ALKBH5在不同免疫环境中的调控作用

m6A修饰在转录后水平调控多种细胞过程,而RNA m6A水平受RNA去甲基化酶ALKBH5调节,维持正常的生理功能的同时也促进多种人类疾病发生发展。在这篇综述中,我们讨论了ALKBH5与免疫之间的联系以及在免疫系统和癌症中的多重作用。我们分析了ALKBH5在不同免疫环境中的调节作用,包括促进正常免疫细胞发育成熟和细胞因子释放,在多种肿瘤组织中异常表达对肿瘤免疫微环境的调节和ALKBH5失调促进自身免疫疾病发生等。在不同免疫环境中的诸多调节作用使得ALKBH5可能作为肿瘤免疫、自身免疫性疾病以及在其他与ALKBH5免疫调节相关疾病的潜在药物靶标,为开发免疫治疗药物提供理论参考。

稳定表达叶酸受体α的C26细胞株的建立

目的建立稳定表达叶酸受体α(FRα)的C26细胞,用于FRα基因疫苗的后续研究。方法采用脂质体转染法,将前期构建的重组真核表达质粒pc DNA3.1-FRα基因导入C26细胞,用G418加压进行筛选,并通过单克隆操作,建立稳定转染叶酸受体α基因的单克隆细胞株。利用反转录PCR及免疫荧光细胞化学染色检测稳定转染细胞中叶酸受体α基因的表达情况,并利用反转录PCR检测传代细胞中FRα基因表达的稳定性。结果经转染、G418筛选以及单克隆化操作,得到单克隆FRα基因稳定转染细胞株,所得单克隆稳定转染细胞株可表达FRαmRNA及蛋白,并能够在多次传代后保持表达的稳定性。结论成功构建了FRα稳定转染细胞株。

噬菌体展示随机十五肽库的构建

为了满足药物筛选的需要,本实验以pCANTAB 5E噬菌粒为载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十五肽库。通过自行设计引物与模板,人工合成编码随机十五肽的寡核苷酸片段及含有酶切位点的引物。通过PCR技术进行模板扩增获得编码随机十五肽的基因。将扩增后的目的基因经过SfiΙ,NotΙ两个限制性内切酶双酶切后,与经同样双酶切的5'去磷酸化的噬菌粒载体连接,将重组产物电转入大肠埃希菌TG1感受态细胞。集合菌落后进行库容和多样性检验。所建肽库库容可达5×108。随机挑取20个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。成功构建了库容量与多样性都满足筛选要求的噬菌体展示随机十五肽库。

海绵城市雨洪基础设施规划途径研究

城市化进程不断加快,城市基础设施建设日趋完善,越来越多的建筑从城市中拔地而起,提升了城市的魅力。但是却降低了城市自身的排泄功能,最近几年城市积水越来越严重,给城市居民带来了极大的困扰,城市雨洪基础设施规划变得尤其重要。因此,本文以海绵城市为着眼点,对及雨洪基础设施规划途径进行了论述,以期可以为城市未来建设发展提供一定的借鉴意义。

城市规划与环境规划空间管制协同策略研究

城市规划立足城市未来发展趋势,对城市未来发展进行合理的布局,科学的部署城市未来各项工程建设,勾画城市未来发展蓝图,是对城市进行有效管理的重要组成部分,同时也是加快城市发展的重要推动力量。城市规划应综合考虑各种因素的影响,尤其是环境承载力。由于社会经济的不断发展使得部分城市中环境承载力被削弱,本身生态环境变得十分脆弱。因此,在进行城市规划时应立足于环境保护的目标,加强城市规划与环境规划空间管制二者之间的统一。

