整合IBDV-VP_(2)基因的重组CVI988载体疫苗的构建

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)变异株的出现以及毒株的毒力增加对养鸡业构成严重威胁,构建表达IBDV-VP_(2)蛋白的CVI988重组候选疫苗株,可以同时防控IBDV和马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)对养禽业造成的危害。本研究通过细菌人工染色体(BAC)技术,将IBDV-VP_(2)基因整合到马立克病(Marek’s disease,MD)疫苗株CVI988的UL55位点,得到重组病毒CVI988 BAC-VP_(2)。利用PCR,IFA对重组病毒进行鉴定,并对重组病毒的生物学特性进行研究。试验结果显示,重组病毒CVI988 BAC-VP_(2)成功拯救且能在鸡胚成纤维细胞(CEF)中稳定表达。重组病毒表现出与亲本病毒相似的体外复制能力,重组病毒的噬斑大小与亲本毒相比,差异不显著。本研究构建的重组病毒CVI988 BAC-VP_(2)将为研发同时防控IBDV和MDV感染的二联廉价疫苗奠定基础。

荧光探针PCR检测牛嵴病毒的方法建立

牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKoV)是与犊牛腹泻密切相关的病原,试验针对BKoV 3D基因设计特异性引物和探针,建立快速检测BKoV的实验室方法。该方法仅能特异性扩增BKoV,对其他犊牛腹泻病原无扩增,特异性较强;对BKoV质粒标准品的最低检出限为11.0拷贝/μL,灵敏性较强;且组内与组间变异系数均小于2%,重复性较好。对采集自河南省的221份犊牛腹泻临床样本进行检测,BKoV的核酸检出率为9.05%(20/221)。本研究建立的检测方法为BKoV的临床快速检测和流行病学调查提供了有效手段。