化州柚不同栽培品种总黄酮及柚皮苷含量的比较研究

目的通过对化州柚不同栽培品种总黄酮和柚皮苷的含量考察,分析比较不同品种间的质量差异,为进一步筛选优良品种,实现该药材资源的合理应用和规范化种植奠定坚实基础。方法以柚皮苷为对照品,利用紫外分光光度法测定总黄酮含量,HPLC法测定柚皮苷含量。结果大茶岭和凤尾中总黄酮分别为19.24%,18.06%;柚皮苷的含量分别为11.72%,12.38%,均明显高于其他栽培品种。结论不同栽培品种的化州柚中总黄酮和柚皮苷的含量均不相同,大茶岭和凤尾这两个品种的品质可能较其他品种好。

乙烯利刺激对檀香叶中总黄酮含量的影响

【目的】建立檀香叶总黄酮含量的测定方法，分析乙烯利刺激对檀香叶中总黄酮含量的影响。【方法】采用紫外分光光度法测定檀香叶中总黄酮含量。【结果】未经刺激的檀香叶总黄酮含量在69．67～72．81mg／g之间。经过刺激的檀香叶总黄酮含量在105．71～167．98mg／g之间。【结论】乙烯利刺激能提高檀香叶中总黄酮含量。

檀香萜烯合成酶基因的克隆与序列分析

目的通过克隆技术获得参与檀香挥发油形成的萜烯合成酶基因。方法利用CTAB-LiCl法提取檀香已结香心材总RNA,采用RT-PCR技术克隆萜烯合成酶基因。结果克隆获得了一个檀香萜烯合成酶基因,该基因编码区全长1 731 bp,编码576个氨基酸残基。结论 CTAB-LiCl法能提取较高质量的檀香心材总RNA,克隆获得的萜烯合成酶具有编码区。

乙烯利刺激对檀香叶中多糖含量影响的初步研究

目的:建立檀香叶水溶性多糖含量的测定方法,分析乙烯利刺激对檀香叶中多糖含量的影响。方法:分别采用蒽酮硫酸法和苯酚硫酸法两种方法,利用紫外-可见分光光度计测定檀香叶中水溶性多糖的含量。结果:两种方法测定的檀香叶中水溶性多糖含量在8.86%～15.61%之间。结论:两种方法简便、准确、重现性好,均可用于檀香叶多糖含量的测定;乙烯利刺激檀香能提高其叶片中水溶性多糖的含量。

甲型流感病毒H1N1亚型HA基因的克隆及序列分析

目的克隆甲型流感病毒H1N1亚型血凝素HA基因,并对其进行序列分析。方法利用TRIzol Rea-gent法提取甲型流感病毒H1N1亚型的总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增HA基因,经酶切、连接后,构建pET 28a(+)-HA重组质粒。利用生物信息学工具对HA的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果成功构建了pET 28a(+)-HA重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的HA基因序列同源性达到99%。结论对HA基因进行克隆及生物信息学的分析,为深入研究HA在病毒侵入细胞及抗原变异中的作用机制及后续HA抑制剂的体外筛选奠定基础。

人Hsp90α基因克隆、中试发酵及生物信息学分析

目的:克隆获得人热休克蛋白90α(Hsp90α)基因,构建其原核表达载体,分离纯化重组蛋白,为Hsp90抑制剂的体外筛选奠定基础。方法:TRIzol Reagent法提取K562细胞总RNA,通过RT-PCR获得Hsp90α-cDNA。以该cDNA为模板PCR扩增Hsp90α基因,目的基因和质粒pET28a(+)经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接酶切片段,将重组DNA转化DH5α,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG诱导,经条件优化后进行中试发酵、纯化以及Western blot鉴定。结果:原核表达载体pET28a(+)-Hsp90α成功构建,可在Rosetta(DE3)中正确表达,中试发酵收菌574g且表达产物以可溶性形式存在,纯化产物纯度为97%。结论:利用分子克隆技术建立了Hsp90α基因的原核表达和中试发酵的条件,为更深入地研究其在抗肿瘤治疗中的作用打下基础。

中药诱导间充质干细胞成骨分化信号通路的研究进展

间充质干细胞(MSCs)来源于中胚层,具有自我更新、修复机体系统和多向分化潜能的细胞。近年来已筛选出许多诱导MSCs成骨分化的中药单体。该文总结了中药诱导MSCs成骨分化作用及其相关信号通路。

人Aurora B基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

目的:克隆出人Aurora B基因,并将其于大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达,获得重组蛋白。方法:利用TRIzol Reagent法提取食管癌ECa 109细胞总RNA,RT-PCR后以其cDNA为模板PCR扩增Aurora B基因,构建pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,将其转化Rosetta(DE3)菌株,IPTG体外诱导表达重组蛋白。利用生物信息学工具对Aurora B的核酸序列和蛋白功能结构进行分析。结果:成功构建了pET 28a(+)-Aurora B重组质粒,经序列比对,与GenBank上公布的人Aurora B基因序列同源性达到了99%;获得Aurora B蛋白,大小约39kDa,蛋白表达量约占菌体总蛋白的28%。结论:对人Aurora B基因进行克隆、原核表达及生物信息学分析,为深入研究Aurora B在细胞周期调控中的作用机制及后续Aurora B抑制剂的体外筛选奠定基础。

GRP78在食管癌细胞ECA-109增殖过程中的功能研究

食管癌在中国是高发性肿瘤,并具有较高的致死率。肿瘤细胞的持续增殖与细胞增殖失调密切相关。肿瘤细胞在增殖过程中需要合成大量蛋白质,葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatedprotein,GRP78)作为分子伴侣,在蛋白质的折叠、组装、修饰和错误折叠蛋白的降解过程中发挥着重要作用。该研究通过构建pGRP78-EGFP-N1重组质粒,瞬时转染ECA-109细胞,研究GRP78过表达对细胞增殖能力的影响;采用RNA干扰技术,瞬时转染靶向GRP78的siRNA,研究敲低GRP78对细胞增殖能力的影响。该研究发现GRP78过表达后,更多的细胞从G1期进入S期和G2/M期,细胞增殖速率加快,细胞克隆形成率亦明显提高;敲低GRP78后,细胞更多地被阻滞在G1期而无法进入S期和G2/M期,细胞增殖速率减慢,细胞克隆形成率降低。GRP78可能通过调节细胞周期而促进ECA-109细胞的增殖。