六氟异丙醇在难溶性多肽圆二色谱检测中的应用

二级结构是多肽药物发挥药理活性的重要基础,圆二色谱法是测定多肽二级结构最常用的方法,但一些难溶性多肽在检测中往往会遇到溶解度低和溶剂吸收干扰等困难。为了解决难溶性多肽在圆二色谱测定中溶剂选择的困难,文章从溶剂特性及原理出发,提出使用六氟异丙醇作为难溶性多肽的圆二色谱溶剂,并通过对多肽在纯六氟异丙醇及其与PBS混合溶剂的溶解实验和圆二色谱检测,验证了难溶性多肽在上述溶剂中溶解度较高,溶液均一且透明。CD图谱中多肽二级结构特征峰显著、稳定、结构信息充足,且未产生明显的溶剂吸收干扰。这些结果证明了六氟异丙醇可以作为难溶性多肽的良好溶剂,为其圆二色谱检测提供一种新的溶剂选择。

肿瘤多肽疫苗的临床应用

随着肿瘤治疗的手段不断改进和完善,采用疫苗治疗的方法成为肿瘤治疗的新途径。目前,针对肿瘤治疗的疫苗主要包括以下几种类型:细胞载体疫苗,单克隆抗体疫苗,肿瘤基因疫苗以及肿瘤多肽疫苗等,尤其是肿瘤多肽疫苗,在肿瘤治疗中具有广泛的应用前景。肿瘤多肽疫苗因其特异性高、化学性质稳定、易于制备、无潜在致癌性等优点,受到愈来愈多的关注。很多研究一般都是围绕着黑色素瘤进行的,有些已获得较好的实验结果。多肽疫苗临床治疗一些恶性肿瘤虽已取得一定效果,但尚存在主要组织相容性复合体限制性、免疫原性较弱、免疫应答与临床疗效不尽一致及免疫耐受等问题,因此筛选和开发高效的肿瘤治疗性疫苗还需要更深入的研究。

基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶选择性多肽抑制剂HQ1～HQ4对内毒素休克的保护作用的研究

基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶在内毒素休克中都扮演重要角色。前期研究发现,同时抑制这两种酶的多肽抑制剂可保护内毒素休克小鼠。该研究合成多肽文库,筛选出了对基质金属蛋白酶和肿瘤坏死因子释放酶有选择性抑制活力的多肽抑制剂。在此基础上,建立了体外检测酶活力的模型,并比较了多肽抑制剂HQ 1～HQ4对中性粒细胞颗粒释放物中基质金属蛋白酶-9活力的抑制作用,发现5μmol/L的4种多肽抑制剂对基质金属蛋白酶-9酶活力的抑制率分别是79%,80%,43%和63%。同时建立了内毒素休克模型并考察了几种多肽抑制剂的体内活性,发现注射HQ1和HQ4组小鼠的生存率分别为50%和58.3%,而注射HQ2和HQ3组小鼠生存率仅为16.7%。这些结果证明了在该模型中,抑制基质金属蛋白酶具有更好的保护作用。这些工作使我们对内毒素休克模型的发病机理的认识又深入了一步。

基于士的宁和马钱子碱为主要活性成分的马钱子抗肿瘤活性研究

近年来,马钱子及其有效成分士的宁和马钱子碱的抗肿瘤活性得到了广泛研究,对多种不同类型的肿瘤均有抑制作用,而且对肿瘤发生、侵入的各环节均具有作用,过程中影响细胞内多种肿瘤药物靶标,呈现出多靶点、多功能的典型特点。文章综述了近年来利用马钱子、士的宁和马钱子碱进行抗肿瘤研究的现状。

中药逆转肿瘤细胞多药耐药研究进展

阐述了肿瘤多药耐药(MDR)是临床化疗失败的主要原因之一,己成为恶性肿瘤化疗过程急需解决的问题。中药有毒性小、安全有效、多靶点等优势,在逆转肿瘤MDR的研究中正受到越来越广泛的关注。中药通过作用于介导MDR形成的膜转运系统、药物代谢系统、促进肿瘤细胞凋亡等机制,对多种肿瘤的MDR具有逆转作用。如何有效地从浩淼庞大的中药资源库中快速筛选并定位到具有逆转MDR活性的分子仍是目前中药研发亟待解决的瓶颈问题之一。建立科学合理的抗肿瘤药物筛选模型和高效可靠的方法和系统,能够满足现代医学的科学阐述要求,又能兼顾中医药本身的整体观念和辨证论治的思想,还需要大量艰苦的科学工作。

