人工蝉花子实体对庆大霉素所致小鼠急性肾衰竭的影响及机制研究

目的:研究人工蝉花子实体对庆大霉素所致小鼠急性肾衰竭的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:将48只小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、维拉帕米组(阳性对照,21.43 mg/kg)和人工蝉花子实体高、中、低剂量组(5、2.5、1.25 g/kg),每组8只。除空白组外,其余各组小鼠均腹腔注射庆大霉素200 mg/kg制备急性肾衰竭模型。各组小鼠于每次注射庆大霉素2 h后灌胃相应药物,每天1次,连续7 d。末次给药4 h后,测定各组小鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和总蛋白含量,计算肾指数,测定肾组织中丙二醛(MDA)、超氧化岐化酶(SOD)含量及Na+-K+-ATP酶活性,肉眼及苏木精-伊红(HE)染色后显微镜下观察各组小鼠肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清中BUN、Scr和肾组织中MDA含量以及肾指数均显著升高(P<0.01),血清中总蛋白含量以及肾组织中SOD含量和Na+-K+-ATP酶活性均显著降低(P<0.01);肉眼观察肾组织出现肿大、充血等病理变化,显微镜下可见肾组织发生肾小管上皮细胞重度颗粒、空泡样变性以及上皮细胞大量脱落等病理损伤。与模型组比较,各给药组小鼠血清中BUN、Scr和肾组织中MDA含量以及肾指数均显著降低(P<0.01),人工蝉花子实体高、中剂量组小鼠肾组织中SOD含量以及各给药组小鼠血清中总蛋白含量和肾组织中Na+-K+-ATP酶活性均显著升高(P<0.01);各给药组小鼠肾组织的病理损伤也不同程度好转,其中尤以人工蝉花子实体高、中剂量组改善最为明显。结论:人工蝉花子实体对庆大霉素所致小鼠急性肾衰竭具有显著的保护作用,其作用机制可能与减轻肾损伤及抗氧化作用有关。

蝉花、蛹虫草和冬虫夏草药材中脂肪酸含量的比较研究

目的:建立同时测定蝉花、蛹虫草和冬虫夏草药材中脂肪酸含量的方法,并比较上述药材中脂肪酸含量的差异。方法:采用气相色谱-质谱法。色谱条件:色谱柱为TG-5MS毛细管柱,载气为氮气,流速为1.2 mL/min,进样口温度为290℃,不分流进样,开阀时间为1 min,进样量为1μL;质谱条件:离子源为电喷雾电离源,离子源温度/传输线温度为280℃,色谱柱初始温度为80℃(程序升温),电离电压为70 eV,溶剂延迟时间为5 min,扫描质量范围为m/z 30~400。结果:十四烷酸、十五烷酸、软脂酸、棕榈油酸、十七碳酸、十七碳烯酸、十八烷酸、油酸甲酯、亚油酸、花生酸、花生一烯酸、花生二烯酸、二十碳三烯酸、二十一碳酸、山萮酸、二十三碳酸、木焦油酸检测质量浓度线性范围分别为1.400~44.520μg/mL(r=0.999 8)、2.091~93.721μg/mL(r=0.999 7)、3.146~85.856μg/mL(r=0.998 2)、1.664~61.444μg/mL(r=0.998 7)、1.773~64.983μg/mL(r=0.999 5)、1.781~68.421μg/mL(r=0.999 7)、1.706~55.606μg/mL(r=0.999 8)、1.439~47.989μg/mL(r=0.999 6)、1.738~66.908μg/mL(r=0.999 6)、2.086~94.206μg/mL(r=0.999 5)、1.356~44.966μg/mL(r=0.999 4)、1.444~56.814μg/mL(r=0.999 7)、1.375~52.335μg/mL(r=0.999 8)、1.512~60.312μg/mL(r=0.999 5)、1.450~59.760μg/mL(r=0.999 7)、1.427~58.757μg/mL(r=0.999 1)、1.269~58.109μg/mL(r=0.999 3);定量限≤1 764.71 ng/mL,检测限≤529.42 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率为84.87%~108.93%(RSD为0.19%~2.23%,n=6)。蝉花、蛹虫草和冬虫夏草药材中分别含有17、16、16种脂肪酸,上述药材中不饱和脂肪酸含量均高于饱和脂肪酸含量;其中人工栽培蝉花药材样品中各种脂肪酸含量大多高于其他药材样品。结论:该方法操作简单,精密度、稳定性、重复性较好,可用于蝉花、蛹虫草和冬虫夏草药材中脂肪酸含量的同时测定;从脂肪酸含量角度讲,上述3种药材中人工栽培蝉花药材品质较优。

