TMPRSS3基因的VUS变异在1个耳聋家系中的致病性分析

目的针对一对耳聋夫妇和其胎儿进行家系全外显子组检测,为该家系遗传咨询提供参考和依据。方法收集该家系的临床资料,采集孕妇和其配偶的外周血和孕妇羊水,并提取基因组DNA,应用家系全外显子组测序技术进行产前遗传学检测,发现疑似致病位点进行Sanger测序验证;通过Minigene技术针对可能导致异常选择性剪切突变位点进行分析。结果孕妇携带跨膜丝氨酸蛋白酶3基因(transmembrane serine protease 3,TMPRSS3)的复合杂合疑似致病突变,孕妇配偶携带GJB2基因c.235delC的纯合致病突变。胎儿携带TMPRSS3基因复合杂合突变,分别来源于父亲的意义未明的c.323-8T>C杂合突变以及来源于母亲的c.325 C>T杂合突变;采用Minigene技术检测发现c.323-8T>C杂合突变未导致明显的剪切改变。结论TMPRSS3基因的复合杂合突变可能是导致孕妇耳聋的原因,GJB2基因纯合突变是导致孕妇配偶耳聋的原因,胎儿携带的TMPRSS3基因复合杂合突变不会导致耳聋,夫妇再生聋儿的几率很小。

144例COVID-19患者实验室部分检测指标与病情严重程度的关系

目的分析新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者实验室部分指标与病情严重程度的关系。方法收集2020年1月—3月武汉大学中南医院COVID-19患者实验室检查结果,比较COVID-19轻型及普通型(普通组)和重型及危重型(重症组)患者血常规、D-二聚体(DD)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、细胞因子以及淋巴细胞亚群等指标。采用Logistic回归分析实验室指标与病情严重程度的关系。结果重症组患者白细胞(WBC)计数、中性粒细胞百分比(NEUT%)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR),炎症指标SAA、CRP、PCT、DD、白细胞介数(IL)-6、IL-10均高于普通组患者(P<0.05),而淋巴细胞百分比(LYMPH%)明显低于普通组患者(P<0.05);重症组患者平均红细胞体积(MCV)、红细胞分布宽度(RDW)、血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)计数、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-2和IL-4与普通组患者无统计学差异(P>0.05);重症组患者淋巴细胞总数显著低于普通组患者(P<0.05),但重症组和普通组患者淋巴细胞构成无统计学差异(P>0.05)。Logistic回归分析发现,WBC计数、NEUT%、NLR、SAA、DD、CRP、IL-6和IL-10均能作为反映COVID-19病情严重程度的实验室指标(P<0.05)。结论重型及危重型COVID-19患者WBC计数、NEUT%、NLR、SAA、DD、CRP、IL-6和IL-10较轻型及普通型患者有明显变化,这些指标的变化有助于及早判断病情发展趋势。

肝细胞癌中ChREBP基因CpG岛甲基化与mRNA表达的相关性

目的检测肝细胞癌中Ch REBP基因Cp G岛甲基化水平及m RNA表达水平,并探讨两者的相关性。方法收集肝细胞癌及癌旁冰冻组织90例,采用亚硫酸氢钠处理结合克隆测序检测Ch REBP基因Cp G岛内29个Cp G位点的甲基化水平;采用荧光定量PCR检测其中31对新鲜冰冻组织中Ch REBP基因m RNA表达水平,分析甲基化水平与m RNA表达之间的关系。结果 Ch REBP基因的5、6、7、14号Cp G位点甲基化水平在肝细胞癌中显著低于其配对的癌旁组织(P<0.05)。其余Cp G位点及整体甲基化在肝细胞癌与癌旁组织中差异无统计学意义(均P>0.05)。15、18、20、23、26、29号Cp G位点在≥50岁年龄组的甲基化水平均高于<50岁年龄组(均P<0.05)。肝细胞癌中Ch REBP基因m RNA表达水平低于癌旁组织(P=0.003),但与甲基化无显著相关性(P>0.05)。结论肝细胞癌中Ch REBP基因m RNA表达水平低于癌旁组织,但这一改变可能不是通过影响DNA的甲基化水平实现的。

