短小芽孢杆菌碱性蛋白酶BP的纯化和性质

短小芽孢杆菌产生的碱性蛋白酶BP经CM—Sephadex-C-50和Sephadex-G75两个柱层析,得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的酶组分,比活力从1307μ/mg提高到5538μ/mg.活力回收为21%,酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适pH为9.5,Mn^2+、Ca^2+对酶有激活作用,Hg2+、Ag^+对酶有抑制作用.酶的热稳定性不高,但在Ca^2+保护下,热稳定性明显提高.酶的最适作用底物为酪蛋白,对血红蛋白、蛇毒蛋白、牛血清蛋白、卵蛋白、核糖核酸酶也有水解作用.对酪蛋白的Km为0.62%,V_max为50μg/min.DFP可完全抑制酶活性,PMSF和NBS也严重抑制酶活力,PCMB、_o-PTH和EDTA几乎不抑制酶活力.纯酶的分子量为25000Dal.该酶蛋白含有17种氨基酸,其中甘氨酸(Gly)和丙氨酸(Ala)为主要氨基酸.

嗜冷性海洋微生物产蛋白酶的研究

从210株海洋细菌中筛选出30株产蛋白酶活力较高的菌株。以N_1为出发菌,用UV诱变处理,获得突变株。其中的N_(1-3)。菌株最适生长温度为20℃;在21℃下培养44小时,产酶最高。酶反应最适温度为50℃,最适pH8.0。30℃以下酶活稳定。

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究——Ⅱ.诱变株选育及产酶条件

嗜碱性的短小芽孢杆菌 R115(Alkaliphillc Bacillus pumilus)经0.4mg/ml亚硝基胍和0.4μg/ml 利福平处理,获得一株具有高产稳产碱性蛋白酶的变异株(B45),产酶活力由2803u/ml 提高到6000u/ml(28℃测定),该诱变株的最适产酶条件为起始 pH10.5—11.0,温度30—35℃,培养时间52—54h。0.4—0.6%K_2HPO_4可增加酶的产量。

嗜碱性芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究——Ⅰ.菌种分离、筛选及发酵条件的研究

从38份土样中筛选到一株嗜碱性短小芽孢杆菌R115,能在pH10以上的环境中生长,并在pH10条件下产生较高的碱性蛋白酶。酶反应的最适pH为10.5,最适温度45℃;在pH12条件下最适温度为28℃。

嗜碱性短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究——Ⅲ.酶的性质及应用

本文对嗜碱性短小芽孢杆菌(Alkaliphilic Bacillus pumilus)B45菌株产生的碱性蛋白酶性质进行了研究。该酶对酪蛋白水解的最适 pH 为10.0—10.5,在 pH7—10之间稳定,最适反应温度为45℃,稳定性较好。最适底物浓度为1%。四硼酸钠、氯化钙对酶有激活作用,三聚磷酸钠及碳酸钠在常温下对酶活力无影响,而在40℃时对活力略有抑制,加入0.2g/LCaCl_2可以保护酶的活性。B45蛋白酶对血,奶污布的去污效果明显,其去污力比一般洗衣粉高10—13倍。

中性蛋白酶AS 1.398固定化酶的研究

枯草芽孢杆菌AS1.398中性蛋白酶经海藻胶包埋制成固定化酶,用396的胶包埋率达98%,表现活力为7%左右。其最适反应pH为7.0,最适温度为55℃,与自然酶相一致。固定化酶的耐热性比自然酶高,最稳定的pH为7.0左右,pH8.0以上不稳定。海藻胶容易解体,球形破裂,因此只适合在中性条件下使用。

Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶研究

从 2 0 0 0多份渤海海区海水海泥样品中分离获得一株新型脂肪酶高产菌株BohaiSea 914 5 ,经鉴定为适冷性海洋酵母 (Yarrowialipolytica)。菌株在以豆饼粉、棉籽饼粉和花生粕作为碳氮源并添加 0 5 %花生油的培养基中能较好地生长产酶 ,最适产酶温度 2 6± 1℃ ,产酶周期为 2 3h。所得脂肪酶的最适反应温度为 35℃ ,最适pH 8 5 ,pH4 0～ 9 0范围内稳定 ,热稳定性差。该酶与常见金属离子和化学试剂的配伍性较好 ,受表面活性剂SDS的激活 ,且具有良好的耐盐及抗氧化特性 ,是一种新型的海洋低温碱性脂肪酶 。

嗜硷性芽孢杆菌硷性蛋白酶的研究——Ⅲ.产品的急性毒性及微核试验

为了解嗜硷性芽孢杆菌(Bacillus basophilus)硷性蛋白酶用于洗涤剂中的安全性,对该酶进行了急性毒性及微核试验的研究。结果表明,嗜硷性芽孢杆菌硷性蛋白酶由小鼠经口剂量达10g/kg时,未见动物死亡;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,未见微核率有异常增加。所以,认为嗜硷性芽孢杆菌硷性蛋白酶可广泛应用于洗涤剂中。

黄杆菌属中的一个新种

由海产贝类中分离到一菌株 YS- 94 12 - 130 ,为革兰氏阴性短杆菌、末端圆、有鞭毛、不能滑行运动、大小为 0 .4～ 0 .7μm× 1.0～ 1.5μm,裂殖生殖 ,不生成芽孢 ,胞内无多 -β-羟基丁酸颗粒。菌落光滑 ,黄色、半透明 ,边缘完整。其色素无荧光 ,含类胡萝卜素 ,其正己烷提取液经光谱测定最大吸收峰为4 50 nm。该菌生长的温度范围为 0～ 2 5℃ ,最适为 18～ 2 2℃ ,最高 2 5℃ (在 2 5℃生长极弱或几乎不生长 )。此菌株于 p H7.0～ 9.0能生长 ,最适 p H为 7.5,耐 6% Na Cl,80μg/ m1的链霉素或 80μg/ ml的氨卞青霉素。 YS- 94 12 - 130菌株为好气菌 ,严格的有氧呼吸代谢 ,过氧化氢酶、氧化酶阳性和磷酸酶阳性 ,利用多种糖、水解淀粉但不分解纤维素、琼脂和几丁质。水解干酪素、胨化石蕊牛奶最后变碱。液化明胶试验阴性 ,还原硝酸盐 ;不产 H2 S和吲哚 ;MR和 V.P.试验阴性 ;YS- 94 12 - 130菌株 DNA中 G+C含量为 32 .2 mol%。该菌株的特征符合黄杆菌属的特征 ,但与此属中的其他种比较又有显著的差别 ,因此将其定为黄杆菌属一新种 ,命名为黄海黄杆菌 ( Flavobacterium yellowsea sp.nov)。

花生微生物的研究 Ⅰ.培养基的选择

粮食贮存过程中由于微生物所引起的变质现象,早在50年前就已经引起人们的注意了。可以总结成六个主要方面:(1)减低出芽率,不利于种用;(2)减低质量,如大豆棉子之榨油,包米之制作淀粉,小麦作面粉等;(3)产生各种不同的颜色;(4)引起不同温度的发热足以升温至60—70℃,甚至80℃;(5)发生酸败。