幽门螺杆菌感染所致人脐静脉内皮细胞功能异常及炎性反应的作用机制研究

目的探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)通过激活转录激活因子3(STAT3)/核转录因子κB(NF-κB)通路对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、迁移、凋亡及炎性反应的影响。方法将HUVEC分为对照组(未感染Hp)和Hp感染组(Hp感染复数=25),通过倒置显微镜观察感染Hp的HUVEC形态变化;细胞计数试剂盒8细胞增殖实验和平板克隆实验检测2组HUVEC增殖能力,Transwell实验和划痕愈合实验检测HUVEC的迁移能力,流式细胞术检测HUVEC的凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应检测2组HUVEC中Hp细胞毒素相关基因A、白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)信使核糖核酸表达情况;Western blot检测HUVEC细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、原癌基因(C-Myc)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、STAT3/NF-κB信号通路蛋白表达情况。结果与对照组比较,Hp组细胞增殖、纵向、横向迁移能力明显降低,CyclinD1、PCNA、C-Myc、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,Bax、磷酸化STAT3/STAT3、磷酸化NF-κB P65/NF-κB-P65蛋白表达量和HUVEC凋亡率升高(P<0.05,P<0.01),炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-αmRNA水平升高(2.71±0.05 vs 1.06±0.41,1.42±0.02 vs 0.92±0.11,2.50±0.29 vs 1.00±0.10,5.34±0.57 vs 1.00±0.16,P<0.01)。结论Hp通过激活STAT3/NF-κB通路抑制HUVEC增殖、迁移,并诱导其凋亡和炎性反应的发生。

微量元素硒与肿瘤的关系

近几年国内外基础医学研究表明微量元素硒对肿瘤有预防和治疗作用,补硒能使其发病率和死亡率降低.本文重点综述硒与肿瘤发生发展的关系,总结了硒防癌抗癌机制,硒与消化道肿瘤、乳腺癌、前列腺癌的相关性.

亚硒酸钠对幽门螺杆菌所致小鼠胃黏膜组织损伤的免疫保护作用

目的:研究亚硒酸钠对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)所致小鼠胃黏膜组织损伤的免疫保护作用。方法:用细菌悬液灌胃BALB/C小鼠建立HP感染小鼠模型,观察亚硒酸钠对HP感染小鼠(BALB/C小鼠)胃黏膜组织病理变化及CD4、CD8细胞活性的影响。应用快速脲酶试验结合细菌培养确定HP感染。结果:1.0μg/gbw亚硒酸钠对HP感染诱发的胃粘膜组织病变有保护作用。HP可使CD4/CD8细胞比例下调,而亚硒酸钠增强CD4细胞活性,使CD4/CD8细胞比例上升。结论:硒可防止HP对小鼠胃黏膜组织的损伤。其作用机制之一是增强CD4细胞活性,使CD4/CD8细胞比例上调。

幽门螺杆菌临床菌株2148bp的cagA基因片段克隆、表达及免疫性鉴定

目的 克隆幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)临床菌株的cagA基因片段 ,构建原核表达系统 ,鉴定重组表达产物的免疫原性。方法 由于cagA基因核苷酸序列变异较大 ,选择序列相对稳定的 2 14 8bp为目的片段 (cagA1)。采用高保真PCR扩增幽门螺杆菌临床分离菌株Y0 6中的目的片段cagA1,T -A克隆后测序。构建 pET32a的cagA1片段表达载体 ,在E coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白 (rCagA1)。采用Hp全菌抗体的Westernblot鉴定rCagA1免疫反应性 ,免疫双扩散试验鉴定rCagA1免疫家兔的抗血清效价。 结果 PCR获得预期大小的目的扩增条带。与文献报道比较 ,克隆的cagA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 83%和93 30 %。所构建的原核表达系统 pET32a -cagA1-E coliBL2 1DE3目的重组蛋白 (rCagA1)表达量为细菌总蛋白的 30 %左右。Westernblot证实rCagA1能与Hp全菌抗体发生特异性免疫结合反应。兔抗rCagA1血清的免疫双扩散效价为 1∶4。结论 本文成功地构建了HpcagA基因片段cagA1的高效原核表达系统 ,所表达的rCagA1具有良好的免疫原性和免疫反应性 ,为进一步研制cagA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。