糖尿病合并先天性无虹膜症家系存在PAX6基因无义突变

目的探讨1个糖尿病合并无虹膜症家系成员的基因缺陷及其临床特点。方法收集1个糖尿病合并无虹膜症家系的4名患者和2名健康亲属的外周血标本,提取基因组DNA,针对人类配对盒基因（PAX6）4-13外显子设计引物,采用聚合酶链反应结合直接测序法（PCR-Sequencing）分析PAX6基因编码序列有无异常。结果在糖尿病和糖耐量异常合并无虹膜症患者中发现PAX6基因Arg240X杂合无义突变。结论 PAX6基因Arg240X无义突变可能通过影响胰岛素基因的转录,导致胰岛素分泌减少所致的糖代谢异常,同时也可能导致先天性遗传性无虹膜症的发生。

锡石,赤铁矿和石英体系选择性絮凝分离的研究

本文用不同分子量和水解度的聚丙烯酰胺作为絮凝剂,考察了赤铁矿、锡石和石英单矿物的絮凝特性,金属离子的活化作用,以及有铁离子存在时,锡石和石英难于分离的原因.研究结果认为:即使赤铁矿溶解的水溶液,其中虽含少量的铁离子,也能使锡石和石英活化,添加适量的 EDTA,六偏磷酸钠三聚磷酸钠和氟化钠可以防止锡石和石英的活化,有助于它们的分离.本文还对锡石、石英和赤铁矿三种产品的分离进行了研究,结果表明,三产品可用选择性新工艺将以分离,所得指标以优先絮凝流程优于混合絮凝流程,而且絮凝过程中发现,混合使用去活剂和添加少量的捕收剂效果良好.

同型半胱氨酸代谢相关指标对年龄相关性白内障的预测作用

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)代谢相关血浆指标对年龄相关性白内障(ARC)及其亚型的预测作用。方法收集127例ARC患者及129例健康体检者的血浆样本。全自动生化分析仪检测Hcy水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)活性及叶酸(folate)、维生素B_6(VitB_6)和维生素B_(12)(VitB_(12))的水平。利用受试者工作特征曲线(ROC)评估单个指标或联合指标对ARC及其亚型的预测价值。结果 (1)ARC组MTHFR活性和叶酸水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Hcy水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)ROC曲线显示MTHFR活性、Hcy水平及联合检测对ARC有较高的预测价值,曲线下面积(AUC)依次为0.689、0.689、0.732;预测是否发生皮质型ARC的AUC分别为0.825、0.805、0.855;后囊下型ARC的AUC分别为0.706、0.742、0.811;叶酸对后囊下型ARC有一定预测价值,AUC为0.656。结论监测MTHFR活性、Hcy、叶酸水平的变化对早期预测ARC、皮质型ARC和后囊下型ARC有一定参考价值,联合检测5项指标有助于提高准确性。

一个新的遗传性非息肉性大肠癌突变位点及其蛋白分析

目的:筛查一个遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)家系的MLH1基因突变并进行突变位点与蛋白质结构功能分析。方法:提取样本c DNA后进行MLH1、MSH2基因外显子测序;利用Poly Phen-2、Anthe_2000、swiss model PDB viewer等工具进行突变位点与蛋白质结构功能分析。结果:检出MLH1基因c.C350T,p.Thr117Met的新突变;分析得出突变型蛋白的疏水性有所升高;突变型蛋白结构突变处侧链缺失,该位点氨基酸与相邻氨基酸形成的氢键也发生了变化。结论:该家系位点突变可能造成MLH1蛋白结构功能发生改变,从而导致HNPCC的发生。

1个导致B1型短指的ROR2基因新突变的鉴定

目的对湖北省一个B1型短指(趾)家系进行基因突变分析。方法采集家系成员的外周血并提取基因组DNA,对先证者进行全外显子组测序,根据ACMG指南判定位点的致病性,发现疑似致病位点后对家系患者和未受累亲属的该突变位点进行Sanger测序验证。结果家系中所有患者临床表型符合BDB1的特征,c.2239C>T(p.R747X)这一杂合致病突变在家系中与BDB1共分离。这一突变产生了部分结构域缺失的ROR2截短蛋白,检索人类基因突变数据库(HGMD)、EXAC等多个数据库均未收录,是此前未发现的新的ROR2基因变异位点。进一步对R747及其上下游序列进行保守性分析,发现其在多个物种中高度保守。结论首次报道B1型短指(趾)ROR2基因c.2239C>T突变,丰富了ROR2基因突变谱,结合我们报道的另一个ROR2终止突变,提示ROR2基因的终止突变可能是湖北省BDB1疾病的主要致病基因突变。

