HCV NS_3区C_（33）c抗原基因cDNA的克隆及序列分析

自上海市及江苏省慢性丙型肝炎患者血清中分离丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，采用自行设计的引物，经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），获得长为６９４ｂｐ的Ｃ３３ｃ抗原基因ｃＤＮＡ，将其克隆于表达载体并作序列分析。结果表明，上海株ＨＣＶ－Ｓ１及江苏株ＨＣＶ－Ｓ２该区域核苷酸水平有很高的同源性（＞９９％），上海及江苏株ＨＣＶ与美国原型ＨＣＶ－１、日本株ＨＣＶ－Ｊ及河北株ＨＣＶ－ＨＢ在该区域核苷酸水平的差异分别为１８．６４％、５．５５％及８．０１％～８．１７％，氨基酸水平的差异在２．３１％～６．０２％之间。上海株同一份血清三个独立克隆间核苷酸水平有０．６％～０．９％的差异。本实验为进一步表达Ｃ３３ｃ蛋白作好了准备。

中国地区HCV株包膜区cDNA序列变异性分析

目的 研究国内不同地区ＨＣＶ包膜基因区变异。方法 对国内不同地区慢性丙型肝炎患者的１３株 ＨＣＶ采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增ＨＣＶ包膜基因区（Ｅ１、 Ｅ２／ＮＳ１）片段，对其中的１００５ｂｐ的ｃＤＮＡ进行测序，并与 国内外株进行变异性分析。结果 国内ＨＣＶ株比较，同型（Ⅱ）间该区核苷酸和氨基酸的同源性分别介于７６．４２％～ ９７．１１％和７５．２２％～９３．１５％，不同型（Ⅲ）间分别为６２．２９％～６３．３８％和５１，２９％～６０．００％；国内与国际同型株比较，同型 （Ⅱ）间分别为７３．７３％～８７．７６％和７５．８２％～８８．０９５％，不同型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）间分别为６１．４９％～８１．４９％和４９．３５％～７８．２１％；国 内外１８株ＨＣＶ的ＨＶＲ１区同源性仅为３６．１１％～７５、３１％和２０．８０％～６２．９６％，发现两个新的较高变异区（第２５０～２５７ 位和第４４３～４６５位氨基酸）。结论 ＨＣＶ包膜区序列分析同型间同源性较高，异型间同源性较低；南北地区有差 异，国内外差异更大；最大的变异在ＨＶＲ１，并发现两个新的较高变异区。

上海地区Ⅱ、Ⅲ型丙型肝炎病毒包膜区cDNA序列分析

目的 分析上海地区丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)Ⅱ、Ⅲ型包膜区cDNA序列变异。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增HCV包膜区E1、E2 /NS1片断 (10 0 5bp) ,在373DNA全自动测序仪上进行了序列分析。结果 HCV E1、E2 /NS1区核苷酸和氨基酸同源性比较显示 :上海株Ⅱ型、Ⅲ型间同源性分别为 6 2 .48%和 5 9.10 % ;上海株与国内外同型株间分别为85 .97%～ 87.36 %和 83.38%～ 86 .5 7% ;上海株与国内外不同型株间分别为 6 1.49%～ 70 .95 %和5 9 .10 %～ 78.2 1%。此外 ,共发现 5个变异较大的区域 ,其中两个是国际公认的高变区 (HVR1及HVR2 ) ,另外 3个为首次报道 (第 2 5 1～ 2 5 8、2 97～ 30 1、46 1～ 46 7位氨基酸 )。结论 HCV E1、E2 /NS1序列变异大 。

上海市、江苏省丙型肝炎病毒NS_3区C_（33c）抗原基因cDNA的克隆及序列

本文作者旨在运用分子克隆技术阐明上海市及江苏省丙型肝炎患者血清中两株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３ｃ抗原基因的序列及变异特征，为临床检测提供理论依据，并为进一步表达Ｃ３３ｃ抗原作好准备。结果表明：上海株及江苏株Ｃ３３ｃ抗原基因同源性大于９９％，推测属同一基因型。此两株与其它分离株相比较，氨基酸水平的同源性（９３．０８％～９７．６９％）明显高于核苷酸水平的同源性（８１．３６％～９４．４５％），说明Ｃ３３ｃ抗原特别适于作诊断抗原。

丙型肝炎病毒基因组变异的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组具有很大的变异性。本文就ＨＣＶ基因组变异的特征、分型及研究变异的意义作一综述。

基因型和核苷酸序列分析研究丙型肝炎病毒母婴传播

为研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的母婴传播，应用ＥＩＡ方法检测１８１６例孕妇血清抗－ＨＣＶ抗体。结果抗体阳性者１６例（０．８８％）。进一步用逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ），１４例孕妇为阳性。对其中１３例孕妇所生１３例婴儿随访至出生后６个月，３例婴儿检出ＨＣＶＲＮＡ，其中２例为短暂ＨＣＶ感染者，１例为慢性ＨＣＶ感染者伴ＡＬＴ异常，母婴传播率为２３．０％（３／１３）。结果提示：经母婴对ＨＣＶ基因分型和ＨＣＶＣ／Ｅ１区核苷酸序列分析支持婴儿感染的ＨＣＶ来自于母亲。

聚合酶链反应和杂交试验检测上海地区庚型肝炎病毒感染的初步报告

为探讨上海地区庚型肝炎病毒感染的现状，采用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ／ＧＢＶＣ）核酸（ＨＧＶＲＮＡ）。结果在各类患者和助血员中ＨＧＶＲＮＡ的检出率分别是：血液透析和肾移植为１５７％（８／５１）、丙型肝炎为３３％（１／３０）、乙型肝炎为０（０／１９）、散发性非Ａ～Ｅ型肝炎为０（０／２８）、义务助血员为７５％（５／６７）。提示ＨＧＶ感染多为无症状或亚临床型，常与ＨＣＶ重叠感染，并与输血密切相关。作者肯定了上海地区存在庚型肝炎，指出筛选助血员对控制输血后庚型肝炎至关重要。

急性早幼粒细胞白血病中 PLZF/RARα 对野生型 RARα 显性负作用的研究

目的：了解急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）的早幼粒细胞白血病锌指基因（ＰＬＺＦ）和１７号染色体上的ＲＡＲα基因与ＡＰＬ发生的关系。方法：应用ＰＣＲ克隆方法，缺失ＰＬＺＦ／ＲＡＲα的ＰＬＺＦ不同区域，构建了８个ＰＬＺＦ／ＲＡＲα的突变体进行细胞转染。结果和结论：证实了ＰＬＺＦ／ＲＡＲα对野生型ＲＡＲα有明显的显性负作用，而ＰＯＺ区域（即氨基酸１～１２０）对ＰＬＺＦ／ＲＡＲα的显性负作用的形成是至关重要的，２个锌指结构可能通过与ＰＯＺ区域的空间构型的相互作用而在显性负作用中起一定作用。