幽门螺杆菌感染胃黏膜病变中组织硒含量与p16、PCNA关系的研究

为研究幽门螺杆菌感染的胃黏膜病变中组织硒含量与p1 6、PCNA表达相互关系 ,应用免疫组化染色法检测了 1 1 4例经胃镜及病理诊断证实的五种胃黏膜病变标本中p1 6及PCNA的表达 ;应用快速脲酶试验结合Warthin -Starry银染色确定了HP感染 ;应用MK光纤压力密闭微波溶解炉及RF -1 5 0 1荧光分光光度计检测了组织硒含量。结果表明 ,各种HP感染的胃黏膜病变中 ,组织硒含量除DYS与GC无显著性差异外 (P >0 0 5 ) ,其余各组均有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,在CSG中升高明显 ,并随病变加重相对降低 (P <0 0 5 ) ,但高于正常组 (P <0 0 5 )。硒含量与PCNA表达呈负相关 (rs=-0 9898,P <0 0 5 ) ,而与p1 6表达呈正相关 (rs=0 91 4 3 ,P <0 0 5 )。p1 6表达HP阳性标本明显低于HP阴性标本 (P <0 0 1 ) ;PCNA表达HP阳性标本明显高于HP阴性标本(P <0 0 1 )。p1 6表达与PCNA表达呈负相关 (rs=-0 60 75 ,P <0 0 1 )。提示HP感染直接或间接地促进PCNA的表达 ,抑制p1 6的表达。HP感染的胃黏膜组织中硒含量明显升高 ,可能不仅是保护性的对抗活性氧增加的反应 。

硒与结肠癌研究进展

研究表明,硒与结肠癌的发生呈明显的负相关,其机制与硒能提高抗氧化损伤能力,调节DNA甲基化水平,诱导肿瘤细胞凋亡,提高机体免疫功能等因素有关.

亚硒酸钠在SGC-7901细胞生长中的抑制作用

目的:研究亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长的影响。方法:应用细胞培养和SRB实验探讨了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长曲线的影响;应用集落形成试验、分裂指数试验研究了亚硒酸钠对SGC-7901细胞集落形成和分裂指数的影响;应用流式细胞仪检测了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长周期的影响;应用电镜、TUNEL染色及流式细胞仪观察了亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡的作用。结果:亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成、分裂指数有明显的抑制作用,其抑制作用与其作用浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测显示亚硒酸钠作用SGC-7901细胞24h后,细胞周期发生改变,G1期细胞百分率减少,S期细胞百分率增加,与对照组相比有显著性差异(p<0.05);电镜下,细胞核固缩,染色质凝集呈新月形紧贴于核膜周边,核膜扭曲;DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”;TUNEL染色法检测细胞凋亡指数在10.4%～33.4%。结论:亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,其抑制作用程度与其作用浓度和时间呈正相关;亚硒酸钠通过阻滞细胞S期抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡可能是其抑制SGC-7901细胞生长的机理之一。

标准菌株和临床菌株oipA基因的检测及其核苷酸序列比对

目的:检测幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637及临床分离菌株Hp1和Hp2的oipA基因,分析其核苷酸序列,比对其与国际标准菌株Hp26695的同源性。方法:常规方法培养幽门螺杆菌,提取DNA,PCR法扩增oipA基因,检测其核苷酸序列,并比较其与Hp26695的同源性。结果:NCTC11637及Hp1、Hp2均表达oipA基因。其核苷酸序列与Hp26695比对,NCTC11637有48个突变位点、Hp1有48个突变位点、Hp2有50个突变位点,同源性均为94%。NCTC11637与Hp1的同源性为100%、与Hp2的同源性为97%。结论:NCTC11637、Hp1、Hp2均表达oipA基因,但不同菌株oipA基因的核苷酸序列有所不同。