应用BSP克隆测序检测肝细胞癌组织中Dynamin 3基因启动子区域甲基化水平

目的检测原发性肝细胞癌组织Dynamin 3(DNM3)基因启动子区域36个CpG的甲基化水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征的关系,探讨DNM3基因甲基化在肝癌形成过程中的作用。方法提取30对患者肝细胞癌组织和癌旁组织DNA,经亚硫酸氢盐处理后,进行巢式PCR并联合克隆测序检测DNM3基因的甲基化水平。结果肝细胞癌患者的甲基化事件发生率为83.3%(25/30)。癌组织的DNM3基因启动子区域平均甲基化率为37.8%,癌旁组织为12.0%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。DNM3基因甲基化诊断肝癌的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积(AUC)为0.831,对肝癌有较好的诊断价值。结论 DNM3作为肝细胞癌的一种抑癌基因,其启动子区域高度甲基化可能会促进肝细胞癌的形成。

1个结蛋白基因新突变致扩张型心肌病家系的临床特点及遗传分析

目的 对1个扩张型心肌病的家系进行遗传学分析,探讨其致病性基因变异位点,为遗传咨询提供数据支持。方法 收集该家系现存成员的临床资料和外周血,采用外周血DNA提取试剂盒提取白细胞基因组DNA,采用全外显子组二代测序技术筛选出与扩张型心肌病相关的可疑致病性变异,用Sanger测序对变异位点进行验证,结合家系共分离分析及多种生物信息学方法(如UniProt、PolyPhen-2和Mutation taster、ANTHEPROT、PyMOL等)综合验证和预测该变异的有害性,并根据ACMG指南对该变异位点进一步解读。结果 该扩张型心肌病家系符合常染色体显性遗传模式,患病成员均携带结蛋白基因(desmin,DES),是未曾报道过的一种杂合错义新突变DES c.140G>T(p.Ser47Ile)。生物信息学预测结果显示,该突变可改变蛋白质的二级结构,增加其疏水性并使其抗原性下降,还可使该位点原有的氢键和潜在的磷酸化位点丢失。根据ACMG指南可将该突变解读为可能致病的变异。结论 新发现的DES基因c.140G>T(p.Ser47Ile)变异可能是该常染色体显性遗传家系的致病原因,该家系患者出现临床表型的时间相对较早且预后不良,突变的检测有助于患者早期诊断与个性化的临床管理及治疗。

重型压路机替代强夯作用效能比对与运用

强夯和32 t重型压路机碾压是两种很普遍的路基土石方加固方式,这两种施工工艺无论在压实度和影响深度均大于普通光轮压路机和振动压路机,因此目前被广泛应用于路基土石方补强加固及高填方路基的施工中。由于两种路基补强技术运用上有一定差异,在效能上也不尽相同,将这种两种施工工艺的技术和作用效能进行分析比对,试验是否能相互替代使用。

公路桥梁施工裂缝的成因与对策

随着国家近年来大力投资公路基咄设施建设，我国的公路建设得到了迅猛的发展，每年都有大量的公路改建、新建的工程项目。而在公路工程中，桥梁的工程质量往往起到一个重要的作用．桥梁是公路用于跨越铁路、公路、峡谷、河流等的重要载体。公路桥梁在施工的过程中往往会不可避免地出现裂缝。裂缝对于公路桥梁工程质量的影响是致命的，甚至还有可能导致桥梁出现垮塌事件，因此，合理地采用一些行之有效的施工措施来控制和克服裂缝是极有必要的。

外周血细胞DNA甲基化作为冠心病危险因素的研究进展

冠心病是一类以动脉粥样硬化为病理基础的心血管疾病,慢性炎症是动脉粥样硬化的特征之一。外周血白细胞特别是单个核细胞,在这一过程中发挥了重要作用。最近,在一系列的全表观基因组关联研究(EWAS)中,发现了与冠心病相关的外周血白细胞多个DNA差异甲基化位点,进而提示DNA差异甲基化位点是冠心病新的危险因素。DNA甲基化作为一种常见的表观遗传核酸修饰在冠心病发生发展中的作用不断得到肯定,有成为冠心病预警标志物的潜力,也为冠心病的机制研究提供了新的思路和证据。

