4%DSS连续5 d,制备急性结肠炎模型;小鼠4次循环饮用3%DSS制备慢性结肠炎模型。急性或慢性结肠炎实验小鼠均随机分为对照组、DSS急性或慢性模型组(模型组)、四神丸组、葛根芩连片组。急性模型小鼠于DSS饮水次日开始给药,连续8 d;慢性模型于DSS饮水2次循环后开始给药,连续16 d。ELISA检测各组小鼠结肠培养上清液中γ-干扰素(IFN-γ)、IL(白细胞介素)-17A及IL-22的含量。结果急性结肠炎模型小鼠结肠培养上清液中IFN-γ、IL-17A及IL-22含量均明显增加(P<0.01),葛根芩连片能显著降低急性结肠模型小鼠IFN-γ、IL-17A的含量(P<0.05),四神丸则能显著降低IL-17A的含量(P<0.05)。慢性结肠炎模型小鼠结肠培养上清液中IFN-γ、IL-17A较对照组显著升高(P<0.01);葛根芩连片及四神丸有降低二者的趋势。与对照组比较,四神丸可升高IL-22含量(P<0.05)。结论葛根芩连片和四神丸通过降低急性结肠炎模型小鼠IFN-γ、IL-17A含量达到其治疗作用,四神丸通过促进IL-22升高发挥其治疗慢性结肠炎的作用。

疏风宣肺方和解表清里方对流感病毒H1N1感染人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路作用的研究

目的:研究疏风宣肺方和解表清里方体外对人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路的影响。方法:利用基因芯片技术研究甲型流感病毒H1N1感染A549细胞后TLR3/7信号通路中基因转录的变化。采用荧光定量PCR和Western blotting法检测各组细胞中的Toll样受体3(Toll-like receptor3,TLR3)、Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、激活核因子Kappa B(nuclear factor-Kappa B,NF-κB)的mRNA及蛋白表达的变化。结果:在TLR3/7相关信号传导通路中,与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显上调,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组对差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显下调。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与H1N1感染组比较,疏风宣肺组的TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),解表清里方对TLR3/7、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01)。同时,疏风宣肺组治疗效果优于解表清里组。Western blotting结果显示,H1N1感染组TLR3/7、NF-κB蛋白较正常组显著升高(P<0.05)。与H1N1感染组比较,两种方药的TLR3/7、NF-κB表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:疏风宣肺方和解表清里方可以抑制流感病毒H1N1所诱导的TLR3/7信号通路活化,下调活性NF-κB的转录活性,发挥抗流感病毒的作用。

疏风宣肺方和解表清里方体外干预甲型流感病毒H1N1诱导炎性细胞因子分泌作用的研究

目的研究疏风宣肺方和解表清里方对甲型流感病毒H1N1感染的人肺腺癌上皮细胞(A549)中炎性细胞因子的影响。方法培养A549,甲型流感病毒H1N1感染A549后,分为细胞对照组、H1V1感染组、奥司他韦对照组、疏风宣肺组及解表清里组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting法检测各组细胞中炎症相关的白细胞介素(IL)1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)的mRNA及蛋白表达的变化。结果基因芯片结果提示,与细胞对照组比较,H1N1感染组差异表达基因Il1β、Thf、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2明显上调。与H1N1感染组比较,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组差异基因Thf、Il1β、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2表达显著下调。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES的mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与H1N1感染组比较,疏风宣肺组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1的mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05),解表清里组IL-1、TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05)。Western blotting结果显示,H1N1感染组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES蛋白表达较细胞对照组显著升高(P<0.05);与H1N1感染组比较,疏风宣肺组及解表清里组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后炎性细胞因子IL-1、TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA过表达及蛋白分泌,减轻炎症反应,并恢复机体免疫功能的稳定和平衡。