幽门螺杆菌Cag-PAI hp0523基因的克隆及功能预测

目的：明确幽门螺杆菌Cag-PAIhp0523基因的功能，探讨其在幽门螺杆菌致病中的作用。方法：设计引物，以幽门螺杆菌NCTC11637为模板，采用聚合酶链反应（PCR）扩增获得目的片段；将其进行T-A克隆后，进行测序。将该基因序列与其他菌株做BLAST比对分析，并结合生物信息学数据库和软件，分析其序列特征和理化特性。结果：经酶切，测序分析表明，插入的基因片断为510 bp，与基因库公布的幽门螺杆菌26695及J99序列相比较，同源性高达94%；软件预测其编码的蛋白为169个氨基酸，其相对分子质量约为19.7 kDa，等电点约为9.53；基序分析表明，在33-165位氨基酸之间存在一个保守的SLT催化基序，可能是溶菌糖基转移酶；对其催化能力进行预测，结果表明，HP0523（33.7%）催化能力可能较T4溶菌酶（32.3%）和溶菌酶SLT70（28.6%）的活性高。结论：成功克隆了幽门螺杆菌Cag-PAI的hp0523基因，对其序列进行了深入分析，为进一步研究其功能，阐明幽门螺杆菌Cag-PAI的致病机制奠定了基础。

SRB法检测4HPR对HeLa细胞生长的影响

目的；检测４ＨＰＲ对ＨｅＬａ细胞生长的影响。方法；采用ＳＲＢ实验法。结果：１０６４４ｇ／ｍｌ，２μｇ／ｍｌ，４μｇ／ｍｌ，８μｇ／ｍｌ，１６μｇ／ｍｌ，的４ＨＰＲ作用２４ｈ，４８ｈ，７２ｈ后ＨｅＬａ细胞其ＯＤ值分别为１．７８，１．７７，１．７２，１．６８，１．６０，１．５９，１．５５，１．４０，１．３３，１．３２，１．１６，１．０３，０．７５，０．６９，０．５４。对照组为１．７０，１７１，１．

幽门螺杆菌空泡毒素及其致病性

幽门螺杆菌感染呈全球性分布,与多种胃部疾病有密切关系,人群感染率在50％以上。该菌分泌的空泡毒素VacA在其致病过程中起重要作用。不同幽门螺杆菌菌株的VacA存在基因型和表型的差异。不同基因型的致病性不同,不同地区的基因型分布亦不同。研究该菌VacA基因(vac4)及其产物,以及不同基因型与疾病的关系,对于进一步阐明幽门螺杆菌与临床症状的关系、幽门螺杆菌感染性疾病的防治都有十分重要的意义。

兔血清诱导Shope肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的：前期实验结果已证明兔血清对Ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞具有伤作用。本实验拟从细胞凋亡角度探讨兔血清杀伤该细胞的机理。方法：通过电子显微镜、激光共聚焦显微镜、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法，观察了兔血清诱导细胞凋亡的可能性。结果：经１０％兔血清处理３ｈ的中等分化程度的Ｓｈｏｐｅ肿瘤细胞（ＳＣＢ－６ａ）在电镜、激光共聚焦显微镜下均可见典型的细胞凋亡的形态学特征；１．５％琼脂糖凝胶电泳呈现明显的“

流式细胞仪法检测4HPR诱导Hela细胞凋亡的百分率

目的：实验结果表明４ＨＰＲ抑制Ｈｅｌａ细胞生长的机理之一是诱导该细胞凋亡。本文用流式细胞仪检测不同浓度的４ＨＰＲ作用不同时间Ｈｅｌａ细胞凋亡的百分比及细胞周期变化。方法：体外细胞培养及流式细胞仪检测法。结果：２μｇ／ｍ的４ＨＰＲ作用２４、４８、７２ｈ后，Ｈｅｌａ细胞的凋亡百分比分别为４．１％、６．６％、２６％；４μｇ／ｍｌ的４ＨＰＲ分别为５．１％、８．３％、２８％、８ｕｇ／ｍｌ的４ＨＲ分别为５．

正常兔血清杀伤shope肿瘤细胞的研究

为了研究shope肿瘤细胞,在实验过程中我们在选用正常人、牛、马、豚鼠及兔清做对照培养时,结果发现用兔血清培养的shope肿瘤细胞大部分死亡,而人、牛、马、豚鼠血清培养的shope肿瘤细胞却生长良好。由此我们建立了本试验,通过实验证明兔血清具有杀伤shope肿瘤细胞的活性,而正常人、牛、马及豚鼠血清均无此活性。该实验结果提示在正常兔血清中存在着一种具有杀伤shope肿瘤细胞活性的物质。