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中L-色氨酸和L-犬尿氨酸浓度的研究

本研究运用液相色谱-二级质谱连用技术,以3-硝基酪氨酸（3-NT）为内标,建立了可同时、快速测定大鼠血浆中L-色氨酸（L-Try）和L-犬尿氨酸（L-Kyn）的LC-MS/MS法,通过比较肝癌成模过程中L-Kyn和L-Try的变化来为肝癌的诊断提供理论依据。色谱条件：RRHD Eclipse Plus C（18）色谱柱（3.0 mm×100 mm,1.8μm）,以水-乙腈（含0.1%甲酸）（90∶10）为流动相洗脱,流速0.25 mL/min,进样量5μL。质谱条件：采用MRM模式进行定量检测,化合物质荷比分别为205.12→146.10（L-Try）,209.09→146.10（L-Kyn）,227.09→181.10（3-NT）。结果显示：L-Try和L-Kyn的线性范围分别是9.670-9 670和9.973-9 973 ng/mL（r^2≥0.999 0）,L-Try和L-Kyn的定量限分别为9.670和9.973 ng/mL,日内、日间精密度均小于15%。整个分析物的回收率均大于81.17%,并没有表现出严重的基质效应,表明肝癌成模过程中大鼠血浆L-Kyn/L-Try比值呈现整体下降趋势。L-Kyn/L-Try比值的变化是肝肿瘤形成过程中一个非常明显的变化,可为药物代谢研究和肝癌机制研究发挥重要作用。该方法灵敏、快捷、准确,专一性强,可用于药物代谢的分析研究及药物对肝癌的作用机制研究。

人工蝉花对5-氟尿嘧啶诱发大鼠肠黏膜损伤的修复作用研究

目的:研究人工蝉花对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱发大鼠肠黏膜损伤的修复作用。方法:将40只SD大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和人工蝉花高、中、低剂量(3.5、1.75、0.875 g/kg)组,每组8只。除正常组外,其余各组大鼠每日腹腔注射30 mg/kg的5-FU(0.25 g/10 m L)1次,连续5 d;同时,各组大鼠每天灌胃相应药物/生理盐水1次,连续给药8 d。给药结束后,测定各组大鼠体质量变化,苏木精-伊红染色后观察各组大鼠小肠组织病理学变化,并检测各组大鼠生物屏障相关因子[血清中内毒素(ET)、D-乳酸(D-LA)]水平和免疫屏障相关因子[血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、分泌性免疫球蛋白(sIgA)、白细胞介素15(IL-15)、集落刺激因子(G-CSF)和小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)]水平以及机械屏障相关因子(肠表面闭锁小带蛋白ZO-1和紧密连接蛋白Claudin-1)水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著减少(P<0.01);肠绒毛剥落明显,隐窝结构散乱,大量炎性细胞聚集,肠黏膜损伤严重;血清中D-LA、ET和TNF-α、IFN-γ、MPO、G-CSF水平以及小肠组织中MDA水平均显著升高(P<0.01);血清中sIgA、IL-15水平以及小肠组织中ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,人工蝉花高剂量组大鼠体质量均显著增加(P<0.01);各给药组大鼠小肠的病理变化均得到不同程度改善,其中人工蝉花高、中剂量组小肠形态接近正常组;各给药组大鼠血清中D-LA、ET和TNF-α、IFN-γ、MPO、G-CSF水平以及小肠组织中MDA水平均显著降低(P<0.01);各给药组大鼠血清中sIgA、IL-15水平以及人工蝉花高、中剂量组大鼠小肠组织中Claudin-1、ZO-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论:人工蝉花可从机械屏障、免疫屏障、生物屏障等多个方面修复5-FU所致大鼠肠黏膜损伤。