疏风宣肺方、解表清里方药对流感病毒小鼠TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒亚甲型肺适应株(FM1)感染小鼠肺组织细胞Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、激活核因子Kappa B(nuclear factor-kappaB,NF-κB)mRNA及蛋白表达的影响。方法选择108只小鼠,随机分为9组:正常组,模型组,磷酸奥司他韦胶囊组[西药组,2.5g/(mL·d)],疏风宣肺方(中药1)高、中、低剂量组[3.762、1.881、0.941g/(kg·d)],解表清里方(中药2)高、中、低剂量组[4.368、2.184、1.092g/(kg·d)],每组12只。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉,正常组以0.05mL生理盐水滴鼻,其余各组以0.05mL4LD50流感病毒FM1稀释液滴鼻感染小鼠。造模成功率100%。感染后2h灌胃给药。正常组、模型组灌胃蒸馏水,0.2mL/次,1次/d,连续干预4天。采用RT-PCR反应测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达升高(P<0.01);与模型组比较,西药组,中药1高、中、低剂量组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),中药2高、中剂量组TLR7、NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),中药2高、中剂量组MyD88mRNA表达降低(P<0.05),中药2中剂量组MyD88蛋白表达降低(P<0.05),中药2低剂量组TLR7、NF-κB蛋白表达降低(P<0.05)。与西药组比较,中药1低剂量组MyD88蛋白表达降低(P<0.05),中药1中、低剂量组NF-κB蛋白表达降低(P<0.01);中药2高、中、低剂量组TLR7mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),MyD88蛋白表达降低(P<0.01),中药2低剂量组NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论疏风宣肺方各剂量和解表清里中剂量能通过调节MyD88依赖的TLR信号传导通路下调NF-κB活性,发挥抗流感病毒的作用。疏风宣肺方效果优于解表清里方。

AECOPD大鼠模型气道黏液高分泌与肺功能的相关性研究

目的初步探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠模型气道黏液高分泌与肺功能的相关性。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为正常组和AECOPD模型组,建立大鼠AECOPD模型,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE),并测定肺功能指标。结果模型组NE比正常组升高,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组吸气阻力(Ri)、分钟通气量(MVV)、第0.3秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV0.3/FVC)、呼气峰流速(PEF)与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。NE水平与Ri呈正相关;NE水平与MVV、FEV0.3/FVC呈负相关;NE水平与PEF无相关。结论 AECOPD大鼠气道黏液高分泌产生过量的黏液,加重气道阻塞,导致严重的气流受限,从而加速了肺功能持续下降的进程,所以AECOPD持续存在的气道黏液高分泌与肺功能进行性下降存在密切的相关性。

疏风宣肺方与解表清里方对流感病毒H_1N_1感染的A549细胞凋亡的影响

目的:探讨疏风宣肺方与解表清里方对流感病毒H1N1感染的A549细胞凋亡的影响。方法:培养人肺腺癌上皮细胞A549,甲型流感病毒H1N1感染A549细胞后,以达菲为药物对照组,利用基因芯片技术通过KEGG pat hway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。研究疏风宣肺方与解表清里方凋亡信号通路中基因转录的变化;同时采用荧光定量PCR检测各组细胞中的肿瘤坏死因子受体超家族成员6(Fas)、Fas配体(Fas L)及天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-3、-8、-9(Caspase-3、-8、-9)m RNA表达的变化;West er n bl ot t i ng法检测各组细胞中蛋白的变化。结果:与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Casp3、Casp8、Casp9、Fas、Fasl明显上调,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组对差异表达基因Casp8、Casp7、Fas、Fasl明显下调;q RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均显著升高(P<0.01);与H1N1感染组比较,疏风宣肺组Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均明显降低(P<0.05),解表清里组Caspas e-3、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均明显降低(P<0.05)。同时疏风宣肺组治疗效果优于解表清里组。Wes t er n bl ot t i ng结果显示,H1N1感染组Fas、Fas L蛋白细胞较对照组显著升高(P<0.05)。与H1N1感染组比较,2种方药的Fas、Fas L表达均显著降低(P<0.05);q RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论:疏风宣肺方与解表清里方均可调控甲型流感病毒感染后的Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L表达,可对抗流感病毒感染后的细胞凋亡。