硒与幽门螺杆菌关系的研究进展

幽门螺杆菌(HP)感染与CSG→CAG→IM→DYS→GC的病理变化过程密切相关，且HP感染引起的胃部病变过程与人体免疫关系密切．HP致病过程与胃黏膜病变基因表达和细胞分子学行为的改变有关．而Se也与人体免疫关系密切，且Se与胃黏膜基因表达和细胞分子生物学行为的变化也关系密切．最近，有资料显示胃窦炎患者胃窦组织中Se与HP感染有关．在胃癌前病变胃黏膜损害的患者中Se水平相对降低，并有资料显示在HP感染的CSG→CAG→IM→DYS→GC过程中Se水平是有明显改变的．

亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞生长的影响

目的研究亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的影响.方法运用细胞培养法、集落形成试验及分裂指数试验探讨亚硒酸钠对SGC-7901细胞的抑制作用.结果亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成、分裂指数有明显的影响,亚硒酸钠对生长曲线、集落形成及分裂指数的抑制作用与其浓度和时间呈正相关.结论亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与其浓度和时间呈正相关.

SRB法检测4HPR对KB、SCB-5e细胞生长的影响

目的：检测４ＨＰＲ对ＫＢ，ＳＣＢ－５ｅ肿瘤细胞的抑制作用。方法：运用ＳＲＢ实验法。结果；４ＨＰＲ对于ＫＢ细胞，作用４８，７２ｈ后抑制作用较为明显；对于ＳＣＢ－５ｅ细胞，作用７２ｈ后出现抑制作用。结论：４ＨＰＲ对ＫＢ，ＳＣＢ－５ｅ两种肿瘤细胞的生长均有抑制作用。其抑制程度与４ＨＰＲ的浓度，作用时间呈正相关。

4HPR对Hela细胞的抑制作用

目的：国外文献报道４ＨＰＲ对乳腺癌具有显著的化学预防及治疗作用。本文拟探讨４ＨＰＲ对Ｈｅｌａ细胞的抑制作用。方法：运用荧光显微镜、电子显微镜、动物致癌试验及流式细胞仪分析等方法。结果：通过荧光显微镜、电子显微镜观察发现Ｈｅｌａ细胞发生明显的形态学改变；流式细胞仪检测，Ｈｅｌａ细胞ＤＮＡ出现显著改变；裸鼠致癌试验也提示４ＨＰＲ抑制Ｈｅｌａ细胞生长。

4HPR诱导Hela细胞凋亡

目的：实验结果证明４ＨＰＲ对Ｈｅｌａ细胞具有较强的抑制作用，本文从细胞凋亡角度研究４ＨＰＲ抑制Ｈｅｌａ细胞生长的机理。方法：采用电子显微镜、细胞ＤＮＡ琼旨糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法，分析４ＨＰＲ诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡的形态学、生化学及细胞生物学改变特征。结果：电子显微镜下：细胞固缩、核膜扭曲、核染色体聚集成块并靠近核膜；细胞ＤＮＡ被降解，在１．５％琼脂糖凝胶电泳上出现典型的阶梯状图谱（ＤＮＡ

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因检测及其同源性分析

目的探讨临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药机制,并进行同源性分析研究。方法用软件WHONET 5.6对连云港第一人民医院临床分离标本筛选出29株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药率统计分析;采用表型筛选试验对试验菌进行产A、B类碳青霉烯酶筛选;PCR法扩增确认相应的碳青霉烯酶酶型基因,目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析29株试验菌的同源性。选取其中6株菌作多位点序列分型(MLST)。结果 29株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物均表现出高耐药性;碳青霉烯酶表型筛选试验全部呈阳性,28株测出相应的A、B类碳青霉烯酶型,另一株未测出酶型;28株筛选试验测出A、B类酶型的菌株中26株产A类碳青霉烯酶,经PCR确定酶基因型均为KPC-2型,2株产B类金属酶,经PCR确定一株基因型为NDM-1,一株基因型为VIM-2,未测出酶型的一株菌未扩增出A、B类相关基因;29株试验菌PFGE分型结果分为3群,26株产KPC-2型碳青霉烯酶的菌株为同一群,其中17株属于同一型。选取的6株做MLST分型的菌株,MLST分型结果均属于ST11型。结论连云港第一人民医院分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要机制为产碳青霉烯酶,以产KPC-2型碳青霉烯酶为主,同时有VIM-2和NDM-1型碳青霉烯酶的检出。PFGE和MLST分析结果表明:该院存在着耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌医院感染暴发流行。