IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显著的抑制活性(P<0.01)。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具。

叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性研究

目的探讨叶酸脂质体对乳腺癌4T1细胞的体内靶向性,为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究奠定基础。方法采用薄膜分散法结合冷冻超声法制备叶酸脂质体,原子力显微镜(AFM)确定叶酸脂质体的粒径大小和表征叶酸脂质体的表面形态结构。采用鼠源4T1细胞建立小鼠原位乳腺癌模型,原位皮下分别注射包封钙黄绿素的叶酸脂质体和脂质体,用荧光显微镜定性观察和荧光定量法测定叶酸脂质体与脂质体对肿瘤细胞的富集量。结果叶酸脂质体富集于原发性和转移性乳腺癌细胞的数量明显高于脂质体(P<0.05)。结论通过细胞表面叶酸受体的介导作用,叶酸脂质体能明显富集于表达叶酸受体的乳腺癌细胞上,即具有肿瘤靶向性;本研究为开展叶酸介导的靶向性抗肿瘤药物的研究提供了依据。

N-苄氧基羰基-甘氨酰脯氨酸-阿霉素血药浓度测定方法的建立

目的:建立一种稳定、灵敏的阿霉素靶向抗肿瘤前体化合物Z-GP-Dox的血药浓度检测方法,为进一步系统开展该候选化合物的体内药代动力学研究奠定方法学基础。方法:Z-GP-Dox血浆样品经过萃取剂乙腈-二氯甲烷(1∶4)液-液萃取后,采用HPLC-FD法检测。色谱柱为Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温为25℃;流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸(2∶3)等度洗脱,流速为1 mL.min-1。检测器为荧光检测器,激发波长为238 nm,发射波长为554 nm;内标为柔红霉素(DNR)。结果:利用所建立的HPLC-FD法测定大鼠血浆中Z-GP-Dox含量的线性范围为0.01～50μg.mL-1,r=0.999 5,相关回归方程:y=0.140 6x-0.048 3。该检测方法的日内精密度≤5%,日间精密度≤15%,萃取回收率≥83%。结论:本研究建立的Z-GP-Dox血药浓度测定方法有较高的准确度和灵敏度,适用于该候选化合物的体内药代动力学研究。

斑马鱼在抗肿瘤血管生成研究中的应用

近年来,斑马鱼作为一种新的模式生物,在胚胎的分子发育机制、疾病模型的构建以及药物筛选等研究中受到了广泛重视。随着先进的基因诱导技术和共聚焦显微观察技术的发展,斑马鱼已经在抗肿瘤血管生成药物研究中得到广泛应用。就斑马鱼在抗肿瘤血管生成药物筛选及其在肿瘤血管生成机制方面研究的应用作一综述。

浸出条件对粉煤灰中三氧化二铝浸出率的影响

以活化粉煤灰为原料，通过正交实验的得出酸浸温度，酸浸时间和硫酸的浓度对粉煤灰中Al2O3浸出率的影响。结果表明；酸浓度对粉煤灰中Al2O3浸出率的影响最大，其次是酸浸时间和酸浸温度。粉煤灰中Al2O3的最佳浸出条件为；酸浸时间为60min、硫酸浓度为1：1、酸浸温度为30℃时，粉煤灰中Al2O3的浸出率最高。