母源PAK3新发剪接变异导致X连锁智力障碍1例患儿的分析

目的探讨1例具有严重智力障碍和明显行为异常的患儿的遗传学病因。方法采集2020年12月2日就诊于武汉大学中南医院的1例具有智力障碍和行为异常患儿及其父母的外周血样,进行全外显子组测序,并通过Sanger测序对其家系成员进行共分离验证。采用短串联重复序列分析对患儿母亲携带的变异进行溯源,并通过minigene实验对剪接变异进行体外功能验证。结果全外显子组测序发现患儿携带母源性PAK3基因c.176-2A>G剪接变异。Sanger测序及短串联重复序列分析证实其母亲携带的变异为新发变异。Minigene实验结果证实其第2外显子存在异常剪接。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异相关指南,该变异评级为致病性变异(PVS1+PS3+PM2_Supporting+PP3)结论PAK3基因c.176-2A>G变异可能是患儿的遗传学病因。上述发现丰富了PAK3基因的变异谱,为患儿家庭的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

罕见病病例诊疗信息登记管理体系构建

罕见病病例诊疗信息登记可以为制定人群干预策略、完善诊疗服务体系、提高患者医疗保障水平、提高药物可及性提供科学依据。作者结合医院工作实践,从制定政策制度、建立组织人员架构、组织宣传罕见病诊疗政策、随访和维护罕见病病例诊疗信息登记数据等方面,介绍罕见病病例诊疗信息登记立体管理体系的构建实践,以期为罕见病患者登记制度实施过程中的管理工作提供借鉴与参考。

新型冠状病毒IgM和IgG抗体4种不同检测试剂的临床应用评价

目的探讨4种不同的新型冠状病毒(2019-nCoV)特异性免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)抗体检测试剂盒在2019-nCoV感染临床诊断中的应用。方法招募164例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者和132例同期初步排除2019-nCoV感染的疑似患者以及100名健康对照,收集临床资料和血清样本,采用3种全自动化学发光免疫分析法试剂盒(A、B和C1试剂盒,来自不同产家)和1种胶体金法试剂盒(C2试剂盒,和C1来自同一产家)进行2019-nCoV特异性IgM和IgG抗体的检测。结果A和C1试剂盒相比,对确诊病例血清IgM抗体阳性检出率分别是88.41%(61/69)和98.55%(68/69)(χ^(²)=4.279,P<0.05)。对疑似病例血清IgM抗体阳性检出率分别是8.08%(8/99)和1.01%(1/99)(χ^(²)=4.190,P<0.05),IgG抗体阳性检出率分别是10.10%(10/99)和1.01%(1/99)(χ^(²)=6.160,P<0.05)。对健康对照血清IgM抗体阳性检出率分别是11.00%(11/100)和0(0/100)(χ^(²)=9.620,P<0.05)。2种试剂盒IgM抗体检测结果有显著相关性(r=0.618,P<0.05),IgG抗体检测结果也有显著相关性(r=0.850,P<0.05)。C1和C2试剂盒相比,在确诊病例和健康对照血清中IgM和IgG抗体阳性检出率差异均没有统计学意义。A和B试剂盒相比,对确诊病例血清IgM抗体阳性检出率分别是82.00%(41/50)和54.00%(27/50)(χ^(²)=9.007,P<0.05),2种试剂盒IgM抗体检测结果有显著相关性(r=0.654,P<0.05),IgG抗体检测结果也有显著相关性(r=0.770,P<0.05)。结论血清学特异性抗体检测时间短,生物安全性更高,可作为核酸检测的重要补充在临床上广泛应用。不同厂家的试剂盒检测效果存在一定程度上的差异,特别是针对不同靶抗原的试剂更是如此,但是都已经达到免疫学检测试剂的基本要求。

2个非综合性耳聋家系GJB2基因和线粒体DNA 12S rRNA突变分析

目的:鉴定2个非综合性耳聋家系中与疾病相关的致病基因,以期对家系提供遗传咨询。方法:对2个常染色体隐性遗传非综合性耳聋家系进行听力学检查,病史采集,绘制家系图,提取受检者DNA,采用直接测序技术检测和筛查GJB2编码区、mtDNA 12SrRNA是否存在突变。结果:2个家系均符合常染色体隐性遗传非综合性耳聋,家系A患者3例,发现存在GJB2 235delC、299delAT突变,家系B患者1例,存在GJB2 235delC突变。结论:在2个家系中均发现GJB2突变,为中国人群常见突变。其中1例患者未检测到突变,应对其进行其余常见突变筛查,或外显子测序,以寻找致病基因。