噬菌体展示技术与中药活性成分靶点蛋白筛选研究

噬菌体展示技术是将所需多肽/蛋白从大量变异体的集落中提取出来的一种高通量的体外筛选技术,因其高效、实用、便捷的优势现已广泛应用于药物研发的多方面领域,在中药活性成分靶点蛋白中也有越来越广泛的应用。靶点蛋白是药物分子在体内的结合位点,良好的靶点是获得优良药物的基础。该文综述了噬菌体展示技术的研究进展及其在中药活性分子靶点蛋白筛选中的应用。

叶酸受体α原核载体的构建及表达

PCR法扩增叶酸受体α基因片段,经NcoⅠ和EcoRⅠ双酶切后克隆到原核表达载体pet22b,并进行双酶切和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过Ca Cl2法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot和ELISA鉴定蛋白表达;免疫小鼠,血清效价检测蛋白免疫原性。经双酶切和测序验证,成功构建FRα-pet22b表达载体。Western blot验证表明,叶酸受体α基因能在BL21中表达目的蛋白,但ELISA值较低。经免疫后小鼠血清与市售叶酸受体α亲和力差,预示原核表达虽能得到叶酸受体α,但其构象可能与真核表达蛋白不同。

免疫检查点PD-1/PD-L1肽类抑制剂的研究进展

肿瘤免疫治疗可通过抑制多种免疫检查点信号通路发挥作用,其中PD-1(Programmed cell death 1)/PD-L1(Programmed cell death ligand 1)通路抗体抑制剂获得极大成功。但随着PD-1/PD-L1单克隆抗体的临床应用,诸如生产成本高、实体肿瘤组织穿透力弱、免疫原性,免疫相关副反应严重等越来越多的限制与不足被逐渐发现。而小分子免疫检查点抑制剂的研究逐渐受到重视,其中肽类免疫检查点抑制剂具有高度的特异性和亲和力,被认为是一类具有潜力的抗体药物的补充和替代产品。文章对近年来PD-1/PD-L1肽类抑制剂的研究进行了综述。

叶酸受体α与卵巢肿瘤

卵巢肿瘤的死亡率为妇科肿瘤之首,积极探索早期卵巢癌的筛查方法和新型治疗药物,对降低死亡率具有重要意义。叶酸受体α(FRα),对叶酸具有高度亲和性。在生理情况下,叶酸受体α仅低度表达于少数正常组织细胞,而在多种人类上皮源性肿瘤中,尤其是卵巢肿瘤中,都可以检测到高水平表达的叶酸受体α。卵巢上皮癌中有90%以上可见叶酸受体α的高表达,其在卵巢肿瘤中的表达水平可高于正常10～100倍。更为重要的是,叶酸受体α在早期卵巢肿瘤中有很高的阳性率。叶酸受体α为一种极具潜力的卵巢癌相关性的肿瘤抗原,可以作为卵巢肿瘤早期诊断标志物,以及卵巢肿瘤被动免疫治疗的靶点。

叶酸受体α真核表达载体的构建及在HEK293细胞中表达的鉴定

从高表达叶酸受体α的卵巢癌细胞株SKOV3中提取总RNA,RT-PCR扩增FRα基因片段,使用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切后克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切及测序鉴定;用脂质体介导法将重组质粒转染入人胚肾细胞HEK293中,并利用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色检测细胞内FRα基因的表达情况。通过RT-PCR扩增得到750 bp左右的FRα基因片段,并构建了真核表达重组质粒,经酶切、测序鉴定正确。转染HEK293细胞后,RT-PCR检测到细胞中FRαmRNA的存在,Western blot、细胞免疫荧光证明FRα蛋白在细胞中的表达。成功构建了FRα基因的真核表达重组质粒,该质粒可在真核细胞中表达FRα蛋白,这些实验结果为卵巢癌基因疫苗的研究奠定了基础。