紫光对斑马鱼皮肤黑色素细胞数量及相关基因表达的影响

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建感紫光短波视蛋白(short-wave-sensitive 1,sws1)基因缺失的斑马鱼突变品系sws1^(-/-)。检测紫光照射后野生型AB品系和sws1^(-/-)突变品系在背腹皮肤中黑色素细胞的数量、黑色素合成相关基因pomc和asip、视黄酸合成相关基因raldh2和raldh3的表达量。结果显示:在紫光照射60和100 d后,sws1^(-/-)斑马鱼背部皮肤黑色素细胞数量显著少于野生型斑马鱼(P<0.05);实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测发现,pomc基因在紫光照射100 d的sws1^(-/-)斑马鱼背部皮肤中的表达量显著低于野生型,raldh2在紫光照射100 d的sws1^(-/-)斑马鱼背部皮肤中的表达量显著低于野生型。研究表明,紫光可能通过SWS1影响背部皮肤raldh2的表达从而影响视黄酸的合成,再通过影响pomc的表达调控黑色素细胞的形成。研究结果为分析紫光基因调控鱼类皮肤黑色素细胞形成的分子机制提供了基础。

aguA基因缺失对嗜水气单胞菌致病性的影响

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是水环境常见的病原体,具有较强致病性。在本研究中,首次敲除了嗜水气单胞菌aguA基因,通过转录组分析发现aguA基因敲除后细菌的黏附、致病、胺代谢等生物过程下降。通过qRT-PCR进一步验证发现10个黏附基因、9个发病基因和8个胺代谢基因的mRNA表达水平明显下降;此外,转录组水平分析结合qRT-PCR验证发现Ⅵ型分泌系统基因、Ⅱ型分泌系统基因、鞭毛合成相关基因、菌毛合成相关基因、溶血基因、Ⅰ型分泌系统基因、肠毒素基因、RTX基因等毒力基因的RNA表达水平也出现下调。与野生菌株(WT)相比,aguA敲除株(ΔaguA)感染金鱼的致病力降低了86.6%,且aguA敲除株生物膜形成能力降低了16.6%。以上结果显示,aguA基因与嗜水气单胞菌的致病性密切相关。